高效液相色譜法測定清眩丸中歐前胡素含量

彭春梅，趙 英

(內蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內蒙古 呼和浩特 010017)

清眩丸是由川芎、白芷、薄荷等5味藥材的生藥原粉加水制得的水丸，具有散風清熱的功效，主治風熱頭暈目眩、偏正頭痛、鼻塞牙痛[1]1127。歐前胡素是方中白芷的主要活性成分[2]，具有興奮交感神經、抗炎鎮(zhèn)痛等作用[3－4]。為了控制清眩丸的質量，筆者選定歐前胡素為指標性成分，并用高效液相色譜(HPLC)法[5]對其進行含量測定?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Lab Alliance高效液相色譜儀;Anastar色譜工作站。歐前胡素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110826－200307);清眩丸(赤峰大吉藥業(yè)集團有限公司);甲醇為色譜純，水為二次重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱:Agilent Zorbax SB －C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:甲醇－水(62∶38);流速:1 mL/min;檢測波長:248 nm;柱溫:40℃。理論板數(shù)按歐前胡素峰計算應不低于2 500。

2．2 溶液制備

取歐前胡素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含10 μg的溶液，即得對照品溶液。取裝量差異項下的本品，研碎，取本品粉末(過4號篩)約0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)45 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取方中除白芷外其余4味藥材制得的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

專屬性試驗:分別精密吸取對照品溶液5 μL、供試品溶液和陰性對照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀。結果陰性對照品溶液色譜中，在與供試品、對照品溶液色譜歐前胡素峰保留時間相應位置上無吸收(圖1)，表明方中其他成分對歐前胡素含量測定無干擾，方法的專屬性良好。

線性關系考察:精密稱取歐前胡素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含歐前胡素16．6 μg的對照品溶液。分別精密吸取該溶液 0．1，0．3，0．5，0．7，0．9 mL，置 10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖[6]，測定其峰面積，以峰面積積分值(Y)為縱坐標、歐前胡素進樣量(X，ng)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=2 990．4 X －152．6，r=0．999 1(n=5)。結果表明，歐前胡素進樣量在16．6～149．4 ng范圍內與峰面積呈良好線性關系。

穩(wěn)定性試驗:分別精密吸取同一供試品溶液10 μL，于制備后 0，3，6，9，12 h 時進樣，測定峰面積。結果的 RSD 為 0．93%(n=5)，表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。

精密度試驗:精密吸取同一供試品溶液10 μL，按擬訂色譜條件重復進樣5次，測定峰面積。結果的 RSD為1．24%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取同一批樣品(批號為070915)5份，按供試品溶液制備方法平行處理并測定，計算含量。結果含量平均值為0．474 mg/g，RSD 為 1．89%(n=5)，表明方法重復性良好。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗:分別精密稱取5份已知含量為0．48 mg/g(批號為070915)的樣品0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，以2份為1組，共3組，每組分別精密加入歐前胡素對照品0.14，0.71，0.19 mg，按供試品溶液制備方法制備溶液，并依法測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 歐前胡素加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

含量限度:2010年版《中國藥典(一部)》白芷藥材含量測定項下要求，“本品按干燥品計算，含歐前胡素(C16H14O11)不得少于0．080%”[1]98。3批白芷藥材中歐前胡素(C16H14O11)的含量測定結果見表2?？梢?，白芷藥材中歐前胡素的轉移率均在95%以上。因此，確定樣品中歐前胡素含量限度為“本品每1 g含白芷以歐前胡素(C16H14O11)計，不得少于 0．20 mg”。

表2 白芷藥材中歐前胡素轉移率測定結果

樣品含量:取6批樣品，依法制備供試品溶液并測定含量。結果見表3，制備的6批樣品含量測定結果均符合含量限度要求。

表3 樣品含量測定結果(n=2)

3 討論

選擇檢測波長時，精密吸取歐前胡素對照品溶液，在200～600 nm波長范圍內掃描，結果歐前胡素在248 nm波長處有最大吸收。

選擇流動相時，參考2010年版《中國藥典(一部)》清眩丸含量測定項下要求，采用甲醇－水(63∶37)為流動相測定[1]1127，結果歐前胡素峰與雜質峰分離效果較差，分離度小于1．5，經摸索試驗，以甲醇－水(62∶38)為流動相時分離效果較好，達到了藥典要求。

選擇樣品提取方法時，選取甲醇為溶劑，以歐前胡素提取量為考察指標，按2．2項下供試品溶液制備方法操作，分別精密吸取對照品溶液5 μL和供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀。結果表明，樣品中歐前胡素含量轉移率在95%以上，基本提取完全，因此本品的提取溶劑和提取方法可行。

方法學考察結果表明，方法靈敏度高、專屬性強、重復性好，可作為清眩丸的質量控制方法[6－12]。

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