從模型大鼠肺腸功能與組織形態(tài)的變化探討肺與大腸在病理上相互傳變的特點(diǎn)

鄭秀麗 楊 宇 王寶家 王 菊 唐洪屈 惠 毅

(成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都，610075)

“肺與大腸相表里”是頗具中醫(yī)特色的臟腑相關(guān)理論之一。中醫(yī)理論中認(rèn)為，肺與大腸通過(guò)經(jīng)脈的相互絡(luò)屬構(gòu)成表里關(guān)系，二者一表一里，一臟一腑，一陰一陽(yáng)，一藏一瀉，共同調(diào)節(jié)維護(hù)著機(jī)體的正常生理功能，使機(jī)體內(nèi)外上下保持協(xié)調(diào)統(tǒng)一。肺主宣發(fā)肅降，通調(diào)水道，大腸主傳導(dǎo)化物，如肺氣宣降失司，甚者可致腸腑之氣無(wú)法承順下降，腸道推動(dòng)之力障礙，排便困難。若肺通調(diào)水道和津液布達(dá)失職，甚者則可致津液無(wú)法下達(dá)于腸腑，出現(xiàn)腸道津液干枯，無(wú)水舟停，大便困難?？梢?jiàn)，肺與大腸在病理狀態(tài)下可以相互影響或相互傳變，出現(xiàn)肺病及腸或腸病及肺。肺與大腸在病理上相互傳變是“肺與大腸相表里”理論所蘊(yùn)含的重要內(nèi)容之一。因此，本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)觀察“肺病”和“腸病”模型大鼠的肺腸功能和肺腸組織形態(tài)的同步動(dòng)態(tài)變化情況，探討肺與大腸在病理上相互傳變的特點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 1)動(dòng)物:雄性SPF級(jí)SD大鼠130只，體重(180±20)g，購(gòu)自成都達(dá)碩生物科技有限公司(動(dòng)物合格證號(hào):scxk(川)2008－24)。2)實(shí)驗(yàn)藥品:天下秀香煙(川渝中煙工業(yè)公司，焦油含量:12 mg)、三硝基苯磺酸(TNBS，SIGMA公司，批號(hào):109k5008)、無(wú)水乙醇(山東利爾康消毒科技有限公司，批號(hào):2010611)、水合氯醛(江蘇省昆山市石浦年沙助劑廠，批號(hào):080120)、生理鹽水(四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字H51021158)等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 所有大鼠常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，隨機(jī)將動(dòng)物分成空白對(duì)照(60只)、肺病模型組(35只)、腸病模型組(35只)。其中，肺病模型組根據(jù)模型成功時(shí)間分別在造模第20天、第50天、第70天隨機(jī)抽取模型動(dòng)物10只處死觀察。腸病模型組根據(jù)模型成功時(shí)間分別在造模第8天、第29天、第50天隨機(jī)抽取模型動(dòng)物10只處死觀察?？瞻讓?duì)照組分別于上述各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)抽取10只處死與相應(yīng)的模型組進(jìn)行對(duì)比觀察。

