蒼術麩炒前后正丁醇部位對濕阻中焦證大鼠的藥效學研究

季光瓊，肖 波，劉艷菊，劉 芬，李 鑫，許安安

(湖北中醫(yī)藥大學藥學院，湖北武漢 430065)

蒼術為菊科植物茅蒼術 Atractylodes lancea(Thunb.)DC.或北蒼術Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥根莖。主治濕阻中焦，脘腹脹滿，泄瀉，水腫，腳氣痿躄，風濕痹痛，風寒感冒，雀目，眼目昏澀等癥。味甘、苦，性溫，歸脾、腎、肝經［1］。生蒼術燥性較大，麩炒后燥性緩和，辛性減弱，健脾和胃作用增強［2］。 《神農本草經》將其列為上品; 《本經》中稱“作煎餌久服，輕身延年，不饑”［3］。蒼術為臨床常用中藥，本課題組已完成蒼術麩炒前后水提物總部位藥效研究［4］，研究表明蒼術炮制以后水提物總部位健脾和胃的功效有所加強，蒼術麩炒后燥性得以緩和，本實驗在此基礎上，對其有效部位之一正丁醇部位進行進一步藥效學研究，通過比較蒼術麩炒前后正丁醇部位藥效變化，探討其健脾和緩和燥性的作用，尋求麩炒蒼術藥效變化的物質基礎，為進一步闡釋麩炒蒼術炮制機理提供實驗依據。

1 材料

1.1 藥物 蒼術飲片 (購自亳州市保華藥業(yè)有限公司，批號110501)，麩蒼術為自制 (方法參考《中國藥典》2010年版麩炒法附錄ⅡD)，香砂養(yǎng)胃片 (昆明金殿制藥有限公司，國藥準字Z20025521)。10%炭末混懸液 (活性炭和阿拉伯膠各10%)，胃泌素放射免疫分析試劑盒 (北京北方生物技術研究所，國藥準字S10940100)，Xylene brilliant cyaninG(考馬斯藍工作液，百浩生物科技有限公司)。

1.2 動物 SD大鼠70只，雌雄各半，體質量 (150±20)g(周齡為5～7周，選擇體質量是與給藥量對應，故選則此質量的大鼠)，由華中科技大學同濟醫(yī)學院提供，許可證號SCXK鄂2004-0007。

1.3 儀器 UV-1200紫外可見分光光度計 (上海美譜達儀器有限公司);KS604721放射免疫分析儀 (北京科斯佳科技有限公司);TG-16S低溫離心機 (四川蜀科儀器有限公司)。

2 方法與結果

2.1 藥液

2.1.1 給藥劑量計算［5］根據《中國藥典》2010年版，設定9 g為成人用劑量 (臨床上蒼術處方劑量為3～9 g)，成人以60 kg為標準體質量計算，每天的劑量為9×103mg/60 kg，即150 mg/kg，大鼠以150 g計，由成人換算大鼠用藥劑量為 D大鼠=D成人×換算系數 =150 mg/kg×6.17=925.5 mg/kg。以150 g為大鼠標準體質量，得到每只大鼠每天給藥量為138.8 mg飲片。

2.1.2 藥液制備方法 給藥組:稱取蒼術及麩炒蒼術飲片各50 g，加水500 mL，浸泡過夜，蒸餾法提盡揮發(fā)油，水液過濾，濃縮，備用。將濃縮液加水制成約150 mL水液，依次用三氯甲烷、正丁醇萃取，每次加入溶劑50 mL萃取至無色。所得正丁醇萃取液用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸干，制得浸膏備用 (生蒼術浸膏得率為19.80%，麩蒼術浸膏得率為20.20%)。陽性對照組:將香砂養(yǎng)胃片碾碎，取適量藥粉 (根據“2.1.1”項換算劑量)，加水制成混懸液，得陽性組藥液。模型組以0.9%生理鹽水相同量給藥。各給藥組劑量為:低劑量組和陽性組為925.5 mg/kg，高劑量加倍;給藥量均為1.5 mL。

2.2 分組與造模［6］將70只SD大鼠隨機分為7組，每組10只，分別為生品高、低劑量組，麩品高、低劑量組，陽性組，模型組和正常組。除正常組外，其他6組按以下方法造模7 d:每天定時游泳15 min(水深25 cm、水溫25℃)游泳完畢后，立即在7 d內單日灌胃給予25 mL/kg液態(tài)豬油，7 d內雙日灌胃給予30%的蜂蜜，放到用1000 mL水澆200 g濕墊料鼠籠中飼養(yǎng) (大鼠籠需用塑料薄膜覆蓋)。正常組大鼠在正常實驗環(huán)境中飼養(yǎng)。

2.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行組間均數的統(tǒng)計學分析 (t檢驗)。

2.4 正丁醇部位對濕阻中焦大鼠GAS的影響 造模7 d以后，生、麩品高低劑量組、陽性組、模型組分別按照對應藥液灌胃給藥，2次/d，1.5 mL次，正常組不給藥。造模組在造模完成后次日斷頭取血，正常組在飼養(yǎng)7 d后斷頭取血，各給藥組末次給藥后1 h斷頭取血，用低溫離心機離心分離出血清，用放射免疫方法測血清中GAS水平 (按試劑盒方法操作)。結果見表1。

