銀藍(lán)調(diào)脂膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清脂質(zhì)水平的影響

陳玉興，黃雪君，杜鐵良，曾曉會(huì)，姚 楠，黃丹娥(廣東省中醫(yī)研究所，廣東廣州 510095)

我國(guó)心腦血管疾病的發(fā)病率已經(jīng)排在各種疾病之首［1］，高脂血癥是構(gòu)成心腦血管疾病的危險(xiǎn)因素之一，是動(dòng)脈粥樣硬化、脂肪肝、冠心病、糖尿病、肥胖癥等的伴發(fā)癥及誘發(fā)因素，降脂治療對(duì)預(yù)防和降低冠心病、腦梗死等的發(fā)生率、病死率具有重要意義［2］。銀藍(lán)調(diào)脂膠囊為中藥六類新藥，經(jīng)臨床十余年應(yīng)用篩選形成，由銀杏葉、絞股藍(lán)等中藥組成，具有益氣健脾、活血化瘀、祛痰利濕等功效，主要適用于氣虛痰瘀阻痹型高脂血癥的治療。本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)其調(diào)血脂作用進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察，為銀藍(lán)調(diào)脂膠囊臨床治療高脂血癥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥品與試劑 銀藍(lán)調(diào)脂膠囊，由廣東省中醫(yī)研究所制劑室制備提供，批號(hào) 090402;非諾貝特膠囊 (法國(guó)利博福尼制藥公司，批號(hào)93640);血脂康膠囊 (北京北大維信生物科技有限公司，批號(hào)20090210);膽固醇 (廣州合達(dá)生物科技有限公司，批號(hào)20090520);豬油，市售豬板油煉制，臨用現(xiàn)煉;丙基硫氧嘧啶 (廣州康和藥業(yè)有限公司，批號(hào)20090211);吐溫80(廣東達(dá)濠精細(xì)化學(xué)品公司，批號(hào)20080107);1，2-丙二醇 (天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)20081014);膽固醇試劑盒、甘油三酯試劑盒 (上?？菩郎锛夹g(shù)研究所，批號(hào)20090912、20090907);直接高密度脂蛋白膽固醇試劑盒、直接低密度脂蛋白膽固醇試劑盒 (中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)090162、090191);LPL/HL測(cè)試盒、FFA測(cè)試盒 (南京建成生物工程研究所，批號(hào)20090829、20090812);載脂蛋白A1測(cè)定試劑盒、載脂蛋白B測(cè)定試劑盒 (上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，批號(hào)20090816、20090714)。

1.2 動(dòng)物 SPF級(jí)新西蘭兔，雌雄各半，體質(zhì)量1.8～2.4 kg，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(粵)2008－0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)№0055268。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)境:廣東省中醫(yī)研究所SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，許可證號(hào)SCXK(粵)2005-0059。

1.3 儀器 JJ3000動(dòng)物電子秤 (G＆G公司);BS224S電子天平 (d=0.1 g)(德國(guó)SARTORIUS公司);HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋 (金壇市富華儀器有限公司);3K30離心機(jī)(SIGMA公司);752N型紫外分光光度計(jì) (上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

2 方法

2.1 高脂乳劑配制 參照文獻(xiàn)［3］并加以改進(jìn):①稱取250 g豬油置2000 mL燒杯中，加熱到100℃左右使其溶解，緩慢加入100 g膽固醇，攪拌至完全溶解，再加入5 g丙硫氧嘧啶和250 mL吐溫-80，充分?jǐn)噭颉＂谕瑫r(shí)在另一燒杯中加入300 mL蒸餾水和1，2-丙二醇200 mL，放在電爐上加熱至60℃，然后加入20 g脫氧膽酸鈉，充分?jǐn)嚢柚钡酵耆芙?。③然后將兩種溶液充分混勻，即制成脂肪乳劑。

