血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2參與臭氧暴露導(dǎo)致的小鼠肺部炎癥及氣道重塑

臭氧是一種常見(jiàn)的二次空氣污染物，現(xiàn)代社會(huì)的快速工業(yè)化和城市化導(dǎo)致化石等礦物燃料的燃燒大量增加，臭氧已成為城市環(huán)境的主要污染物。世界上超過(guò)92%的人口經(jīng)常暴露在臭氧中。流行病學(xué)研究表明，臭氧暴露可引起人群呼吸系統(tǒng)疾病的死亡率和住院率增加。毒理學(xué)研究顯示，急性臭氧暴露導(dǎo)致呼吸道上皮破壞，蛋白質(zhì)泄漏和中性粒細(xì)胞在支氣管肺泡空間募集，導(dǎo)致小鼠肺部炎癥和氣道高反應(yīng)性。慢性臭氧暴露會(huì)導(dǎo)致慢性肺部炎癥、肺氣腫和間質(zhì)纖維化，并導(dǎo)致人和嚙齒動(dòng)物的肺功能降低。雖然臭氧污染帶來(lái)的健康風(fēng)險(xiǎn)已受到普遍關(guān)注，但其毒理學(xué)機(jī)制仍不清楚，仍然需要深入研究。

近年來(lái)，作為SARS-CoV-2的主要受體，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2（ACE2）在肺部疾病發(fā)病機(jī)制中的作用越來(lái)越受到關(guān)注。ACE2是一種跨膜蛋白酶，存在于肺泡上皮細(xì)胞和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中，在肺中有豐富的表達(dá)。它的主要作用是從血管緊張素II（Ang II）生成Ang1-7，后者通過(guò)Mas受體作用于肺，發(fā)揮有益作用，包括血管舒張和抑制炎癥和纖維化。在博萊霉素、脂多糖或細(xì)顆粒物（PM2.5）誘導(dǎo)的急性肺損傷動(dòng)物模型中，使用重組人ACE2 或ACE2激活劑可顯著改善肺功能并減少肺部炎癥及纖維化。因此，ACE2 在肺損傷的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用，能夠?yàn)榉螕p傷提供保護(hù)，是解決炎癥和纖維化的主要因素之一。目前，ACE2在臭氧所致肺部炎癥中的作用尚未闡明。

在本研究中，我們通過(guò)構(gòu)建臭氧暴露導(dǎo)致的小鼠肺損傷模型來(lái)探究ACE2在此過(guò)程中的作用，這項(xiàng)工作將有助于揭示臭氧誘導(dǎo)肺部炎癥的機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 6～8周齡SPF級(jí)野生型（WT）C57BL/6J小鼠16只，體質(zhì)量20～25 g，雌雄各半，購(gòu)自鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；6～8周齡SPF級(jí)ACE2 敲除（KO）小鼠16只，體質(zhì)量20～25 g，雌雄各半，購(gòu)自北京唯尚立德生物科技有限公司。動(dòng)物均常規(guī)飼養(yǎng)于鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院動(dòng)物房。32只小鼠隨機(jī)分為4組，8只/組，分別暴露在過(guò)濾空氣或臭氧（0.8 ppm）中，每天暴露3 h，連續(xù)暴露5 d。所有實(shí)驗(yàn)過(guò)程均符合單位和國(guó)家有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用的規(guī)定。

1.1.2 試劑和儀器 動(dòng)式染毒柜（天津合普，HOPEMED 8050）；便攜式臭氧發(fā)生器（廣州創(chuàng)環(huán)，CH-KTB2G）；便攜式室內(nèi)Z-1200 臭氧檢測(cè)儀（Environmental Sensors）；BCA 試劑盒（北京博邁德）；小鼠ELISA檢測(cè)試劑盒（武漢華美生物）；酶標(biāo)儀（Tecan）；TRIzol試劑（Invitrogen）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Yeasen）；q225-0207熒光定量PCR儀器（酷博科技公司）。

