唐草片的基礎(chǔ)研究和質(zhì)量控制

邵寶平+楊莉婭+李倩+黃艷春+陳竟青+汝蕓+張敏

摘 要 本文歸納總結(jié)了近年來唐草片的藥理學(xué)及藥學(xué)研究進展。唐草片作為中藥具有清熱解毒、活血益氣的功效。現(xiàn)代藥理毒理研究表明其具有抗病毒、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化等作用，急性毒性試驗證明了唐草片的安全性，藥動學(xué)研究表明其與依非韋侖相隔1 h服用并不影響其代謝，與洛匹那韋同時使用，可以延遲洛匹那韋的吸收、推遲達峰時間、提高其生物利用度。在質(zhì)量控制方面，建立了較完善的控制標(biāo)準(zhǔn)，唐草片嚴(yán)格遵循GMP規(guī)范要求，在原先質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上繼續(xù)研究，建立了水溶性成分指紋圖譜的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞 唐草片 艾滋病 HIV 中西藥合用

中圖分類號：R286； R285 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1533（2014）21-0020-04

The basic research and quality control of TangHerb*

SHAO Baoping**， YANG Liya， LI Qian， HUANG Yanchun， CHEN Jingqing， RU Yun， ZHANG Min

（Shanghai Hundreds ace Herbal Pharmaceutical Co. Ltd.， Shanghai 201007， China）

ABSTRACT The pharmacology and pharmaceutical researches of TangHerb are summarized based on the literatures published in recent years. TangHerb as a traditional Chinese medicine has the effects of heat-clearing， detoxicating， blood circulation and nourish qi. Pharmacology researches showed TangHerb has those functions such as anti-virus， regulation of the immune and antioxidant. Acute dermal toxicity test demonstrated the safety of TangHerb. TangHerb has no impact on the pharmacokinetics of efavirenz in HIV patients when taken in an hour after efavirenz. TangHerb may delay the absorption， increase the time to reach the maximum concentration， and improve the bioavailability of lopinavir. In product quality aspect， the requirements of GMP are strictly abided by in the production of TangHerb and its quality standard was established. The HPLC fingerprint for water-soluble composition in TangHerb is established by the continuous study on the basis of the original quality standards.

KEY WORDS TangHerb； AIDS； HIV； combination of Chinese and western medicine

唐草片是我國第一個、也是目前唯一一個獲得國家食品藥品監(jiān)督管理局（CFDA）頒發(fā)新藥證書，并獲準(zhǔn)上市的治療艾滋病的純中藥制劑，具有自主知識產(chǎn)權(quán)。唐草片的處方、工藝、功能主治等都已申請了中國專利、美國專利、韓國專利、歐洲專利等。唐草片的面世改變了以往只能用西醫(yī)治療艾滋病的單一模式。在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對AIDS的認(rèn)識，經(jīng)過數(shù)百名患者的臨床實踐，最終總結(jié)出行之有效的唐草片處方。在此總結(jié)唐草片中醫(yī)藥理論、藥效和毒理學(xué)、有效成分標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)研究和生產(chǎn)、質(zhì)量控制的分析，確保新藥唐草片有效性，為臨床提供安全有效的產(chǎn)品。

唐草片的中醫(yī)藥理論

艾滋病是由人免疫缺陷病毒（HIV）感染而引起的，導(dǎo)致被感染者的免疫功能低下或喪失，繼而發(fā)生多系統(tǒng)、多器官、多病原體的各種機會性感染。

唐草片治療艾滋病的特點是清熱解毒，活血益氣。方中以老鸛草為君，臣以金銀花，氣味清香甘寒，寒能清熱解毒，甘能養(yǎng)血補虛，善于化毒，既清氣中之熱，又解血中之毒，并具清透疏解宣散之力清熱解毒；黃芪性甘而微溫，補中益氣，驅(qū)邪扶正；柴胡苦、微寒，善于和解表里，疏肝，升陽；尤以香薷一物，上之能開泄腠理，宣肺氣，達皮毛，以解在表之寒，下之能通達三焦，疏泄膀胱，利小便，以導(dǎo)在里之水。佐瓜蔞潤肺化痰，利氣寬胸；菱角益氣健脾；胡黃連清熱燥濕；訶子以斂肺、澀腸、下氣；糯稻根養(yǎng)胃止汗；之于瘀滯宛陳，佐銀杏葉、紅花、雞血藤、全蝎，蓋諸藥皆有活血化瘀，通滯，祛宛生新之功效。甘草解毒、調(diào)和諸藥，為使藥。全方組成意在“清熱解毒，活血化瘀，祛邪扶正”。諸藥配伍攻補兼施，相輔相成，使熱清而不傷正，滋補而不呆膩，故有益于艾滋病的治療[1]。

