高效液相色譜法測定脂降寧片中葛根的含量

天津市寶坻區(qū)藥品檢驗(yàn)所（301800）尹立平 劉寶珠

脂降寧片由制何首烏、葛根等8味中藥及氯貝酸鋁等制成的復(fù)方制劑，具有降脂、活血通絡(luò)等作用，降低甘油三酯效果顯著。脂降寧片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第七冊(cè)，只有制何首烏薄層鑒別及氯貝酸鋁的含量測定標(biāo)準(zhǔn)，因此為了能更好地控制制劑質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)研究并建立脂降寧片中葛根（以葛根素計(jì)）的HPLC含量測定方法。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥 島津LC-2010CHT高效液相色譜儀；梅特勒托利多天平AB265-S；島津UV-2401PC紫外可見分光光度儀；昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)的KQ5200E型超聲波清洗器；葛根素對(duì)照品（來源：中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110752-200912，含量：96.0%）；脂降寧片（A廠批號(hào)為130901、B廠批號(hào)20121209、C廠批號(hào)20121001）；陰性對(duì)照樣品市售藥材自制；乙腈為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

1.2 色譜條件 色譜柱：迪馬-platisil ODS C18（5μm，250×4.6mm）；柱溫30℃；流動(dòng)相：乙腈-水（11:89）；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量：10μl；檢測波長：250nm。

1.3 方法與結(jié)果

1.3.1 供試品溶液的制備 取本品10片，去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉約0.3g，置具塞錐形瓶中，精密加70%甲醇溶液25ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇溶液補(bǔ)足減失重量，搖勻，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

附表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

附圖1 葛根素標(biāo)準(zhǔn)曲線

附圖2 陰性樣品

附圖3 對(duì)照品

附圖4 樣品

1.3.2 陰性樣品溶液的制備 按處方配比及工藝自行制備陰性樣品，再按“供試品溶液制備”方法制備陰性樣品溶液。

1.3.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取葛根素對(duì)照品約12.5mg（對(duì)照品取量為13.45mg），置50ml量瓶中，加70%甲醇溶液適量超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加70%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml含葛根素0.025mg）。

1.3.4 線性及范圍 精密稱取葛根素對(duì)照品13.45mg，按“對(duì)照品溶液的制備”方法制得溶液（0.02582mg/ml），分別 進(jìn) 樣1、2、5、10、15、20、25、30μl，按上述色譜條件測定，以葛根素濃度mg/ml（0.02582、0.05165、0.1291、0.2582、0.3873、0.5165、0.6456、0.7746）為X軸，峰面積（108999、119011、599179、1176081、1779843、1431088、2966459、3558551）為Y軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得葛根素線性回歸方程y=5E+06X-4840，r=0.9998，表明葛根素在0.02582～0.7746μg的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。見附圖1。

1.3.5 精密度試驗(yàn)（重復(fù)性） 取同一供試品（編號(hào)1）6份，精密稱定，按“供試品溶液的制備”方法制備溶液，依上述色譜條件進(jìn)行檢測，得峰面積分別為1127381、1127852、1127321、1128554、1126616、1125617，RSD=0.1%（n=6），表明該方法重現(xiàn)性好。

1.3.6 專屬性 將對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液按上述色譜條件測定，供試品溶液中葛根素峰與相鄰色譜峰分離度符合要求，陰性樣品無干擾。表明該方法專屬性強(qiáng)。見附圖2～4。

附表2 三個(gè)廠家樣品葛根素含量

1.3.7 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量（葛根素含量1.93mg/g）的脂降寧片（批號(hào)130901）細(xì)粉約0.15g，置具塞錐形瓶中，精密加入葛根素對(duì)照品溶液（濃度0.3228mg/ml）1ml，按“供試品溶液的制備”方法制備溶液，依上述色譜條件進(jìn)行檢測，計(jì)算回收率。見附表1。

1.3.8 樣品測定 取A、B、C三個(gè)廠家樣品，按“供試品溶液的制備”方法制備溶液，依上述色譜條件進(jìn)行檢測，計(jì)算葛根素的含量。見附表2。

1.3.9 穩(wěn)定性試 取同一供試品溶液，在室溫下分別放置0、1、2、3、4、5、6、7天后按“1.2色譜條件”測定，峰面積為1127381、1119701、1125539、1120390、1126348、1129331、1122018，RSD=0.3%，表明供試品溶液在7天內(nèi)穩(wěn)定。

2 討論

2.1 吸收波長確定 配置0.01μg/ml的葛根素對(duì)照品甲醇溶液，用UV-2401PC型紫外分光光度儀在100～400nm范圍內(nèi)掃描，在249.9nm有最大吸收，故確定葛根素檢測波長為250nm。

2.2 供試品溶液制備 分別采用乙醇、甲醇、70%甲醇等溶媒進(jìn)行超聲10、30、40min等不同方法對(duì)供試品進(jìn)行提取，經(jīng)篩選以70%甲醇超聲提取30min效果最好。

2.3 流動(dòng)相的選擇 實(shí)驗(yàn)中曾選用甲醇-水，甲醇-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，甲醇-水峰型不好，甲醇-0.1%磷酸溶液對(duì)色譜柱適用性差。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)選擇乙腈-水（11∶89）為流動(dòng)相效果最好。