HE染色和Masson染色顯示，空氣組兩組小鼠肺泡和支氣管上皮結(jié)構(gòu)完整，纖毛排列整齊，未見(jiàn)明顯的膠原沉積；臭氧WT組小鼠支氣管上皮可見(jiàn)輕度纖毛脫落，出現(xiàn)了輕度的肺泡壁破裂和融合，伴有少量纖維蛋白滲出，臭氧ACE2 KO組小鼠支氣管腔中的免疫浸潤(rùn)和細(xì)胞碎片增加，支氣管上皮出現(xiàn)增厚，纖毛缺損，周?chē)写罅垦仔约?xì)胞浸潤(rùn)，出現(xiàn)了更嚴(yán)重的肺泡壁破裂或融合，肺泡隔增厚，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)40%～60%，更多的混合炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維化或組織學(xué)以及充血在肺組織中觀(guān)察到（圖3）。肺組織損傷及炎癥病理學(xué)評(píng)分顯示臭氧暴露組小鼠總評(píng)分及各項(xiàng)目評(píng)分顯著高于空氣暴露組的相應(yīng)的同基因型小鼠，臭氧組的ACE2 KO組小鼠的總評(píng)分及各項(xiàng)目評(píng)分均顯著高于WT組小鼠（＜0.01，表2）。由表2可見(jiàn)，Masson 染色定量結(jié)果顯示，臭氧組小鼠在肺組織支氣管和肺泡周?chē)嬖诖罅康哪z原沉積，臭氧組ACE2 KO小鼠肺組織的支氣管和肺泡的膠原沉積陽(yáng)性區(qū)域面積為（19.62±3.16）%、（21.63±3.78）%，高于臭氧組WT小鼠的（6.49±1.34）%、（4.44±0.99）%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05，表3）。

1.2 方法

對(duì)4組小鼠BALF中炎癥因子進(jìn)行測(cè)定，空氣暴露的兩組小鼠各炎癥因子沒(méi)有差異，臭氧暴露的小鼠各炎癥因子明顯高于空氣暴露的相應(yīng)基因型小鼠，臭氧暴露的ACE2 KO小鼠的BALF中的IL-6、IL-1β、TNF-α、KC和MCP-1水平均高于WT小鼠，兩組IL-1β水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.001，圖4）。

教育部于2000年發(fā)布了《高等學(xué)校儀器設(shè)備管理辦法》的通知，在第二章第九條中界定了貴重儀器設(shè)備的判定標(biāo)準(zhǔn)，以購(gòu)置金額為主要判斷標(biāo)準(zhǔn)，即單價(jià)在人民幣10萬(wàn)元(含)以上的儀器即為貴重儀器設(shè)備。

1.2.2 小鼠基因型鑒定 ACE2基因位于X染色體上，本研究所用的ACE2 KO小鼠是根據(jù)目標(biāo)基因ACE2的蛋白保守區(qū)和基因組結(jié)構(gòu)，選擇敲除位置為轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物202的exon7，利用CRISPR/Cas9技術(shù)使目的基因從exon7開(kāi)始發(fā)生移碼突變。剪鼠尾，長(zhǎng)度約3 mm即可。鼠尾裂解液加蛋白酶K（25 mg/mL），每1 mL加20 μL蛋白酶K，每管加150 μL含蛋白酶K的裂解液。55 ℃水浴過(guò)夜。13 000 r/min離心5 min，將上清轉(zhuǎn)移至新的EP管，每管加500 μL異丙醇，渦旋10 s。室溫條件下13 000 r/min離心5 min，棄上清。每管加500 μL的70%的酒精洗滌，將EP管置于通風(fēng)櫥干燥5～10 min。每管加150 μL的TE緩沖液，55 ℃水浴1 h至底物完全溶解。進(jìn)行PCR擴(kuò) 增（ACE2-KO-F：GGAAGCTGAAGTATTCTTG GTC；ACE2-KO-R：CCAAGCAAATGGGCAGGGG AG），擴(kuò)增體系：94 ℃，2 min；（98 ℃10 s；60 ℃30 s；68 ℃45 s）35個(gè)循環(huán)；68 ℃終延伸10 min。最后進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳。

1.2.3 肺組織HE染色與Masson染色病理學(xué)觀(guān)察 如我們之前的研究所述。暴露結(jié)束后第2天，取小鼠肺組織置于10%的福爾馬林中充分固定24 h，梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，5 μm厚度切片，置烤箱中65 ℃烤片2 h。石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水后進(jìn)行常規(guī)HE和Masson染色，再經(jīng)脫水、透明后，中性樹(shù)膠封片，普通光鏡下觀(guān)察肺組織變化和膠原沉積情況。根據(jù)張妍迪等報(bào)道的分級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行肺部炎癥病理評(píng)分。

Nia等進(jìn)行了錐頭銅彈(phosphor bronze)侵徹半無(wú)限混凝土靶板的實(shí)驗(yàn)[7]，彈體沖擊速度為650 ～1 000 m·s-1，混凝土靶材料為39～65.6 MPa 。圖10給出了本文模型的預(yù)測(cè)結(jié)果與實(shí)驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比，模型采用相同質(zhì)量的柱形彈來(lái)代替實(shí)驗(yàn)中的錐頭彈進(jìn)行計(jì)算，L0為47.4 mm，r0為2.5 mm，彈、靶材料各參數(shù)值列于表1中。