2.2 實(shí)驗(yàn)步驟［4］SPF級(jí)新西蘭兔42只，雌雄各半，隨機(jī)抽取6只 (雌雄各半)作為正常對(duì)照組，其余36只新西蘭兔均為高脂乳劑組。高脂乳劑組新西蘭兔每天上午9時(shí)左右灌胃給予高脂乳劑10 mL/kg，正常對(duì)照組新西蘭兔同法灌胃給予蒸餾水10 mL/kg，每天1次，連續(xù)2周。2周后42只家兔均禁食16 h再由耳緣靜脈采血2 mL，離心分離血清，按膽固醇試劑盒、甘油三酯試劑盒說(shuō)明書(shū)用752N型紫外分光光度計(jì)測(cè)定新西蘭兔血清中TC、TG水平。測(cè)定后高脂乳劑組新西蘭兔以TC水平分成6組，每組6只，分別為高脂乳劑組 (模型對(duì)照組)、高脂乳劑+非諾貝特組、高脂乳劑+血脂康組、高脂乳劑+銀藍(lán)高劑量組、高脂乳劑+銀藍(lán)中劑量組、高脂乳劑+銀藍(lán)低劑量組。非諾貝特、血脂康劑量分別為0.051 g/kg、0.112 g/kg，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊高、中、低劑量分別為2.668 g生藥/kg(0.560 g/kg)、1.334 g生藥/kg(0.280 g/kg)、0.667 g生藥/kg(0.140 g/kg)。分組后除正常對(duì)照組新西蘭兔外其余各組新西蘭兔仍每天上午9時(shí)左右灌胃給予高脂乳劑10 mL/kg，4 h后各給藥組按劑量給予相應(yīng)藥物，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組給予蒸餾水，給藥體積均為10 mL/kg，每天1次，連續(xù)給藥4周。末次給藥前各組新西蘭兔均禁食不禁水16 h，末次給藥1 h后取血，離心分離血清，按試劑盒說(shuō)明書(shū)用752 N型紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定新西蘭兔血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoAI、ApoB、LPL、HL和FFA的量。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清TC、TG的影響 在造模2周后 (給藥前)各組造模新西蘭兔與正常對(duì)照組新西蘭兔相比，血清TC、TG的量均顯著升高 (P＜0.01)。給藥4周后，與正常對(duì)照組新西蘭兔相比，模型對(duì)照組新西蘭兔血清TC、TG的量仍顯著升高 (P＜0.01);與模型對(duì)照組相比，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊 2.668、1.334、0.667 g生藥/kg 3個(gè)劑量均能顯著降低飲食性高脂血癥新西蘭兔血清TC、TG的量 (P＜0.01)。詳見(jiàn)表1。

表1 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清TC、TG的影響 (，n=6)

表1 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清TC、TG的影響 (，n=6)

注:①非諾貝特組、血脂康組劑量單位為g/kg，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊劑量單位為g生藥/kg;②與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。(下表同)

組別 劑量給藥后TC/(mmol·L －1) TG/(mmol·L － 1) TC/(mmol·L － 1) TG/(mmol·L － 1給藥前)正常對(duì)照組 — 1.159±0.293 0.779±0.116 1.040±0.247 1.026±0.283模型對(duì)照組 — 10.785±2.144＊＊ 3.684±0.928＊＊ 20.143±6.103＊＊ 3.232±0.839＊＊非諾貝特組 0.051 10.354±2.902＊＊ 4.141±0.760＊＊ 12.023±6.125## 2.038±1.145#血脂康組 0.112 10.719±1.984＊＊ 4.025±0.829＊＊ 10.253±6.099## 2.084±0.844#銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 2.668 10.952±2.540＊＊ 4.080±1.106＊＊ 9.153±4.238## 1.169±0.244##銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 1.334 10.752±2.690＊＊ 3.743±1.014＊＊ 10.804±2.434## 1.464±0.395##銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 0.667 10.847±2.430＊＊ 3.822±0.826＊＊ 9.577±3.365## 1.736±0.547##

3.2 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清HDL-c、LDL-c的影響 給藥4周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血清LDL-c的量顯著升高 (P＜0.01);與模型對(duì)照組相比，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊2.668、1.334、0.667 g生藥/kg 3個(gè)劑量能顯著降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清LDL-c的量 (P＜0.01)，并在一定程度上提高HDL-c的量。詳見(jiàn)表2。

3.3 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清ApoA1、ApoB的影響 給藥4周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組新西蘭兔血清 ApoA1、ApoB含有量明顯升高 (P＜0.01)、ApoA1/ApoB比值顯著下降 (P＜0.01);與模型對(duì)照組相比，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊2.668、1.334、0.667 g生藥/kg 3個(gè)劑量組新西蘭兔血清ApoA1、ApoB的量明顯降低 (P＜0.01)，ApoA1/ApoB比值顯著升高 (P＜0.01)。詳見(jiàn)表3。

表2 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清HDL-c、LDL-c的影響(，n=6)

表2 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清HDL-c、LDL-c的影響(，n=6)

