他克莫司對特應(yīng)性皮炎兒童T 淋巴細胞和炎性細胞因子的影響

洪世仁（葛洲壩中心醫(yī)院檢驗科，湖北宜昌 443002）

特應(yīng)性皮炎是一種慢性免疫性疾病，主要與變應(yīng)原導(dǎo)致免疫紊亂緊密相關(guān)，包括T 淋巴細胞及炎性細胞因子等參與疾病的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸［1－2］。他克莫司為鈣調(diào)磷酸酶抑制劑，可抑制T 淋巴細胞的活化，廣泛應(yīng)用于特應(yīng)性皮炎的治療［3－4］。目前對他克莫司治療特應(yīng)性皮炎的作用機制尚未完全明確，推測其可能通過抑制機體免疫功能發(fā)揮治療作用。本研究比較他克莫司治療特應(yīng)性皮炎兒童與健康兒童T 淋巴細胞和炎性細胞因子的差異，研究他克莫司治療特應(yīng)性皮炎的機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2010年1月至2012年12月本科診治的特應(yīng)性皮炎患兒50例為研究對象（ATD組），其中男30例，女20例；年齡（5.8±2.5）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）（21.6±2.3）kg／m2。納入標準：（1）均臨床表現(xiàn)、癥狀體征和體檢確診為特應(yīng)性皮炎，符合Williams的特應(yīng)性皮炎診斷標準［5］；（2）初次診治患者，既往未行特應(yīng)性皮炎相關(guān)治療；（3）治療前血常規(guī)、尿常規(guī)和肝腎功能電解質(zhì)在正常范圍值內(nèi)；（4）排除合并其他免疫性疾病，3個月內(nèi)接受抗菌藥物、抗真菌藥物和免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素治療。另以門診健康體檢的兒童50例為對照（CON組），其中男29例，女21例，年齡（5.9±2.7）歲，BMI（21.5±2.4）kg／m2。兩組研究對象在性別、年齡和BMI方面比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 治療方法 ATD組患兒在避免接觸外來刺激、避免接觸變應(yīng)原等常規(guī)治療上給予0.03%他克莫司軟膏治療，用量用法為外用2次／日，每次間隔12h，療程3周；患兒治愈后外用2次／周，維持治療2個月。

1.3 觀察指標兩組研究對象治療前、治療后3、6、12個月均檢測如下指標：（1）淋巴細胞（Lym）和T 淋巴細胞亞群，包括CD3＋、CD4＋和CD8＋T 淋巴細胞，采用流式細胞儀檢測；（2）炎性細胞因子包括白細胞介素（IL）－4、IL－10、IL－12、IL－31、γ干擾素（IFN－γ）和腫瘤壞死因子α（TNF－α）。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測。

1.4 統(tǒng)計學處理使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料以表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料以率表示，比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 T 兩組研究對象治療前后T 淋巴細胞對比 CON組兒童治療前、治療后3、6、12個月的Lym、CD3＋、CD4＋和CD8＋均差異無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）；ATD組患兒治療后3、6、12個月的Lym、CD3＋、CD4＋和CD8＋均明顯低于治療前（P＜0.05），治療后3、6、12個月的Lym、CD3＋、CD4＋和CD8＋差異無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）；ATD 患兒治療前的Lym、CD3＋、CD4＋和CD8＋均明顯高于CON組（P＜0.05），而治療后3、6、12個月差異無統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表1。低，IL－10和IL－12依次升高。ATD組患者治療前、治療后3、6、12個月的IL－4、IL－31、INF－γ和TNF－α均明顯高于CON組（均P＜0.05），而IL－10和IL－12均明顯低于CON組（P＜0.05）。見表2。

