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    雞源大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測與分析

    2014-11-18 00:34:08張玉果馮海光
    今日畜牧獸醫(yī) 2014年12期
    關(guān)鍵詞:雞源埃希氏高敏

    張玉果,馮海光

    (1.邯鄲市神康藥業(yè)有限公司,河北邯鄲056011;2.河南省鶴壁市山城區(qū)畜牧局,河南鶴壁458000)

    雞大腸桿菌病是由埃希氏大腸桿菌(E.coli)的某些致病性菌株所引起的多種疾病的總稱,也是對養(yǎng)雞業(yè)危害嚴(yán)重及常見的一種細(xì)菌性疾病,臨床癥狀和病理變化多變,且多與病毒性疾病和其他細(xì)菌性疾病并發(fā),給養(yǎng)雞業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。隨著我國畜牧業(yè)的發(fā)展,盲目大量濫用抗生素現(xiàn)象普遍發(fā)生。有的養(yǎng)雞場從購入雛雞開始就不斷喂服抗菌藥物,直至出欄上市為止,還有的養(yǎng)雞場在飼料中不合理地混合添加抗菌藥物,免疫注射時也給予大量的抗菌藥物,導(dǎo)致大腸桿菌的耐藥菌株不斷出現(xiàn),耐藥譜不斷擴(kuò)大,一旦發(fā)病,很多藥物都難以奏效;同時也加劇了抗菌藥物在畜禽體內(nèi)的殘留,給我國畜牧業(yè)的持續(xù)發(fā)展和人類的身體健康帶來潛在危害。這就需要對雞源大腸桿菌進(jìn)行藥敏試驗,以便準(zhǔn)確有效地篩選出高敏藥物進(jìn)行治療。

    近年來,埃希氏大腸桿菌的耐藥性呈上升趨勢。20世紀(jì)50年代禽致病性埃希氏大腸桿菌幾乎沒有耐藥性產(chǎn)生,而60年代的分離株對鏈霉素、四環(huán)素產(chǎn)生了耐藥性,20世紀(jì)70年代對氨芐西林、氯霉素、磺胺甲基異惡唑等產(chǎn)生了耐藥性,80年代至90年代初對阿莫西林、慶大霉素、卡那霉素、萘啶酸、頭孢塞吩等產(chǎn)生了耐藥性。隨著時間的推移,埃希氏大腸桿菌的耐藥率大幅度上升,多重耐藥菌株劇增,耐藥譜增寬,臨床上分離的埃希氏大腸桿菌對環(huán)丙沙星的耐藥性已居耐藥性的首位。據(jù)報道,微生物對大多數(shù)喹諾酮類藥物的耐藥率達(dá)10%以上,而在歐美等發(fā)達(dá)國家,埃希氏大腸桿菌對喹諾酮類藥物均很敏感,耐藥率一般只有5%左右;在我國部分地區(qū)埃希氏大腸桿菌對大多數(shù)喹諾酮類藥物的耐藥率卻高達(dá)40%以上。產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的埃希氏大腸桿菌現(xiàn)已分布全球各個角落,它們的流行呈增長趨勢,也導(dǎo)致埃希氏大腸桿菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥性遍及全世界。

    大腸桿菌抗原性復(fù)雜、血清型多樣,特別是在規(guī)?;B(yǎng)雞業(yè)的迅速發(fā)展下,雞源大腸桿菌新的血清型又在不斷出現(xiàn),且其不同的菌株對同一種抗菌藥物的敏感性也不相同,使得抗菌藥物的防治效果越來越差,獸醫(yī)工作者不能很好地掌握藥物對其的敏感程度。因此,對雞源大腸桿菌的耐藥性進(jìn)行監(jiān)測與分析,對于指導(dǎo)臨床合理用藥及控制本病的流行非常重要。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    1.1.1 培養(yǎng)基:普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基,北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠生產(chǎn)。

    1.1.2 藥敏試紙片:由鶴壁市山城區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心提供。

    1.1.3 菌株:由鶴壁市動物疫病預(yù)防控制中心提供(20株)。

    1.1.4 器材:恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、酒精燈、顯微鏡、移液器、滴頭、鑷子、標(biāo)簽、記號筆、直尺。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 培養(yǎng)基的制備

    稱取普通營養(yǎng)瓊脂45克、麥康凱瓊脂23克,分別置于兩個潔凈三角燒瓶中,然后各加入滅菌蒸餾水1000毫升、500毫升,加熱煮沸溶解后放入高壓蒸汽鍋內(nèi)121℃滅菌20分鐘;當(dāng)瓊脂溫度降到55℃時,在超凈工作臺上分別均勻地倒入滅菌的平皿內(nèi),每個滅菌的平皿倒入15毫升,待凝固后置37℃恒溫箱中培養(yǎng)18小時;放入4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.2 菌株的培養(yǎng)