組別 劑量 HDL-c/(mmol·L －1)LDL-c/(mmol·L －1)正常對(duì)照組 —0.959±0.354 1.506±0.902模型對(duì)照組 — 1.811±0.722 21.297±5.346＊＊非諾貝特組 0.051 2.418±0.545 6.918±2.322##血脂康組 0.112 2.505±1.254 4.746±1.531##銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 2.668 2.052±0.603 8.115±2.674##銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 1.334 2.105±0.723 6.504±5.182##銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 0.667 2.155±0.782 8.146±3.224##

表3 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清ApoA1、ApoB的影響 (，n=6)

表3 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清ApoA1、ApoB的影響 (，n=6)

ApoA1/ApoB正常對(duì)照組 —組別 劑量 ApoA1/(g·L－1) ApoB/(g·L－1)0.549±0.056 0.092±0.037 6.672±2.366模型對(duì)照組 — 1.188±0.355＊＊ 1.462±0.479＊＊ 0.881±0.331＊＊非諾貝特組 0.051 0.807±0.148## 0.684±0.289## 1.331±0.438##血脂康組 0.112 0.743±0.168## 0.453±0.209## 1.980±1.072##銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 2.668 0.851±0.201## 0.434±0.217## 2.411±1.450##銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 1.334 0.756±0.165## 0.365±0.221## 2.670±1.310##銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 0.667 0.758±0.119## 0.508±0.319## 1.929±0.864##

3.4 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清LPL、HL、總酯酶活性的影響 給藥4周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血清LPL、HL和總酯酶活性無(wú)顯著性差異 (P＞0.05);與模型對(duì)照組相比，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊2.668 g生藥/kg劑量明顯升高實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清LPL、總酯酶活性 (P＜0.01)。見(jiàn)表4。

表4 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清LPL、HL、總酯酶活性的影響 (，n=6)

表4 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清LPL、HL、總酯酶活性的影響 (，n=6)

組別 劑量 LPL/(U·mL－1) HL/(U·mL－1) 總酯酶/(U·mL－1)正常對(duì)照組 —3.447±0.875 3.144±1.166 6.591±1.682模型對(duì)照組 — 4.004±1.208 3.477±1.152 7.481±2.142非諾貝特組 0.051 5.648±0.987 4.716±1.300 10.364±1.755血脂康組 0.112 3.394±0.872 6.216±3.043# 9.610±2.535銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 2.668 6.477±1.350## 5.496±0.918 11.973±1.776##銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 1.334 4.648±1.279 3.489±1.213 8.136±2.167銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組0.667 4.254±1.110 3.197±1.658 7.451±2.363

3.5 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清游離脂肪酸 (FFA)的影響 給藥4周后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血清FFA的量明顯升高 (P＜0.05);與模型對(duì)照組相比，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊2.668 g生藥/kg劑量明顯降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清FFA量 (P＜0.05)。詳見(jiàn)表5。

表5 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清游離脂肪酸FFA的影響(，n=6)

表5 對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥新西蘭兔血清游離脂肪酸FFA的影響(，n=6)

組別 劑量 FFA/(μmol·L－1)正常對(duì)照組 —336.283±150.806模型對(duì)照組 — 952.802±266.420*非諾貝特組 0.051 703.540±305.316#血脂康組 0.112 805.310±510.888銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 2.668 547.198±350.979#銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組 1.334 775.811±640.739銀藍(lán)調(diào)脂膠囊組0.667 949.853±795.962

4 討論

高脂血癥是指血液中一種或多種脂質(zhì)成分異常增高，并由此引發(fā)一系列臨床病理表現(xiàn)的病癥［5］。2004年全國(guó)通過(guò)體檢發(fā)現(xiàn)患高脂血癥的人數(shù)達(dá)到1.6億，中國(guó)每十個(gè)人中就有一人患有血脂異常，隨著生活水平提高，血脂異常對(duì)我國(guó)國(guó)人的危險(xiǎn)上升到原來(lái)的3～5倍，不僅如此，我國(guó)12個(gè)大城市、25家三甲醫(yī)院對(duì)2136例高膽固醇血癥患者的調(diào)查顯示，血脂控制達(dá)標(biāo)率僅為26.5%［6］，我國(guó)血脂異常的防治狀況異常嚴(yán)峻。

