中紅外指紋圖譜快速定量評(píng)價(jià)野木瓜片質(zhì)量

李文穎，孫國(guó)祥，宋愛華

(沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧沈陽 110016)

野木瓜片 (Yemugua Tablet，YMGT)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十四冊(cè)［1］，由野木瓜煎煮后濃縮成浸膏，加適量淀粉而制成的單味中成藥，為全浸膏片，不含植物組織。野木瓜中含有皂苷、黃酮、酚性成分，主要化學(xué)成分有齊墩果酸、熊果酸與綠原酸，還含有抗衰老重要物質(zhì)超氧化物歧化酶 (SOD)即“液體黃金”，其飲料產(chǎn)品備受歡迎，因此野木瓜具有重要藥用與食用價(jià)值。野木瓜片的功能為祛風(fēng)止痛、舒筋活絡(luò)，主治風(fēng)邪阻絡(luò)型三叉神經(jīng)痛，坐骨神經(jīng)痛，風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛。文獻(xiàn)有HPLC法、紫外分光光度法［3］測(cè)定野木瓜片中綠原酸［2］，本實(shí)驗(yàn)以中紅外指紋圖譜 (IRFP)為基礎(chǔ)用系統(tǒng)指紋定量法對(duì)野木瓜片進(jìn)行快速定量評(píng)價(jià)。

1 中紅外系統(tǒng)指紋定量法原理［4-7］

中藥IRFP所表達(dá)的質(zhì)量信息遠(yuǎn)比測(cè)試單一成分要豐富和準(zhǔn)確。本實(shí)驗(yàn)建立IRFP定量法是以光譜點(diǎn)為計(jì)算單元(4000多個(gè)光譜點(diǎn))，用宏定性相似度Sm監(jiān)測(cè)紅外指紋數(shù)量和分布比例，見 (1)式，用宏定量相似度Pm監(jiān)測(cè)紅外指紋含量狀況，見 (2)式，并用指紋變動(dòng)系數(shù)α限定紅外指紋變異性，見 (3)式。xi與yi分別為樣品和對(duì)照IRFP各峰點(diǎn)吸光度，mRFP和mi分別為對(duì)照IRFP和樣品的稱樣量。用Sm、Pm和α把中藥質(zhì)量劃分為8級(jí)見表1，該方法稱為紅外系統(tǒng)指紋定量法。

表1 紅外指紋定量法鑒定中藥質(zhì)量等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

2 儀器與試藥

2.1 儀器 Bruker IFS-55型傅立葉紅外分光光度儀，DTGS型檢測(cè)器 (瑞士布魯克公司);AG285電子天平 (梅特勒-托利多上海儀器有限公司)，數(shù)據(jù)處理軟件為中藥紅外指紋圖譜超信息特征數(shù)字化定量評(píng)價(jià)系統(tǒng)4.0軟件。

2.2 試藥 KBr試劑 (國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司批號(hào)為F20100520);各批次野木瓜片皆購(gòu)于沈陽各大藥房，共購(gòu)買15個(gè)批次。S1～S3、S8、S10、S11和S13來自于江西保利制藥有限公司;S4、S5來自于廣州萊泰制藥有限公司;S6、S7、S9和S14均來自于廣東和平藥業(yè)有限公司;S12、S15均來自于貴港市冠峰制藥有限公司。野木瓜的對(duì)照藥材 (121224)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

2.3 供試品對(duì)照藥材KBr晶片制備 取野木瓜片15片，精密稱定，除去薄膜衣并研碎成粉末，于40℃干燥24 h，取1～2 mg粉末，精密稱定m，精密稱取100～150 mg干燥的KBr粉末w1，在瑪瑙研缽中研磨、混勻，轉(zhuǎn)移到模具中，在低真空下用10 GPa左右的壓力，經(jīng)約2 min即可將樣品壓成透明薄片，精密稱取供試品KBr晶片質(zhì)量w2后，10 min內(nèi)測(cè)試，樣品真實(shí)質(zhì)量計(jì)算方法見(4)式。

取野木瓜對(duì)照藥材干燥，將其粉碎，過200目篩于40℃干燥24 h，取1～2 mg粉末，精密稱定，精密稱取100～150 mg干燥的KBr粉末，在瑪瑙研缽中研磨、混勻，轉(zhuǎn)移到模具中，在低真空下用10 GPa左右的壓力，經(jīng)約2 min即可將樣品壓成透明薄片。