    用接種環(huán)釣取少許菌株,常規(guī)劃線接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,進(jìn)行純培養(yǎng)。而后釣取純培養(yǎng)的菌落接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)24小時,見生長出磚紅色菌落;再挑取純培養(yǎng)的菌落涂片、革蘭氏染色、鏡檢,呈單個散在或成對的革蘭氏陰性紅色小桿菌。根據(jù)上述細(xì)菌培養(yǎng)特性和染色鏡檢,可初步驗證為大腸桿菌,純培養(yǎng)菌落備用。

    1.2.3 試驗操作方法——藥敏片法

    藥敏試驗:按WHO推薦的藥敏片法進(jìn)行。本法是根據(jù)抑菌環(huán)直徑大小來判定細(xì)菌對抗菌藥物的高敏、中敏、耐藥的方法。該方法的優(yōu)點是操作簡單、易于掌握;缺點是費時,只能進(jìn)行半定量測定。

    用接種環(huán)釣取l環(huán)純培養(yǎng)的大腸桿菌,置于1毫升滅菌生理鹽水中,充分混勻后用滅菌吸管吸取此液,均勻的布滿于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的整個表面;待營養(yǎng)瓊脂表面稍作干燥后,用滅菌鑷子取各種藥敏紙片均勻貼到營養(yǎng)瓊脂表面,(為保證藥敏紙片與營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面完全接觸,各個藥敏紙片都應(yīng)用滅菌鑷子輕壓一下)每個平板放6張藥敏試紙片,37℃培養(yǎng)24小時;觀察結(jié)果,用直尺測定抑菌圈的直徑。整個操作過程都應(yīng)注意無菌操作,避免雜菌污染。

    1.2.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

    按抑菌圈的直徑大小作為敏感性高低的判斷標(biāo)準(zhǔn)。抑菌圈大表明細(xì)菌對該藥物的敏感性高,耐藥性低;反之,則表明細(xì)菌對該藥物的敏感性低,耐藥性高。藥敏紙片的種類及判定標(biāo)準(zhǔn)見表1。

    表1 藥敏紙片的種類及判定標(biāo)準(zhǔn)

    2 試驗結(jié)果與分析

    2.1 20株雞源大腸桿菌菌株來源情況見表2

    表2 20株雞源大腸桿菌菌株的來源情況

    2.2 20株雞源大腸桿菌對12種藥物的耐藥情況見表3

    由表3可以看出,20株雞源大腸桿菌對12種抗菌藥物都有不同程度的耐藥性。青霉素、四環(huán)素對其完全沒有作用,全部耐藥;紅霉素、利福平對其作用也很小,沒有對其產(chǎn)生高敏;而阿米卡星、頭孢曲松和頭孢唑啉的敏感性較高。具體統(tǒng)計結(jié)果見表4。

    表3 20株雞源大腸桿菌對12種藥物耐藥情況

    由表4可以看出:對雞源大腸桿菌產(chǎn)生嚴(yán)重耐藥性的藥物依次是青霉素、四環(huán)素、林可霉素、環(huán)丙沙星、紅霉素、蒽諾沙星,這6種藥物的耐藥率都大于50%,耐藥最為嚴(yán)重的是青霉素,達(dá)到了100%;對大腸桿菌中度敏感的藥物依次是:頭孢唑啉、諾氟沙星、卡那霉素,中敏率分別是60%、55%、50%;高敏的藥物分別是:氟苯尼考、頭孢曲松、阿米卡星,高敏率分別是70%、65%、60%。

    2.3 不同地區(qū)分離菌株耐藥性比較見表5

    由表5中可以看出,不同地區(qū)雞源大腸桿菌的耐藥情況不同,敏感藥物也不一樣,因此應(yīng)根據(jù)各地的實際情況合理用藥。

    3 討論

    從試驗結(jié)果看,大多數(shù)雞場的大腸桿菌存在著廣泛的耐藥性,這給藥物治療帶來了很大的難度,造成這種局面與下列因素有關(guān):養(yǎng)殖戶用藥過程中選藥、劑量、療程不當(dāng);存在嚴(yán)重濫用藥物現(xiàn)象,常常在未確定病因的情況下,大量使用各種各樣的抗菌藥;目前獸藥市場相當(dāng)混亂,同一有效成分命名五花八門,誤導(dǎo)了專業(yè)戶;假冒偽劣獸藥產(chǎn)品充斥市場,個別獸藥廠家產(chǎn)品的有效成分含量不足,標(biāo)記的劑量、療程常不能達(dá)到治療效果。

    3.1 大腸桿菌耐藥性產(chǎn)生的機(jī)制

    表4 藥敏試驗結(jié)果統(tǒng)計

    表5 不同地區(qū)分離菌株耐藥性比較

    3.1.1 一是先天性獲得,主要是由于其細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)特點決定,先天性獲得耐藥性的變化一般不大。