1.2.4 支氣管肺泡灌洗液（BALF）的收集與BALF總細(xì)胞計(jì)數(shù) 暴露結(jié)束24 h后處死小鼠，進(jìn)行頸部解剖，暴露氣管進(jìn)行插管，進(jìn)行支氣管肺泡灌洗。BALF經(jīng)4 ℃，1500 r/min離心10 min后，收集上清并置于-20 ℃冰箱保存。經(jīng)離心沉淀的細(xì)胞成分重懸在光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)。

ISA95標(biāo)準(zhǔn)中，MES也已經(jīng)被納入其中，在圖1所示的ISA95功能層次模型中，MES位于第3層，負(fù)責(zé)生產(chǎn)過(guò)程的管理。

1.2.7 氣道生理評(píng)估 用計(jì)算機(jī)控制的小動(dòng)物呼吸機(jī)（FlexiVent，加拿大）對(duì)小鼠進(jìn)行通氣，并通過(guò)強(qiáng)迫振蕩技術(shù)進(jìn)行呼吸力學(xué)的測(cè)量。用0、10、25、100 mg/mL的霧化乙酰甲膽堿激發(fā)小鼠，并通過(guò)每30 s持續(xù)5 min的阻力測(cè)量來(lái)確定氣道反應(yīng)。呼吸阻力（Rrs）測(cè)量值（以每秒每毫升氣體中的水厘米數(shù)表示；cm HO/mL/s）在每個(gè)劑量下取平均值，并與初始基線(xiàn)測(cè)量值一起繪制成圖表。

臭氧是一種與不良健康結(jié)局高度相關(guān)的氧化性氣態(tài)污染物。最近，臭氧暴露對(duì)健康造成重大不利影響的證據(jù)不斷增加。本研究成功構(gòu)建了臭氧暴露所致的小鼠肺部炎癥模型，研究的結(jié)果顯示，與空氣對(duì)照組相比，臭氧暴露能導(dǎo)致小鼠肺組織會(huì)發(fā)生明顯的炎癥病理學(xué)變化，在肺組織支氣管和肺泡周?chē)霈F(xiàn)大量的膠原沉積，炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α、KC、MCP-1等水平均有所上調(diào)，氣道重塑相關(guān)指標(biāo)MMP-9、MMP-13、TIMP4、COL1A1、TGF-β的mRNA水平上調(diào)，氣道反應(yīng)性增高。這與之前臭氧暴露所致的小鼠肺部炎癥模型的研究結(jié)果一致。

1.2.5 支氣管肺泡灌洗液總蛋白和炎癥因子的測(cè)定BALF 中的總蛋白含量測(cè)定采用BCA 法（北京博邁德）。采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定BALF中白介素（IL-6）、IL-1β、TNF-α、趨化因子（C-X-C基序）配體1 趨化因子（CXCL1/KC）和單核細(xì)胞趨化蛋白（MCP-1）水平，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

暴露期間各組小鼠正常飲水、進(jìn)食，各組小鼠體質(zhì)量在染毒前后無(wú)顯著差異，小鼠在暴露期間可見(jiàn)呼吸急促、精神萎靡。

2 結(jié)果

2.1 小鼠體征

1.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，Image J 軟件計(jì)算膠原沉積陽(yáng)性區(qū)域面積，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組以上均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩組間均數(shù)的比較，采用獨(dú)立樣本檢驗(yàn)或′檢驗(yàn)。＜0.05時(shí)認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 小鼠基因型鑒定

WT小鼠PCR產(chǎn)物大小為142bp，KO小鼠為120bp。經(jīng)過(guò)電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖所示（圖1）。

2.3 BALF總細(xì)胞計(jì)數(shù)與總蛋白的測(cè)定

普通光學(xué)顯微鏡下對(duì)4組小鼠的BALF中的總細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，臭氧暴露的小鼠的總細(xì)胞數(shù)高于相應(yīng)的空氣組的同基因型小鼠，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。臭氧暴露的ACE KO組小鼠的總細(xì)胞數(shù)高于WT組小鼠，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05，圖2A）；BCA法測(cè)定BALF的總蛋白含量，臭氧暴露的小鼠的BALF的總蛋白高于相應(yīng)的空氣組的同基因型小鼠，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。臭氧暴露的ACE KO組小鼠的總蛋白含量略高于WT小鼠，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05，圖2B）。