2.4 測(cè)定條件 Bruker IFS-55型傅立葉紅外分光光度儀，DTGS型檢測(cè)器。波數(shù)范圍為4000～400 cm－1，分辨率為8 cm－1，掃描速度為20次/s，升溫速度2℃/min。樣品掃描時(shí)扣除甲醇H2O和CO2的干擾。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 紅外指紋圖譜方法學(xué)考察 精密度試驗(yàn) 取野木瓜片樣品S1進(jìn)行紅外光譜掃描，連續(xù)試驗(yàn)6次，用紅外系統(tǒng)指紋定量法評(píng)價(jià)出指紋圖譜算出Sm均＞0.99，宏定量相似度Pm的RSD為2.4%，表明儀器的精密度符合要求。

穩(wěn)定性試驗(yàn) 取野木瓜片樣品S1方法制備樣品，每隔1 h進(jìn)行一次光譜采集，分別在0、1、2、3、4、5、6 h進(jìn)行采集。所得紅外光譜圖的定性相似度Sm均＞0.98，宏定量相似度Pm的RSD為2.6%，表明樣品在測(cè)定時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn) 取野木瓜對(duì)照藥材制備供試品，按上述方法平行制備6份樣品片，分別測(cè)定IRFP，計(jì)算所得紅外光譜圖的定性相似度Sm均＞0.97，宏定量相似度Pm的RSD為2.9%，表明方法重現(xiàn)性良好。

3.2 野木瓜片紅外指紋圖譜建立［8-12］按IRFP檢測(cè)條件，將15批樣品溴化鉀晶片分別進(jìn)行紅外測(cè)定，記錄4000～400 cm－1的中紅外光譜。在3600～2900 cm－1和1600～400 cm－1為主要特征峰。根據(jù)文獻(xiàn)野木瓜中含有黃酮、皂苷、酚類成分，3300 cm－1為－OH伸縮振動(dòng)、2900 cm－1為-CH3伸縮振動(dòng)吸收峰、1650 cm－1為C=O伸縮振動(dòng)吸收峰、1000 cm－1為酚類的C-O伸縮振動(dòng)吸收峰?；瘜W(xué)成分以單鍵振動(dòng) (或轉(zhuǎn)動(dòng))引起的光吸收疊加構(gòu)成野木瓜片IRFP重要特征可作為野木瓜的鑒別手段。將此15批IRFP信號(hào)導(dǎo)入“中紅外指紋譜超信息特征數(shù)字化評(píng)價(jià)系統(tǒng)4.0”軟件，用野木瓜對(duì)照藥材平行測(cè)6次，取平均值生成對(duì)照指紋圖譜 (均譜)。運(yùn)用SPSS 16.0軟件以Sm和Pm為聚類分析指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，結(jié)果樣品被分為二類:S2、S3、S7、S8、S9、S12、S13、S15、S1、S5、S10、S11 和S14為第一類，S4和S6為第二類，見圖1。用野木瓜的標(biāo)準(zhǔn)藥材平行測(cè)定6次，取平均值生成對(duì)照指紋圖譜(RFP)，以此RFP為標(biāo)準(zhǔn)用系統(tǒng)指紋定量法鑒別評(píng)價(jià)15批野木瓜質(zhì)量，重新評(píng)價(jià)15批樣品Sm和Pm(結(jié)果見圖1，表2，圖2)。

圖1 15批野木瓜片系統(tǒng)聚類分析結(jié)果

表2 紅外指紋定量法評(píng)價(jià)15批野木瓜片質(zhì)量結(jié)果

3.3 野木瓜片整體質(zhì)量評(píng)價(jià) 用紅外系統(tǒng)指紋定量法評(píng)價(jià)出指紋圖譜算15批野木瓜片Sm均＞0.94，證明各批樣品的化學(xué)成分的種類和分布比例都很相似，但宏定量相似度Pm差異很大。鑒定結(jié)果為:S7和S9(1級(jí))質(zhì)量極好，S6、S8、S10、S12和 S15(2級(jí))質(zhì)量很好，S2、S3、S10、S13(3級(jí))質(zhì)量好，S14(5級(jí))質(zhì)量中，S1和S11(6級(jí))質(zhì)量一般，S5(7級(jí))質(zhì)量差，S4(8級(jí))質(zhì)量劣，見表2。

圖2 15批野木瓜片 (S1－S15)紅外指紋圖譜和對(duì)照指紋圖譜 (IR-RFP)

4 結(jié)論

中藥成分復(fù)雜，每一味中藥都有許多化學(xué)組成，其療效成分不單單是一種起作用，因此對(duì)單一成分進(jìn)行質(zhì)量控制無法反映質(zhì)量全貌，對(duì)中藥進(jìn)行全面質(zhì)量控制才能控制中藥發(fā)展的正確方向。本實(shí)驗(yàn)建立了野木瓜片IRFP實(shí)現(xiàn)了對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行快速定性和定量鑒定，這為中藥全質(zhì)量控制提供了一種簡(jiǎn)單、便捷和可靠的快速分析方法。

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