表1 蒼術麩炒前后正丁醇部位提取物對GAS水平和小腸推進率的影響 ()

注:與模型組比較，*P＜0.05;與生品低劑量比較，▲P＜0.05;與生品高劑量比較，●P＜0.05

組別 動物數只 GAS(mg·L－1) 小腸推進率%生品低劑量組 10 71.18±13.69* 73.52±7.58*10 86.66±7.40 60.20±4.70生品高劑量組 10 73.61±19.01* 58.48±3.61＊▲麩品低劑量組 10 73.96±18.20＊▲ 75.33±9.18＊▲麩品高劑量組 10 75.12±7.30＊▲● 62.59±6.84*陽性組 10 90.82±5.36* 65.82±9.52*模型組 10 58.17±12.01 37.30±13.46正常組

數據表明:生、麩品高低劑量組較模型組GAS水平明顯升高，且麩品GAS水平高于生品，且經t檢驗生、麩品組都較模型組有差異。結果提示，蒼術經麩炒后正丁醇部位健脾和胃作用增強。

2.5 正丁醇部位對濕阻中焦證大鼠小腸推進率的影響 各組大鼠給水不給食12 h(空腹狀態(tài))，各給藥組末次給藥1 h后、模型組造模完成后次日、正常組在飼養(yǎng)7 d后，灌胃給予新鮮配制的炭末混懸液，15 min后脫頸處死大鼠，立即剖腹，取出自幽門至回盲部的消化管，不加牽引地平鋪于玻璃板上，測其全長和炭末所在位置，計算占結腸全長的百分比，進行組間比較，即小腸推進率。小腸推進率=炭末推進長度 (cm)小腸長度 (cm) ×100%，結果見表1。

結果顯示，各藥物組小腸推進率較模型組均明顯增加，經t檢驗均有明顯差異。直觀上比較數據，顯示麩品小腸推進率強于生品，且生、麩品高劑量組更接近正常組平均值。結果提示，蒼術經麩炒后正丁醇部位健脾作用增強。

2.6 正丁醇部位對濕阻中焦大鼠證尿量的影響 取大鼠代謝籠收集尿液:模型組造模7 d后次日12 h收集尿量1次，正常組飼養(yǎng)7 d后收集次日尿量1次，其他各給藥組在給藥 (造模后次日給藥)7 d后，收集的尿液，均以2000 r/min離心5 min，將上清液置于4℃冰箱保存，備用。記錄數據。結果見表2。

表2 蒼術麩炒前后正丁醇部位提取物給藥7天后尿量結果()

表2 蒼術麩炒前后正丁醇部位提取物給藥7天后尿量結果()

注:與模型組比較，*P＜0.05;與正常組比較，△P＜0.05

mL生品低劑量組組別 動物數只 尿量10 5.0±1.7生品高劑量組 10 5.2±1.5*麩品低劑量組 10 4.6±1.2麩品高劑量組 10 4.7±1.0陽性組 10 6.9±2.2*模型組 10 3.6±2.2△正常組10 4.9±1.3

從實驗結果直觀判斷，模型組大鼠尿量少于正常組;生、麩品正丁醇部位尿量較模型組均有所增多，但麩品高低劑量組尿量少于生品相應組。進一步t檢驗，結果表明，僅生蒼術正丁醇部位高劑量組較模型組有顯著性差異(P＜0.05)，其他給藥組較模型組無顯著性差異。結果提示，生蒼術利尿作用強于麩炒品，蒼術麩炒后燥性得以緩和。

2.7 正丁醇部位對濕阻中焦證大鼠尿液中AQP2(水孔蛋白2)的影響［7］采用Bradford法，選用BSA蛋白對照品制作標準曲線 (y=0.2466x+0.0039)。在595 nm波長下測定各組尿液中AQP2的量，結果見表3。

表3 蒼術麩炒前后正丁醇部位提取物對尿液中AQP2影響(，n=10)

表3 蒼術麩炒前后正丁醇部位提取物對尿液中AQP2影響(，n=10)

注:與正常組比較，*P＜0.05;與模型組比較，△P＜0.05

mg生品低劑量組 10 1.22±0.21組別 動物數只 AQP2△生品高劑量組 10 1.26±0.13△麩品低劑量組 10 1.45±0.14△麩品高劑量組 10 1.44±0.12△陽性組 10 1.34±0.24△模型組 10 2.03±0.41*正常組10 1.29±0.11

結果顯示，模型組AQP2的量較正常組明顯增加;各給藥組正丁醇部位AQP2的量均較模型組有明顯降低，且生品組低于麩品組接近正常組;陽性組較模型組AQP2的量有所降低，平均值介于生品和麩品之間?？傊?，給藥后模型大鼠尿液中AQP2的量趨于正常。結果提示:各給藥組有調節(jié)AQP2量的作用。且由于蒼術生品燥性較強，對濕阻中焦模型大鼠的去濕作用較強，麩炒后該部位燥濕作用表現較弱，兩者差異顯著。

