抗犬瘟熱病毒與犬細小病毒特異性免疫制劑的檢測

陳超陽 和彥良 霍志云 程俊生

近年來，隨著我國社會經(jīng)濟的發(fā)展，我國的寵物文化也相應有了較大的提升，越來越多的寵物進入到人們的日常生活中，它們已經(jīng)成為眾多人生活中的重要組成部分。據(jù)統(tǒng)計，在飼養(yǎng)寵物的人群中，大約80%的人飼養(yǎng)寵物犬，因此犬的健康問題也越來越引起人們的重視，寵物犬在飼養(yǎng)中遇到的常見病比較多，其中犬瘟熱和犬細小病毒病因其傳染性強、發(fā)病率高、死亡率高，已成為危害我國養(yǎng)犬業(yè)的主要傳染病。

目前，疫苗免疫注射對預防這兩種病取得了一定效果，但由于受疫苗自身、免疫程序、母源抗體及個體差異等多種因素的影響，仍有部分免疫犬因感染而發(fā)病，因此對犬瘟熱和犬細小病毒病的被動免疫和疾病早期的有效治療也成為該疾病防治的重要措施。大量的臨床治療案例表明，在兩種疾病的早期，皮下或肌肉注射特異性抗血清和單克隆抗體可收到較好的治療效果。但由于目前市場上出售的抗血清和單克隆抗體種類繁多，存在使用說明不詳，使用方法不同，特別是所含抗體水平不明確等問題，這對疾病的臨床有效治療造成了一定影響。為給寵物醫(yī)院的臨床治療提供一定的參考信息，作者對泰州市多家寵物醫(yī)院的抗血清和單克隆抗體進行檢測，并作報告一份。

一、材料與方法

（一）材料

1.抗體及制劑 犬瘟熱病毒（CDV）、犬細小病毒（CPV）高免血清（二聯(lián)、五聯(lián)）及單克隆抗體購自江蘇省泰州市內(nèi)多家寵物醫(yī)院；抗犬瘟熱病毒陽性血清、抗犬細小病毒陽性血清由本公司研發(fā)部自行研制；犬瘟熱病毒、犬細小病毒中和抗原由本公司研發(fā)部制備保存。

2. 實驗儀器 微量移液器、低速離心機等。

（二）方法

1. 制劑的細菌培養(yǎng) 無菌條件下每種制劑各取100μl 分別加入到5ml 無抗性LB 液體培養(yǎng)基中，37℃、210r/min 培養(yǎng)5 天，觀察是否有菌生長。

2. 制劑中犬瘟熱病毒抗體中和效價測定 按本公司《犬瘟熱病毒中和試驗標準操作規(guī)程》的方法進行。犬瘟熱病毒抗體中和效價（SN）判定標準見表1。

3. 制劑中犬細小病毒抗體的血凝抑制效價測定 按本公司《細小病毒血凝抑制試驗標準操作規(guī)程》的方法進行。犬細小病毒抗體的血凝抑制（HI）效價判定標準見表1。

表1 犬瘟熱病毒與犬細小病毒抗體效價判定標準

二、結(jié)果與分析

（一）通過制劑的細菌培養(yǎng)，對寵物醫(yī)院使用的犬瘟熱病毒、犬細小病毒高免血清及單克隆抗體進行了無菌檢測，共4個品牌，8 份樣品。結(jié)果顯示品牌2 的犬五聯(lián) （犬瘟熱病毒、犬細小病毒、犬副流感病毒、犬傳染性肝炎病毒、犬冠狀病毒）高免血清在培養(yǎng)的第2天，LB 液體培養(yǎng)基即出現(xiàn)嚴重的渾濁現(xiàn)象，表明該制劑存在著大量細菌污染；其他制劑培養(yǎng)物培養(yǎng)5 天后均無菌生長，較為潔凈。結(jié)果詳見表2。

表2 8 份制劑的無菌檢驗結(jié)果

（二）試驗對8 份特異性免疫制劑同時進行犬瘟熱病毒抗體中和效價的測定，檢測結(jié)果顯示品牌1 的兩種制劑中犬瘟熱中和抗體效價均為1∶4，判定結(jié)果為無抗體；品牌2 與品牌3 制劑中的犬瘟熱中和抗體效價均為1∶32，水平較弱；品牌4 制劑中犬瘟熱中和抗體效價均為1∶64，水平一般。但在品牌2、3、4 的抗犬細小病毒的特異性免疫制劑中均檢測到了不同水平的犬瘟熱中和抗體，其中品牌3 的犬細小病毒單克隆抗體的犬瘟熱病毒中和抗體效價達到1∶128。結(jié)果詳見表3。隆抗體中也檢測到了不同水平的犬細小病毒抗體。結(jié)果詳見表4。

表3 8 份制劑中犬瘟熱病毒抗體中和效價檢測結(jié)果

（三）試驗對8 份特異性免疫制劑同時進行犬細小病毒抗體的血凝抑制(HI)效價的測定，檢測結(jié)果顯示抗體水平最低的為品牌1，其兩種制劑中犬細小病毒抗體的HI效價均為1∶80；抗體水平最高的為品牌3，其犬細小病毒單克隆抗體的HI 效價可達1∶640。同樣，在品牌3 和品牌4 的犬瘟熱單克

三、討論

本試驗細菌培養(yǎng)結(jié)果表明，大部分品牌還是保證了特異性生物制品沒有細菌污染，但品牌2 的犬五聯(lián)高免血清出現(xiàn)了嚴重的細菌污染，說明同一廠家不同產(chǎn)品之間還是存在一定的差異，由此提醒臨床上的寵物醫(yī)生在使用同一品牌不同產(chǎn)品時還是要謹慎對待，制劑溶解后出現(xiàn)混濁、沉淀的應禁止使用，對建議靜脈滴注的制劑需更加小心謹慎，避免寵物醫(yī)療事故的發(fā)生。

表4 8 份制劑的犬細小病毒抗體血凝抑制效價檢測結(jié)果

據(jù)文獻報道：抗犬瘟熱中和效價達到1∶40，抗犬細小病毒的HI 效價達到1∶80，即可安全保護犬免受犬瘟熱和犬細小病毒的攻擊。制劑的抗體檢測結(jié)果表明，不論是高免血清，還是單克隆抗體，不同品牌之間存在著較大的差異，部分品牌的制劑還可能會出現(xiàn)抗體極低、無抗體，甚至出現(xiàn)單一抗體制劑中會含有另一種抗體成分的情況。這提醒寵物醫(yī)生在臨床治療中需要做到因藥而異，不能一貫的采取相同的治療劑量與方法，對于治療效果不明顯的，應重新選擇以提高臨床治療效果。

通過走訪多家寵物醫(yī)院發(fā)現(xiàn)，寵物醫(yī)生在臨床上使用的抗犬瘟熱病毒或犬細小病毒的高免血清和單克隆抗體的牌子多、規(guī)格亂，且有很大一部分產(chǎn)品并沒有獲得農(nóng)業(yè)部新獸藥注冊證書，因此給臨床上疾病的及時、準確、有效的治療帶來了很大的隱患與風險，這需要相關獸藥監(jiān)管部門加大、加強對特異性免疫制劑這類產(chǎn)品的監(jiān)管與查處力度，同時相關主管部門也應加強對寵物醫(yī)院的監(jiān)管，以及對寵物醫(yī)生的培訓教育和宣傳指導，進一步規(guī)范寵物醫(yī)療市場。