1.2.2 模型制備 1)肺病模型的建立方法:采用煙熏法復(fù)制慢性支氣管炎模型[1]。自制550 mm×330 mm×390 mm的煙熏箱(規(guī)格根據(jù)鋼絲籠大小而確定)，頂部對(duì)角留兩個(gè)2 mm×3 mm的通氣孔，將模型組大鼠(35只)分別裝入鋼絲籠內(nèi)，每籠11～12只，自制四面封閉的立方形玻璃器皿，其內(nèi)放置鐵絲網(wǎng)，香煙每份8支，點(diǎn)燃后分別放置于鋼絲網(wǎng)上，將裝入大鼠的鋼絲籠放置于玻璃器皿上，并將煙熏箱罩于鋼絲籠外，15 min后放置第二批香煙，煙熏50 min/次，3次/d(9:00/14:00/19:00)，煙熏天數(shù)根據(jù)模型需要分別為20 d，50 d和70 d。模型成功的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[2]。空白組大鼠不進(jìn)行煙熏。2)腸病模型的建立方法:以三硝基苯磺酸(TNBS)－乙醇相結(jié)合的方法誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型[3]。大鼠以2.4%水合氯醛0.8～1.0 mL/100 g腹腔注射麻醉后，在石蠟油潤(rùn)滑下，經(jīng)腸道輕緩插入輸液管至距肛門(mén)8 cm處將100 mg/kg TNBS加入等體積50%乙醇，注入大鼠結(jié)腸，然后注入約0.5 mL空氣，將大鼠頭部向下傾斜45度放置1 min，然后保持平躺自然清醒。空白對(duì)照組大鼠按上述方法給予等量生理鹽水灌腸。造模3 d后從模型組隨機(jī)抽取2只大鼠，取結(jié)腸組織，做普通光鏡下病理形態(tài)學(xué)觀察，確定模型是否復(fù)制成功。于首次造模后每7 d按上述方法和劑量對(duì)模型組大鼠重復(fù)造模，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。空白對(duì)照組大鼠按上述方法給予等量生理鹽水灌腸。

1.2.3 檢測(cè)方法 1)肺功能:以2.4%水合氯醛1.2～1.4 mL/100 g腹腔注射麻醉后，大鼠仰臥位固定于手術(shù)板上，打開(kāi)胸腔暴露氣管，切開(kāi)約1 cm切口，將氣管插管置入并固定，觀察大鼠的呼吸頻率、潮氣量、每分鐘通氣量并予以記錄。2)胃腸功能:胃內(nèi)殘留率:大鼠禁食24 h后，用5%炭末與10%羧甲基纖維素鈉制成懸混液[4]，以 20 mL/kg的劑量灌胃，30 min后以2.4%水合氯醛1.2～1.4 mL/100 g腹腔注射麻醉，取全胃，沖洗后稱(chēng)胃全重，清除胃內(nèi)容物后稱(chēng)胃空重，前后差值除以胃全重即為胃殘留率。小腸推進(jìn)率:上述步驟取全胃后，分離腸系膜，剪取幽門(mén)至回盲部的腸管，不加牽引平鋪于玻璃板上，測(cè)其全長(zhǎng)和炭末前沿至幽門(mén)的距離，計(jì)算其與全長(zhǎng)的百分比，即推進(jìn)百分率。3)肺腸組織病理形態(tài)觀察:剖開(kāi)胸腹，剪取右肺上葉和結(jié)腸組織，10%甲醛固定，常規(guī)乙醇梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，制成厚度為4 μm切片。HE染色后行普通光鏡觀察，錄入OLYMPUS DP70彩色圖文系統(tǒng)，并進(jìn)行攝像。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以(±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 肺病模型的肺腸功能與組織形態(tài)變化情況

2.1.1 肺病(慢性支氣管炎)模型大鼠肺功能和胃腸功能的同步動(dòng)態(tài)觀察結(jié)果 肺功能:見(jiàn)表1。與造模第20天比較，模型組大鼠造模第50天、第70天潮氣量和每分鐘通氣量均降低(P＜0.01);與造模第50天比較，模型組大鼠造模第70天潮氣量和每分鐘通氣量無(wú)明顯變化(P＞0.05)。胃腸功能:見(jiàn)表2。與造模第20天比較，模型組大鼠造模第50天、第70天胃內(nèi)殘留率升高，小腸推進(jìn)率降低(P＜0.01);與造模第50天比較，模型組大鼠造模第70天胃內(nèi)殘留率升高，小腸推進(jìn)率降低(P＜0.01)