2.8 正丁醇部位對大鼠脾臟質量的影響 造模以后，給藥方式同“2.4”項，于相同時間點取出脾臟，稱取脾臟質量。結果見表4。

結果顯示，生品高、低劑量組，麩品高、低劑量組，正常組脾質量都較模型組大，麩品高、低劑量組分別較生品高、低劑量組大，經t檢驗，生品低、高劑量組，麩品低、高劑量組，以及正常組都較模型組有顯著性差異。提示為蒼術正丁醇部位健脾燥濕作用有一定的指導作用，且麩品正丁醇部位健脾作用增強。

表4 蒼術麩炒前后正丁醇部位提取物對脾質量影響()

表4 蒼術麩炒前后正丁醇部位提取物對脾質量影響()

注:與模型組比較，*P＜0.01

g生品低劑量組 10 0.5935±0.0723組別 動物數只 脾質量*生品高劑量組 10 0.6193±0.0854*麩品低劑量組 10 0.6287±0.0539*麩品高劑量組 10 0.6441±0.0734*模型組 10 0.4649±0.0986陽性組 10 0.6203±0.0584正常組 10 0.6993±0.0916*

3 結論

蒼術正丁醇部位藥效實驗結果表明，麩炒蒼術可增加濕阻中焦大鼠胃泌素水平、小腸推進率，且可提高模型大鼠脾質量，提示能增強健脾作用;生蒼術能促進模型大鼠利尿作用、增加尿量，降低尿液中AQP2的量，其作用強于麩炒蒼術，提示麩炒可緩和燥性。該結果表明，蒼術正丁醇部位是其炮制改變藥效的有效部位之一，是探討麩炒作用的關鍵物質基礎部位之一。

4 討論

4.1 蒼術健脾作用主要指標的選擇 中醫(yī)理論認為，脾喜燥惡濕，蒼術具燥濕健脾作用，用于濕阻中焦，脘腹脹滿。本實驗選擇濕阻中焦證模型符合蒼術的主治病證。濕困脾，不能運化水谷，而致脘腹脹滿。GAS為胃壁細胞表面的一種囊體［8］，能刺激胃黏膜細胞增殖，分泌鹽酸和胃蛋白酶原;刺激胃竇與腸運動，有利于胃排空等作用。所以選擇GAS水平可作為療效評定的客觀指標［9］。腸推進率是胃動力評價的常用指標［10］，該指標可評價病癥的改善情況。GAS水平及小腸推進率可共同反映健脾作用強弱。

4.2 蒼術燥性指標的選擇 中醫(yī)認為，“濕”為六淫之一，濕困脾，使水失運化，代謝不健，出現便溏。脾喜“燥”，燥能祛濕健脾，恢復運化水液之功能，具利水之功，所以尿量多少可作為評價蒼術“燥”性直觀指標之一。脾為先天之本，腎為后天之本，在運化水液過程中相互協作。脾氣虛弱，可致腎陽不足，腎主通調水道，調節(jié)水液代謝。有實驗表明，濕阻中焦證大鼠遠端腎小管與集合管水分重吸收加強，水分被保留體內［11-12］，尿量少，便溏。而AQP2存在于腎臟集合管主細胞中，具調節(jié)尿液生成與排泄的作用，尿量增加與AQP2降低有關，因此AQP2的高低與“燥”性有關［13］。選擇AQP2為燥性的另一指標符合中醫(yī)和西醫(yī)理論。實驗結果可表明尿量增加則AQP2降低，燥性得以緩和，為解釋蒼術經麩炒后燥性得以緩和提供了依據。

4.3 蒼術麩炒后正丁醇部位對脾質量的影響 現代醫(yī)學研究認為，脾胃濕熱證與水液代謝關系密切［14］。本實驗生品高低劑量組、麩品高低劑量組、正常組分別與模型組比較，均有顯著性差異，表明生品以及麩品正丁醇部位能增加濕阻中焦模型大鼠的脾臟質量。有實驗表明，免疫器官脾臟質量的變化可反映出免疫細胞的增值數量及機體免疫功能的變化情況［15］。

4.4 蒼術炮制前后水提物和正丁醇部位提取物的健脾燥濕作用的對比 通過對比蒼術炮制前后水提物和正丁醇部位提取物的藥效學指標尿量，直觀數據顯示除生品高劑量組為水提物與正丁醇部位相近外，生品低劑量、麩品高低劑量組均為水提物低于正丁醇部位，顯示水提物的去濕作用稍弱于正丁醇部位。

通過對比蒼術炮制前后水提物和正丁醇部位提取物的藥效學指標AQP2，直觀數據顯示生品高低劑量、麩品高低劑量組均為水提物高于正丁醇部位，顯示水提物的緩和燥性的作用弱于正丁醇部位提取物。

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