Vitek2Compact和MicroScan WalkAway40SI檢測MRSA的性能評價

魏丹丹，劉洋，萬臘根

(南昌大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，江西 南昌 330006)

金黃色葡萄球菌是醫(yī)院和社區(qū)獲得性感染的常見病原菌之一,可引起皮膚軟組織感染和身體其他部位的廣泛感染以及食物中毒[1]。隨著抗生素的廣泛應用,自1961年英國出現(xiàn)了第一株對甲氧西林耐藥且mecA基因陽性的金黃色葡萄球菌 (MRSA)以來[2],MRSA的感染率迅速猛增,MRSA對所有β-內(nèi)酰胺類抗生素的固有耐藥性及其多重耐藥性已嚴重影響了臨床抗感染的治療[3],因而對MRSA準確鑒定以指導臨床醫(yī)生合理使用抗生素顯得尤為重要。本研究旨在通過對Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI兩臺全自動微生物鑒定儀對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的檢出性能進行評價，以期更好地指導臨床合理使用抗生素。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 收集2011年11月至2012年11月南昌大學第一附屬醫(yī)院臨床各種標本分離的124株非重復的金黃色葡萄球菌作為實驗菌株，其中痰液43株，分泌物33株，血液24株，膿液9株，尿液6株，其他9株。

1.2 主要儀器和試劑 法國梅里埃生物公司的Vitek 2 Compact全自動微生物鑒定儀、西門子公司的MicroScan WalkAway 40 SI全自動微生物鑒定儀、德國Eppendorf公司的MyGenie96/384型PCR儀、美國BIO.RAD公司的DYY-6D型電泳儀、北京六一公司的凝膠成像儀。PCR試劑和DNA Marker I購于TaKaRa大連寶生物公司，相關擴增引物參照文獻設計，由上海生工生物技術有限公司合成。

1.3 MRSA的表型鑒定方法 將臨床分離株金黃色葡萄球菌隨機分兩組分別采用Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI兩臺全自動微生物鑒定儀對細菌進行鑒定，其中Vitek 2 Compact采用頭孢西丁肉湯稀釋法，MicroScan WalkAway 40 SI采用苯唑西林肉湯稀釋法，質控菌株為ATCC25923和ATCC29213，均為本實驗室保存菌株。

1.4 mecA及mecC基因檢測 溶菌酶煮沸法提取金黃色葡萄球菌基因組DNA，采用PCR法根據(jù)引物進行擴增，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳后，紫外線投射凝膠成像系統(tǒng)拍攝觀察結果。

1.5 細菌鑒定儀的性能評價 以PCR檢測mecA及mecC基因確定為MRSA作為標準,采用四格表法統(tǒng)計 Vitek 2 Compact和 MicroScan WalkAway 40 SI兩臺全自動微生物鑒定儀檢測MRSA的靈敏度、特異度和符合率。然后用數(shù)據(jù)分析軟件IBM SPSS Statistics 20對 PCR 法、Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI兩臺全自動微生物鑒定儀對MRSA的檢出率進行卡方檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 MRSA的表型鑒定檢出結果 39株金黃色葡萄球菌經(jīng)Vitek 2 Compact鑒定,有22株對頭孢西丁耐藥,17株對頭孢西丁敏感,檢出率56.41%；85株金黃色葡萄球菌經(jīng)MicroScan WalkAway 40 SI鑒定,有44株對苯唑西林耐藥,41株對苯唑西林敏感,檢出率51.76%。

2.2 mecA及mecC基因檢測結果 用PCR方法進行mecA及mecC基因檢測,結果顯示:124株菌株均未檢出mecC基因陽性菌株，經(jīng)Vitek 2 Compact鑒定的39株金黃色葡萄球菌中有22株菌呈mecA基因陽性,檢出率為56.41%；經(jīng)MicroScan WalkAway 40 SI鑒定的85株金黃色葡萄球菌中有44株mecA基因陽性，檢出率為51.76%。

2.3 Vitek 2 Compact的性能 PCR法和Vitek 2 Compact檢測MRSA的結果見表1。

表1 Vitek 2 COMPACT檢測MRSA的靈敏度、特異度和符合率

以PCR方法檢測耐藥基因mecA及mecC確定MRSA為標準，則Vitek 2 Compact檢測MRSA的敏感性為95.45%,特異性為94.12%,符合率為94.87%。