2.1.2 肺病(慢性支氣管炎)模型大鼠肺組織和腸組織的同步動(dòng)態(tài)觀察結(jié)果 見(jiàn)表3。模型組第20天全部出現(xiàn)支氣管上皮細(xì)胞變性、壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn);同時(shí)，40%的大鼠結(jié)腸出現(xiàn)病理改變，如出現(xiàn)灶性壁附上皮細(xì)胞變性、壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，多小灶性糜爛，片狀糜爛等。造模第50天，模型組的肺部病變加重，出現(xiàn)支氣管處廣泛上皮細(xì)胞變性、壞死，慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn);同時(shí)70%的大鼠結(jié)腸出現(xiàn)病理改變，如出現(xiàn)灶性上皮細(xì)胞變性、壞死，慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)等。造模第70天，模型組的肺部病變繼續(xù)存在，出現(xiàn)支氣管上皮細(xì)胞變性、壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，修復(fù)細(xì)胞等。同時(shí)，80%的大鼠結(jié)腸出現(xiàn)病理改變，如出現(xiàn)灶性上皮細(xì)胞變性壞死，多小灶性糜爛等。

2.2 腸病(潰瘍性結(jié)腸炎)模型的肺腸功能與組織形態(tài)變化情況

2.2.1 腸病(潰瘍性結(jié)腸炎)模型大鼠肺功能和胃腸功能的同步動(dòng)態(tài)觀察結(jié)果 肺功能:見(jiàn)表4。與造模第8天比較，模型組大鼠造模第29天、第50天潮氣量均降低(P＜0.01或P＜0.05);與造模第29天比較，模型組大鼠造模第50天潮氣量降低(P＜0.01)。第29天每分鐘通氣量無(wú)明顯變化(P＞0.05)，第50天每分鐘通氣量降低(P＜0.05);與造模第29天比較，模型組大鼠造模第50天每分鐘通氣量降低。胃腸功能:見(jiàn)表5。與造模第8天比較，模型組大鼠造模第29天、第50天胃內(nèi)殘留率均升高(第29天P＜0.05，第50天P＜0.01)，而小腸推進(jìn)率均降低(P＜0.01)。與造模第29天比較，模型組大鼠造模第50天胃內(nèi)殘留率升高，小腸推進(jìn)率均降低(P＜0.01)。

2.2.2 腸病(潰瘍性結(jié)腸炎)模型大鼠肺組織和腸組織的同步動(dòng)態(tài)觀察結(jié)果 見(jiàn)表6。模型組第8天全部出現(xiàn)結(jié)腸病理改變，如上皮細(xì)胞廣泛糜爛，隱窩膿腫等;同時(shí)，50%的大鼠肺部出現(xiàn)病理改變，如出現(xiàn)支氣管上皮細(xì)胞變性壞死等。造模第29天，60%的大鼠肺部出現(xiàn)病理改變，如出現(xiàn)支氣管上皮細(xì)胞變性、壞死，慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)等。造模第50天，仍然是60%的大鼠肺部存在病理改變。但病理?yè)p害程度比第29天嚴(yán)重。如出現(xiàn)支氣管上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落，管腔內(nèi)炎性滲出等。

表1 肺病大鼠肺功能測(cè)定結(jié)果比較(n=10，±s)

表1 肺病大鼠肺功能測(cè)定結(jié)果比較(n=10，±s)

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表2 肺病大鼠胃腸功能測(cè)定結(jié)果比較(n=10，±s)

表2 肺病大鼠胃腸功能測(cè)定結(jié)果比較(n=10，±s)

注:以上兩表中，空白組與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。模型組間比較:與第20天比較，△P＜0.05，△△P＜0.01;與第50天比較，▲P＜0.05，▲▲P ＜0.01。

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表3 肺病模型大鼠病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果

表4 肺病大鼠肺功能測(cè)定結(jié)果比較(n=10，±s)

表4 肺病大鼠肺功能測(cè)定結(jié)果比較(n=10，±s)

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表5 肺病大鼠胃腸功能測(cè)定結(jié)果比較(n=10，±s)