唐草片的藥效和毒理學(xué)研究

唐草片是由20余味精選中藥材經(jīng)過精選、檢驗、科學(xué)配伍、現(xiàn)代化提煉而成的中藥制劑，其中所包含的化合物結(jié)構(gòu)多樣，作用靶點較多?，F(xiàn)代藥理研究表明其有以下作用。

抗病毒

中科院昆明動物研究所免疫學(xué)實驗室對唐草片的抗體外HIV-1的作用進行研究，實驗采用MTT比色法檢測唐草片對細(xì)胞的毒性，用合胞體形成計數(shù)和抗原捕獲ELISA等方法，結(jié)果顯示，唐草片對宿主細(xì)胞基本沒有毒性，顯著抑制HIV誘導(dǎo)C8166細(xì)胞形成合胞體，唐草片在體外實驗中可有效的抑制病毒HIV-1復(fù)制[2]。

調(diào)節(jié)免疫

1） 中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院黃世敬等[3]分別應(yīng)用絲裂霉素腹腔注射和60Co射線照射造成正常小鼠骨髓抑制模型，另外設(shè)立荷瘤小鼠組接受60Co射線照射治療，上述實驗組同時加用唐草片，通過檢測外周血細(xì)胞數(shù)目、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)、體重增長等指標(biāo)，評價唐草片對放化療小鼠免疫功能的影響，研究發(fā)現(xiàn)：唐草片對絲裂霉素和60Co射線造成的小鼠骨髓抑制模型有升高白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞作用；對60Co射線的抗腫瘤作用未見有明顯的協(xié)同或拮抗作用。故認(rèn)為唐草片對放化療引起的免疫功能損傷有較好的改善作用，能修復(fù)損傷的免疫細(xì)胞，保護肝臟、延緩艾滋病的進程、防御患者的機會性感染。

2） 鄭州大學(xué)臨床藥理學(xué)教研室郭玉忠等在唐草片對注射氫化可的松小鼠的免疫保護作用[4]和唐草片對小鼠免疫功能的影響[5]研究中，采用BALB/C小鼠腹腔注射氫化可的松，造成免疫功能抑制的動物模型，觀察連續(xù)灌服唐草片的治療組與模型組動物免疫功能的差異。檢測其外周血細(xì)胞計數(shù)；測定胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)；紫外分光光度法測定碳廓清指數(shù)；ELISA法檢測鼠血清中IL-2、INF-γ；免疫組化測定空腸IgA、CD4+ T和CD8+ T細(xì)胞的表達量。研究發(fā)現(xiàn)唐草片中劑量組與模型組相比，能夠提高免疫抑制小鼠外周血白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞計數(shù)、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、碳廓清指數(shù)、血清中IL-2、INF-γ水平，增加腸黏膜中IgA、CD4+ T和CD8+ T細(xì)胞的表達量。唐草片能夠提高免疫抑制小鼠機體的免疫功能，對免疫失衡機體具有保護作用[6]。在艾滋病患者體內(nèi)免疫平衡被打破，細(xì)胞免疫嚴(yán)重缺損，標(biāo)志之一就是Th1型細(xì)胞因子（IL-2、INF-γ等）分泌大大減少[7]。因此，唐草片促進Th1型細(xì)胞因子分泌、增強細(xì)胞免疫功能的作用在艾滋病治療中可能具有重要意義。腸黏膜免疫系統(tǒng)在機體內(nèi)擔(dān)負(fù)著重要的局部防御作用。在HIV感染者體內(nèi)腸道黏膜是CD4+ T淋巴細(xì)胞刪除的主要場所，由于免疫功能的逐漸破壞也成為繼發(fā)感染的根源。分泌型IgA（SIgA）是腸黏膜主要的免疫球蛋白，對黏膜固有的和入侵的病原體具有抵抗作用。本研究研究發(fā)現(xiàn)唐草片可以促進腸黏膜IgA的分泌，增加淋巴細(xì)胞的數(shù)量，可能增強細(xì)胞免疫功能，從而改善腸道的屏障作用和免疫功能。這也可能是唐草片能夠有效改善如腹瀉、食欲不振等臨床癥狀的作用機制之一。

抗氧化

唐草片含量豐富的抗氧化、清除自由基成分與抑制病毒復(fù)制、恢復(fù)肌體功能、修復(fù)損傷細(xì)胞、改善患者癥狀緊密相關(guān)，殷建華等[8]在抗艾滋病中成藥唐草片抗氧化性的研究中發(fā)現(xiàn)，唐草片對羥自由基具有強清除作用，且清除作用較為穩(wěn)定。唐草片能抑制病毒復(fù)制、恢復(fù)肌體功能、修復(fù)損傷細(xì)胞、改善患者癥狀、防御患者的機會性感染等初步確定與其抗氧化作用緊密相關(guān)。