表1 兩組研究對象治療前后T 淋巴細胞對比（，n＝50）

表1 兩組研究對象治療前后T 淋巴細胞對比（，n＝50）

續(xù)表1 兩組研究對象治療前后T 淋巴細胞對比（，n＝50）

續(xù)表1 兩組研究對象治療前后T 淋巴細胞對比（，n＝50）

注：與ATD組比較，＊P＜0.05。

表2 兩組研究對象治療前后炎性細胞因子對比（，n＝50）

表2 兩組研究對象治療前后炎性細胞因子對比（，n＝50）

注：與ATD組比較，＊P＜0.05。

3 討論

特應(yīng)性皮炎的發(fā)病與機體免疫功能紊亂密切相關(guān)，環(huán)境因素或自身遺傳背景導(dǎo)致患兒皮膚屏障功能異?；蜃儜?yīng)原引起機體免疫功能紊亂，產(chǎn)生特異性和非特異性免疫炎性反應(yīng)損傷［6］。目前發(fā)現(xiàn)與特應(yīng)性皮炎相關(guān)的免疫細胞包括樹突狀細胞（DC）、T 淋巴細胞和肥大細胞，其中相關(guān)的T 淋巴細胞包括輔助性T 細胞（Th）1、Th2和調(diào)節(jié)性T 淋巴細胞，已證實Th1／Th2細胞功能失衡是特應(yīng)性皮炎的始動因素，而調(diào)節(jié)性T 淋巴細胞調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)并維持機體免疫耐受，變應(yīng)原導(dǎo)致機體免疫耐受破壞而誘發(fā)自身免疫性疾病和變態(tài)反應(yīng)性疾?。?－8］。研究發(fā)現(xiàn)，特應(yīng)性皮炎患者外周血中T 淋巴細胞亞群高于健康人。本研究中，特應(yīng)性皮炎患者兒外周血Lym 和T 淋巴細胞亞群（CD3＋、CD4＋和CD8＋）均明顯高于健康兒童，證實T 淋巴細胞免疫反應(yīng)在特應(yīng)性皮炎發(fā)病機制中的作用。

參與特應(yīng)性皮炎發(fā)病中除了細胞免疫外，炎癥免疫因子如IL－4、IL－10、IL－12、IL－31、INF－γ和TNF－α等已證實在特應(yīng)性皮炎發(fā)病、進展和轉(zhuǎn)歸中扮演重要角色。IL－4為Th2細胞分泌的細胞因子，具有刺激T 細胞增殖和促進CD4＋T 細胞分化成Th細胞功能，研究發(fā)現(xiàn)其在特應(yīng)性皮炎小鼠模型中病變組織IL－4明顯高于正常組織［9］，而上調(diào)IL－4的表達可增強T 細胞產(chǎn)生炎性細胞因子而加重特應(yīng)性皮炎皮損［10］；IL－10是Th2細胞因子，可抑制炎癥因子產(chǎn)生，其水平降低時導(dǎo)致抑制炎癥作用下降，在特應(yīng)性皮炎患者皮損中明顯降低［11］；IL－12主要由Th1細胞分泌，可促進T 細胞和自然殺傷細胞（NK）增殖，研究發(fā)現(xiàn)特應(yīng)性皮炎患兒血清IL－12水平明顯降低［12］；IL－31由活化的T 細胞分泌，特應(yīng)性皮炎小鼠模型中搔抓行為與IL－31基因mRNA 表達正相關(guān)，可能是一種引起瘙癢的介質(zhì)［13］；INF－γ可促進T 細胞和NK 細胞增殖活化，其水平與特應(yīng)性皮炎病情密切相關(guān)；TNF－α可刺激免疫細胞分泌IL，促進局部炎性反應(yīng)，降低TNF－α可減輕特應(yīng)性皮炎小鼠的搔抓行為［14］。本研究中，ATD組患兒治療前的IL－4、IL－31、INF－γ和TNF－α均明顯高于CON組（P＜0.05），而IL－10和IL－12均明顯高于CON組（P＜0.05），證實炎性細胞因子的失衡是特應(yīng)性皮炎發(fā)病的重要機制。

他克莫司為鈣調(diào)磷酸酶抑制劑，廣泛應(yīng)用于特應(yīng)性皮炎的治療，但目前對其治療特應(yīng)性皮炎的作用機制尚未完全明確，基于他克莫司抑制T 淋巴細胞這一事實推測其可能通過抑制機體免疫功能發(fā)揮治療作用。本研究中，采用他克莫司治療特應(yīng)性皮炎兒童后，Lym、CD3＋、CD4＋、CD8＋、IL－4、IL－31、INFγ和TNF－α均明顯降低，IL－10和IL－12明顯升高，表明他克莫司具有降低特應(yīng)性皮炎兒童T 淋巴細胞、IL－4、IL－31、INF－γ和TNF－α作用，其中治療3個月后IL－4、IL－10、IL－12、IL－31、INF－γ和TNF－α降低最明顯，表明他克莫司治療特應(yīng)性皮炎具有起效快的優(yōu)點；進一步研究發(fā)現(xiàn)，治療后6、12個月的Lym、CD3＋、CD4＋、CD8＋、IL－4、IL－10、IL－12、IL－31、INF－γ和TNF－α的差異不大，但仍高于健康兒童，表明他克莫司治療特應(yīng)性皮炎有效期短，該結(jié)果與臨床上特應(yīng)性皮炎治療后易反復(fù)現(xiàn)象一致。綜合以上研究結(jié)果，作者推測他克莫司通過改善T淋巴細胞和炎性細胞因子發(fā)揮對特應(yīng)性皮炎的治療作用。

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