表5 肺病大鼠胃腸功能測(cè)定結(jié)果比較(n=10，±s)

注:以上兩表中，空白組與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。模型組間比較:與第8天比較，△P＜0.05，△△P＜0.01;與第29天比較，▲P＜0.05，▲▲P ＜0.01。

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表6 腸病模型大鼠病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果

3 討論

肺與大腸臟腑表里相關(guān)學(xué)說(shuō)是臟象學(xué)說(shuō)中一個(gè)較有特色的理論[5]，近年來(lái)，關(guān)于“肺與大腸相表里”的研究逐漸深入細(xì)致，從文獻(xiàn)到臨床，從胚胎學(xué)到免疫學(xué)，從內(nèi)分泌學(xué)到現(xiàn)代分子生物學(xué)，不斷從細(xì)胞水平、分子水平等各個(gè)層次探討肺腸相關(guān)的機(jī)制，以及各種機(jī)制間的內(nèi)在聯(lián)系[6]。課題組前期研究已通過(guò)肺病(過(guò)敏性哮喘)模型和腸病(便秘)模型初步發(fā)現(xiàn)“肺”與“大腸”在病理下相互影響[7－11]，且特異相關(guān)[12－14]。在前期證實(shí)肺與大腸在病理上相互影響的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)旨在進(jìn)一步探討肺與大腸在病理上相互傳變的特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)有三:1)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的選擇上，肺病模型選取的是慢性支氣管炎，腸病模型選擇的是潰瘍性結(jié)腸炎，二者皆是慢性非特異性炎癥疾病，只是一個(gè)在肺部，一個(gè)在腸道，這樣有利于增強(qiáng)肺腸之間傳變的同步可比性。2)在觀察方法上，肺病和腸病模型均分別設(shè)立有3個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)進(jìn)行肺腸的同步觀察，體現(xiàn)動(dòng)態(tài)觀察肺腸之間傳變過(guò)程的思路。肺病和腸病之間觀察時(shí)間節(jié)點(diǎn)的差異主要在于慢支炎和結(jié)腸炎造模成功所需時(shí)間的差異。3)在觀察指標(biāo)上，主要從肺腸的功能和形質(zhì)兩方面進(jìn)行觀察，體用結(jié)合。

從肺病模型大鼠的肺腸功能和組織形態(tài)變化可以看出，肺病模型在肺部病變加重的同時(shí)，腸腑病變同步加重，在模型第50天腸腑出現(xiàn)顯著病變。從腸病模型大鼠的肺腸功能和組織形態(tài)變化可以看出，腸病模型在腸部病變加重的同時(shí)，肺臟病變同步加重，在模型第8天肺臟出現(xiàn)顯著病變。

研究結(jié)果表明，“肺”與“大腸”是否發(fā)生傳變，主要取決于原病臟腑的病理?yè)p傷程度?！胺尾〖澳c”“腸病及肺”需具備一定的發(fā)生條件。肺與大腸之間是否發(fā)生傳變，主要取決于肺與大腸病變的病理?yè)p傷程度。肺或腸病變的程度越加重，則肺與腸之間的傳變?cè)矫黠@。肺臟病變程度越重，則腸腑病變?cè)街?腸腑病變程度越重，則肺臟病變程度越重。

同時(shí)，“肺”與“大腸”傳變引起的病理?yè)p傷程度，與原病臟腑的病變時(shí)間成正比。肺與大腸之間的傳變還在一定程度上受時(shí)間的影響。一般而言，原發(fā)病變部位出現(xiàn)病變的時(shí)間越長(zhǎng)，則傳變?cè)矫黠@。隨著病變時(shí)日的增加，肺臟與腸腑的病變出現(xiàn)同步加重。

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[2]惠毅.基于肺病模型大鼠病理形態(tài)學(xué)及相關(guān)調(diào)控物質(zhì)變化探討“肺病及腸”病理傳變規(guī)律及其機(jī)制[D].成都:成都中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

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