安全性

鄭州大學(xué)臨床藥理學(xué)教研室郭玉忠等對唐草片急性毒性試驗和國家上海新藥安全評價研究中心馬璟等對SD大鼠口服唐草片（浸膏粉）長期毒性試驗表明，唐草片小鼠經(jīng)口最大給藥量相當(dāng)于原生藥136.6 g/kg，相當(dāng)于臨床推薦劑量的233.3倍（按人體70 kg體重計算）；以1.05、2.10及4.20 g/（kg·d）劑量給SD大鼠口服唐草片（浸膏粉），以生理鹽水作對照，每日1次，連續(xù)給藥6個月，停藥后繼續(xù)觀察2個月。結(jié)果表明，對照組與給藥組均有少數(shù)動物因支氣管肺炎死亡，系自發(fā)性病變，與給藥無關(guān)。唐草片浸膏粉除引起部分雌鼠體重增長緩慢外，各劑量組動物血液學(xué)、血清生化、尿常規(guī)、病理學(xué)等檢查均未發(fā)現(xiàn)其它與給供試品有關(guān)的毒性變化，未見任何不良反應(yīng)。

唐草片與HAART合用的藥代動力學(xué)研究

目前我國采用高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療（highly active antiretroviral therapy，HAART）艾滋病，有研究表明HAART聯(lián)合唐草片治療HIV感染具有較好的免疫學(xué)治療效果和安全性。上海市公共衛(wèi)生臨床中心陳軍等[9]發(fā)現(xiàn)唐草片聯(lián)用依非韋倫，限定兩者服藥時間間隔1 h以上時，唐草片對HIV感染者中依非韋倫代謝無顯著影響，唐草片并不影響依非韋倫的血藥濃度；姚亞敏等[10]利用大鼠模型探索抗艾滋病輔助治療唐草片對洛匹那韋藥代動力學(xué)的影響，大鼠隨機分為洛匹那韋組（36 mg/kg）和唐草片聯(lián)用洛匹那韋組（洛匹那韋36 mg/kg，唐草片 864 mg/kg），灌胃給藥，高效液相色譜法（HPLC）測定給藥前后0、0.5、1、2、4、8、10、12、14、16、22 h的血藥濃度，計算藥動學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示：唐草片與洛匹那韋合并用藥后，洛匹那韋的峰濃度Cmax和曲線下峰面積AUC顯著提高、半衰期t1/2和達峰時間Tmax延長。研究提示唐草片可延遲洛匹那韋的吸收、推遲達峰時間、提高生物利用度，具體作用機制需要深入研究，臨床用藥需要考慮相互作用。

唐草片的物質(zhì)基礎(chǔ)及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

唐草片組成為：金銀花、龍葵、黃芪、雞血藤、甘草、老鸛草、白花蛇舌草、木棉花、馬齒莧、胡黃連、菱角、糯稻根、訶子、石榴皮、瓜蔞皮、紅花、銀杏葉、柴胡、香薷、全蝎。由于是20多味中藥組成的復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，分析難度大。制定快速、分離度好、可控度高的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是關(guān)鍵。根據(jù)處方中主要藥味所含的化學(xué)成分及其藥理作用，結(jié)合本產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝，對處方中的各藥味分析，選擇了主要有效成分作為控制產(chǎn)品質(zhì)量關(guān)鍵點。

唐草片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[11]中分別制定了對主要藥材老鸛草、石榴皮、糯稻根、甘草、柴胡、銀杏葉等多味藥材的薄層色譜鑒別，其方法專屬性強，陰性對照沒有干擾；檢查項應(yīng)符合片劑項下的各項規(guī)定；HPLC測定主藥金銀花中所含綠原酸的量，每片含金銀花以綠原酸（C16H18O9）計，不少于0.5 mg。周淑琴等[12]對唐草片水溶性成分HPLC指紋圖譜研究進行研究，建立了唐草片水溶性成分HPLC指紋圖譜，標(biāo)定了20個共有指紋特征峰，方法穩(wěn)定可靠，精密度高，重復(fù)性好，已經(jīng)作為企業(yè)的唐草片內(nèi)控質(zhì)量指標(biāo)。