2.4 MicroScan WalkAway 40 SI的性能 PCR法和MicroScan WalkAway 40 SI檢測MRSA的結果見表2。

表2 MicroScan WalkAway 40 SI檢測MRSA的靈敏度、特異度和符合率

以PCR方法檢測耐藥基因mecA及mecC確定MRSA為標準,則MicroScan WalkAway 40 SI檢測MRSA的敏感性為93.18%,特異性為92.68%,符合率為92.94%。

2.5 兩臺鑒定儀性能的比較 用IBM SPSSStatistics 20軟件對兩臺鑒定儀性能進行卡方檢驗,χ2=0.46,P>0.05,差異無統(tǒng)計學意義。

3 討論

MRSA的耐藥機制主要是產(chǎn)生了一種新的由mecA基因編碼的與β-內(nèi)酰胺類抗生素親和力低的PBP2a[4]，國外不斷研究報道檢出除mecA基因以外的新的基因型mecC[5],國內(nèi)還沒有相關的報道。PCR檢測MRSA不受藥敏試驗條件的影響,特異性高,被公認為是診斷MRSA的金標準[6]。本試驗通過PCR方法檢測耐藥基因mecA及mecC基因以確定MRSA,得出Vitek 2 Compact檢測MRSA的靈敏度為95.45%,特異性為94.12%,符合率為94.87%；MicroScan WalkAway 40 SI檢測MRSA的敏感性為93.18%,特異性為92.68%,符合率為92.94%。上述結果表明Vitek 2 Compact檢測MRSA的敏感性、特異性和符合率均好于MicroScan WalkAway 40 SI。但雖然Vitek 2 Compact檢測MRSA準確性高(符合率達94.87%)，還是會有漏檢 (敏感性95.45%)和出現(xiàn)誤診 (特異性94.12%)的情況，在臨床實驗過程中應引起關注，減少漏診、誤診；MicroScan WalkAway 40 SI檢測MRSA雖然在敏感性、特異性和符合率上較Vitek 2 Compact低，但統(tǒng)計學上無差異，也可用于臨床的檢測，在臨床實驗過程中應關注誤診和漏診的發(fā)生。

Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI分別出現(xiàn)了1株和3株對頭孢西丁和苯唑西林耐藥而mecA基因陰性的菌株，分析原因可能與菌株產(chǎn)生高水平的β-內(nèi)酰胺酶或存在PBP2a以外的低親和力PBP有關，還需進一步證實。另外，還分別發(fā)現(xiàn)1株和3株mecA基因陽性,但對頭孢西丁和苯唑西林敏感的臨床菌株,可能與mecA基因本身的表達受到抑制或其輔助基因失活有關，其機制還需要作進一步研究。表型與基因型不一致的現(xiàn)象,可能還受環(huán)境因素的影響,如生長溫度、培養(yǎng)時間、pH值、滲透壓、二價金屬離子等[7]，造成MRSA耐藥程度的差異,從而影響MRSA的檢測結果。

總之，PCR方法雖然是檢測MRSA方法的金標準，但是由于其對實驗室設備和設施要求高、費用比較昂貴以及操作復雜,不易在臨床實驗室中常規(guī)開展。Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI全自動微生物鑒定儀檢測MRSA具有較高的敏感性、特異性及符合率，且操作簡單和快速,目前還是適合臨床實驗室檢測MRSA的常用方法。

[1]Trautmann M,Lepper PM,Schmitz FJ.Three cases of bacteria meningitis after spinal and epidural anesthesia[J].Clin Microbiol Infect Dis,2002,21(1):43-45.

[2]Jevons MP. “Cellbenin”-resistant staphylococcus aureus [J].Br Med,1996,1:124-125.

[3]Hiramatsu K,Cui L,Kuroda M,et al.The emergence and evolution of methieillin-resistant staphylococcus aureus[J].Trends Microbiol,2001,9(10):486.

[4]王輝,陳宏斌.甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌的實驗室診斷[J].中國感染與化療雜志,2011,11(6):420-422．

[5]Arhin FF,Sarmiento I,Moeck G,et al In vitro activities of oritavancin and comparators against meticillin-resistant Staphylococcus aureus(MRSA)isolates harbouring the novel mecCgene[J].International Journal of Antimicrobial Agents,2014,44(1):65-68.

[6]Louie L,Matsumura SO,Choi E,et al.Evaluation of three rapid methods for detection of methicillin resistance in Staphylococcus aureus[J].Clin Microbiol,2000,38(6):2170-2173.

[7]Lee JH.Methicillin (Oxacillin)-resistant Staphylococcus aureus strains isolated from major food animals and their potential transmission to humans[J].Appl Environ Microbiol,2003,69(11):89-94.