西醫(yī)對(duì)高脂血癥的研究和治療取得了較大的成果，臨床常用的調(diào)血脂西藥主要有［7-8］:①貝特類，該類藥物通過(guò)激動(dòng)PPARα，增加LPL酶活性，降低甘油三酯和膽固醇，但常有惡心、腹脹、腹瀉、白細(xì)胞減少等不良反應(yīng);②他汀類，作用靶標(biāo)為HMG-COA，主要降低膽固醇，降脂作用強(qiáng)，起效快，但有頭痛、失眠、惡心等不良反應(yīng);③煙酸類，降低血清甘油三酯的作用較強(qiáng)，但易產(chǎn)生皮膚紅斑、熱感、瘙癢;④多烯不飽和脂肪酸類，該類藥物與膽固醇結(jié)合成酯，促進(jìn)其降解為膽汁酸，使血漿膽固醇濃度下降，該類藥物具有抗血小板凝集作用，故需謹(jǐn)慎使用;⑤膽固醇吸收抑制劑，代表藥物Ezetimibe，該藥通過(guò)與膽汁酸結(jié)合，阻斷膽汁酸重吸收，促進(jìn)膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸，從而降低體內(nèi)膽固醇，常見(jiàn)不良反應(yīng)有腹脹、惡心、便秘，不適合患有胃腸道疾病病人使用。此外，近年來(lái)他汀類、貝特類與他汀類合用引起的橫紋肌溶解這一副作用受到了越來(lái)越多的關(guān)注，這嚴(yán)重影響了當(dāng)前兩大降血脂藥物在臨床上長(zhǎng)期應(yīng)用的安全性［9］。高脂血癥臨床需長(zhǎng)期用藥，西藥長(zhǎng)期用藥所引起的肝腎功能、肌肉損害及停藥后血脂反跳一直是西醫(yī)治療本病的難題［10］。

當(dāng)前，降血脂藥物研究策略及靶標(biāo)主要有影響膽固醇合成、干擾脂質(zhì)代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程、促進(jìn)高密度脂蛋白的形成、抑制低密度脂蛋白的形成以及抑制膽固醇的吸收等［11-12］。高脂血癥病因病機(jī)較為復(fù)雜，由多因素引起并呈現(xiàn)多器官、多靶點(diǎn)同時(shí)病變的趨勢(shì)，與西藥單組分、單靶標(biāo)的作用模式相比，中藥的多組分、多靶點(diǎn)、毒副作用小、整體調(diào)節(jié)的作用特點(diǎn)更具優(yōu)勢(shì)。充分發(fā)揮中醫(yī)藥的特色和優(yōu)勢(shì)治療高脂血癥具有廣闊的應(yīng)用前景［13］。

中醫(yī)認(rèn)為，脂質(zhì)代謝紊亂乃由臟氣虧虛、氣化功能失調(diào)所致。因血脂為水谷精微物質(zhì)所化，參與機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)與代謝。若臟氣虧虛，氣化功能失調(diào)，不能運(yùn)化輸布水谷精微至全身，多余之脂質(zhì)則會(huì)滯留沉淀于血脈肌肉之中形成脂濁，進(jìn)而影響血脈津液之運(yùn)行以致痰濁、瘀血內(nèi)著，終成臟氣虧虛，痰瘀互結(jié)之錯(cuò)綜復(fù)雜之病理變化［14］。故痰濁瘀血阻滯是高脂血癥的重要的病理基礎(chǔ)，高脂血癥的發(fā)生主要?dú)w結(jié)于脾、腎，脾腎虛弱為本，痰瘀互結(jié)為標(biāo)［15］。

銀藍(lán)調(diào)脂膠囊由銀杏葉、絞股藍(lán)等中藥組成，既可健脾益氣，又可消痰濕，去瘀血，標(biāo)本兼治，適用于氣虛痰瘀阻痹型高脂血癥的治療。本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，銀藍(lán)調(diào)脂膠囊能夠顯著降低外源性飲食性高脂血癥新西蘭兔TC、TG水平，升高HDL-c水平，降低LDL-c水平。其作用機(jī)理是通過(guò)降低ApoB水平減少了LDL-c的合成;通過(guò)升高LPL和總酯酶活性促進(jìn)TG的水解代謝;通過(guò)降低FFA水平促進(jìn)了TG的代謝活動(dòng)等。

本實(shí)驗(yàn)初步研究了銀藍(lán)調(diào)脂膠囊對(duì)新西蘭兔的調(diào)脂作用，研究結(jié)果令人期待，值得進(jìn)一步深入研究其作用機(jī)理。

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