    3.1.2 二是后天性獲得,主要是由于耐藥性質(zhì)粒的產(chǎn)生,如:R質(zhì)粒。R質(zhì)粒的主要特征:一是能通過細(xì)菌與細(xì)菌間的接觸,由耐藥菌株轉(zhuǎn)移到敏感菌株,從而使原來的敏感菌株獲得耐藥性;另一特征是有自我復(fù)制的功能,在細(xì)胞分裂時,R質(zhì)粒也同時進(jìn)行復(fù)制從而使子細(xì)胞也帶有耐藥質(zhì)粒。R質(zhì)粒的耐藥機(jī)制有:質(zhì)粒基因編碼產(chǎn)生各種鈍化酶分解抗生素;耐藥性質(zhì)??刂埔恍┘?xì)菌的細(xì)胞膜通透性,使抗菌藥物不能進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi),從而使細(xì)菌具有耐藥性;耐藥質(zhì)粒的基因編碼產(chǎn)生一些特殊的酶,阻止抗生素與細(xì)胞內(nèi)靶子結(jié)合而產(chǎn)生抗藥性。R質(zhì)粒的傳播是細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的重要原因之一,特別是在規(guī)?;B(yǎng)殖條件下,R質(zhì)粒更易在細(xì)菌之間傳播,造成耐藥菌株的廣泛產(chǎn)生。

    3.2 解決其耐藥性的對策

    3.2.1 合理用藥、謹(jǐn)慎用藥和正確使用抗菌藥物

    在臨床選用抗菌藥物治療雞大腸桿菌病時,要考慮本場的用藥習(xí)慣,選擇少用或未曾用過的藥物,避免單一和長期重復(fù)使用同一種抗菌藥物。一旦選定了正確的抗生素,下一步就要確定準(zhǔn)確的藥物劑量、頻率和療程。最好在分離病原菌的基礎(chǔ)上先做藥敏試驗,選用高敏藥物,這樣才能達(dá)到理想的治療效果。

    另外,在選擇高敏藥物進(jìn)行治療時,還要考慮這些高敏藥物的吸收途徑,因為我們所做的藥敏試驗是藥液直接和細(xì)菌接觸,而在給雞用藥時,必須通過機(jī)體的吸收才能使藥物達(dá)到一定的效果,所以在給雞用藥時,高敏藥物一定要配合適宜的給藥途徑,這樣才能達(dá)到最好的治療效果。

    3.2.2 聯(lián)合用藥

    主要是利用抗菌增效劑與某些藥物的協(xié)同作用。通過聯(lián)合用藥可以擴(kuò)大抗菌譜,增強(qiáng)療效、減小藥物用量、降低或避免毒副作用,進(jìn)而減少或延緩耐藥菌株的產(chǎn)生。

    3.2.3 應(yīng)用中草藥治療

    許多中草藥具有抑制和殺滅細(xì)菌作用,清熱解毒類中藥也廣泛用于防治感染類疾病,并具有較好療效和較低毒副殘留及抗藥性等優(yōu)點。

    3.2.4 應(yīng)用微生態(tài)制劑治療

    微生態(tài)制劑可以促進(jìn)雞體內(nèi)正常微生物菌群的建立,使得正常菌群占據(jù)整個消化道,而后進(jìn)入的致病菌就難以在消化道壁上找到附著點,從而競爭性地抑制了致病性大腸桿菌的生存。

    4 小結(jié)

    4.1 對鶴壁市動物疫病預(yù)防控制中心提供的20株雞源大腸桿菌菌株進(jìn)行藥敏試驗結(jié)果表明:青霉素、四環(huán)素、林可霉素、環(huán)丙沙星、紅霉素、蒽諾沙星嚴(yán)重耐藥;頭孢唑啉、諾氟沙星、卡那霉素中敏;氟苯尼考、阿米卡星、頭孢曲松高敏,因此,臨床上應(yīng)選擇上述高敏藥物進(jìn)行治療。

    4.2 近年來,由于人們對抗生素的廣泛大量應(yīng)用,使得一些藥物過去有效而現(xiàn)在無效;或者在這個雞場有效而在另外一個雞場無效;并且其產(chǎn)生耐藥性的速度也比較快。因此,在臨床用藥過程中我們應(yīng)當(dāng)先做藥敏試驗,篩選出高敏藥物,且選擇正確的給藥途徑,將這些高敏藥物交替或聯(lián)合使用,同時大力推廣應(yīng)用中草藥和微生態(tài)制劑進(jìn)行治療,再配合科學(xué)的飼養(yǎng)管理和加強(qiáng)環(huán)境消毒等措施,以達(dá)到最佳的治療效果,從而減少其耐藥機(jī)率的發(fā)生。

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