生產(chǎn)、質(zhì)量控制

眾所周知，中藥提取物生產(chǎn)是中藥制劑的基礎(chǔ)，是提高中成藥水平的重要環(huán)節(jié)，中藥提取物生產(chǎn)主要為提取、過濾、濃縮和干燥等，其生產(chǎn)水平的高低直接影響到中成藥產(chǎn)品的優(yōu)劣。中藥的提取技術(shù)的落后是導(dǎo)致中藥制劑水平不高、產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定的關(guān)鍵因素之一。有效地控制中藥提取物質(zhì)量，實施中藥復(fù)方的現(xiàn)代化提取技術(shù)和管理，中藥提取的專業(yè)化、集約化生產(chǎn)是中藥實施現(xiàn)代化不可缺少的重要環(huán)節(jié)。唐草片工藝條件的篩選，通過采用溶媒動態(tài)提取、分離純化技術(shù)和揮發(fā)油包合技術(shù)，極大地提取了處方中的有效成分。再經(jīng)過液體干燥、制粒、壓片、薄膜包衣、流水線內(nèi)外包裝一系列制劑工藝，經(jīng)制劑成型工藝以及中試生產(chǎn)的研究，確定了最佳制備工藝，保證了處方中藥材有效成分，在全部生產(chǎn)過程中，經(jīng)過硬件及軟件的完善保證有效成分的提取，并避免過程中的氧化損耗?？茖W(xué)的制劑配方和制備過程提高了活性成分的生物利用度。

出廠前進行全面的指紋定性檢測、指標(biāo)成分的定量檢測、各種微生物限度檢測，保證出廠產(chǎn)品符合CFDA批準(zhǔn)的質(zhì)量指標(biāo)及藥典規(guī)定指標(biāo)。

上海百歲行藥業(yè)有限公司于2013年8月通過國家新版GMP認(rèn)證，整個生產(chǎn)過程嚴(yán)格按照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》的要求組織生產(chǎn)。藥品質(zhì)量首要是抓源頭，公司從物料的審計、購入、檢驗、儲存、定期復(fù)檢和生產(chǎn)投料等環(huán)節(jié)進行了嚴(yán)格監(jiān)管，通過AAS、HPLC、GC、TLC、UV、IR等手段給予全面有效的控制，尤其加強了農(nóng)藥殘留、重金屬的監(jiān)控，達到國際標(biāo)準(zhǔn)。生產(chǎn)中，從物料、標(biāo)識、設(shè)備、環(huán)境、人員、衛(wèi)生六大方面進行現(xiàn)場監(jiān)控。產(chǎn)品的生產(chǎn)和質(zhì)量健立了全面的質(zhì)量管理體系，有明確的質(zhì)量目標(biāo)，注重人員培訓(xùn)與考核，注重風(fēng)險管理，并在運行過程中不斷完善，自從唐草片上市以來，上千批的數(shù)據(jù)顯示唐草片質(zhì)量均一、穩(wěn)定、可控，在歷年的政府部門抽檢中合格率百分之百。

討論

綜上所述，唐草片有提高CD4+ T淋巴細(xì)胞計數(shù)的作用；使受損的免疫T細(xì)胞和B細(xì)胞得到恢復(fù)；使白細(xì)胞升高，促進IL-2和IFN-γ的分泌。

唐草片的基礎(chǔ)研究表明，可改善乏力、脫發(fā)、食欲減退和腹瀉等癥狀，改善活動功能狀況，增加體重，故能延緩艾滋病的進程。唐草片在免疫重建、改善癥狀方面有優(yōu)勢。唐草片的血藥濃度研究只是一個起步，已經(jīng)可以看到，采用合適的方法服用，不影響西藥的血藥濃度，而且對有些西藥可以提高其血藥濃度，我們期待著廣大臨床工作者繼續(xù)去探索。但需注意，聯(lián)合用藥時服藥的時間應(yīng)該有間隔，建議1 h左右。通過中西醫(yī)合用的研究，可以用來彌補HAART治療在臨床上的不足，有待將兩種治療方法的聯(lián)合運用。

唐草片是目前唯一獲得CFDA的用于HIV感染及艾滋病患者的純中藥制劑，在臨床應(yīng)用中貫穿中醫(yī)“清熱解毒、活血益氣”理論，有效解決由于正氣虧虛、氣滯、脾虛而引起免疫缺陷疾病。唐草片的抗HIV、抗氧化性等研究表明：多種多糖、皂苷、黃酮、酚類等活性物質(zhì)具有提高免疫、可以提高患者CD4+ T細(xì)胞、抗氧化清除自由基、保肝護肝、改善其乏力、腹瀉、消瘦等癥狀，唐草片適合用于提高患者生活質(zhì)量、減少毒副作用小，安全可靠適合于長期服用。唐草片治療艾滋病的創(chuàng)新基本理念是祛邪扶正、標(biāo)本兼顧、多靶點治療，發(fā)揮了中醫(yī)藥治療疾病的優(yōu)勢和特點，為中醫(yī)藥治療艾滋病提供了一個統(tǒng)一的、標(biāo)準(zhǔn)化的載體。

安全有效的保障在于對唐草片的生產(chǎn)全過程進行嚴(yán)格的質(zhì)量把關(guān)和制備過程的科學(xué)控制，唐草片的工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)達到了較高的水平，但還將繼續(xù)工藝優(yōu)化、提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，爭取使唐草片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)被收入國家藥典中。

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（收稿日期：2014-10-09）