2.4 肺組織病理觀(guān)察

樂(lè)山市作為一個(gè)有千年歷史的地區(qū)，不但有豐厚的當(dāng)?shù)靥禺a(chǎn)及資源，更有非常多樣的語(yǔ)言種類(lèi)。四川省發(fā)布的相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，樂(lè)山市民族分布比較多樣，有大約41個(gè)民族定居該地。其中，漢族、回族、苗族及彝族是樂(lè)山世代存在的民族成份。在這些民族文化中，語(yǔ)言種類(lèi)較為多樣，在少數(shù)民族語(yǔ)言分布中，作為四川雜居地域的主體民族，藏語(yǔ)的使用較為廣泛，且有不同地區(qū)的方言，還有回族語(yǔ)言、彝族語(yǔ)等多種。而樂(lè)山的各地方言種類(lèi)也是比較多的，以井研縣為主的東部分地區(qū)大部分為自貢方言的使用地，而市區(qū)主要是樂(lè)山方言，此外還有嘉南語(yǔ)等方言。得益于樂(lè)山市語(yǔ)言的多樣性，諸多語(yǔ)言學(xué)研究者在做理論研究之前，都會(huì)親自到樂(lè)山地區(qū)做試點(diǎn)調(diào)查。

2.5 BALF中炎癥因子的測(cè)定

1.2.1 臭氧暴露 采用臭氧發(fā)生器產(chǎn)生臭氧，通過(guò)調(diào)節(jié)臭氧發(fā)生器（廣州創(chuàng)環(huán)，CH-KTB）和流量計(jì)將臭氧濃度控制在0.8 ppm，并連接動(dòng)式染毒柜，將臭氧導(dǎo)入動(dòng)式染毒柜的暴露室中，兩組小鼠放入臭氧暴露室，每天暴露3 h，持續(xù)5 d。

治療后，2組患者的膝關(guān)節(jié)功能評(píng)分較治療前均顯著升高(均P<0.05)，觀(guān)察組膝關(guān)節(jié)評(píng)分更高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.6 肺組織中氣道重塑相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

用qRT-PCR檢測(cè)肺組織勻漿中氣道重塑相關(guān)指標(biāo)mRNA的表達(dá)。結(jié)果表明，臭氧暴露的ACE2 KO小鼠的肺組織中的MMP-9、MMP-13、TIMP4、COL1A1、TGF-β的mRNA水平均明顯高于WT組小鼠，兩組的MMP-9、TIMP4、COL1A1、TGF-β的mRNA水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.01，圖5）。

2.7 氣道生理評(píng)估

將各組小鼠對(duì)乙酰甲膽堿的氣道反應(yīng)進(jìn)行了直接測(cè)量，結(jié)果顯示，以空氣暴露的小鼠比較，臭氧暴露組小鼠增強(qiáng)了對(duì)不同劑量乙酰甲膽堿的敏感性?？諝獗┞督M小鼠和臭氧暴露組小鼠在0、10、25、100 mg/mL的乙酰甲膽堿濃度下的氣道反應(yīng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖6）。

3 討論

1.2.6 熒光定量PCR檢測(cè)肺組織中氣道重塑相關(guān)指標(biāo)的mRNA表達(dá) 使用TRIzol試劑（Invitrogen）從肺中提取總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Yeasen）產(chǎn)生cDNA，反應(yīng)體系及條件參照說(shuō)明書(shū)。使用酷博科技公司q225-0207熒光定量PCR儀器檢測(cè)MMP-9、MMP-13、金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMP）4、I型膠原α1（COL1A1）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）的轉(zhuǎn)錄水平。所有基因表達(dá)水平均通過(guò)2方法計(jì)算，以β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化。實(shí)驗(yàn)中使用的引物序列如表1所示。

李克強(qiáng)同志曾在大會(huì)上發(fā)言，表明留抵退稅的相關(guān)問(wèn)題確實(shí)是沒(méi)有想到的意外，但是也無(wú)可厚非，政策的施行總會(huì)遇到瓶頸，既然發(fā)現(xiàn)了問(wèn)題，就會(huì)出臺(tái)相應(yīng)的措施來(lái)彌補(bǔ)不足。想要解決這個(gè)大麻煩也有許多難點(diǎn)，本來(lái)增值稅就是多檔次稅率并存，退稅時(shí)也會(huì)因?yàn)檫@個(gè)問(wèn)題出一些紕漏，再加上退稅也加重了財(cái)政的負(fù)擔(dān)，因此這也不利于革新之后的發(fā)展。

研究表明肺ACE2 缺失會(huì)導(dǎo)致PM2.5、吸入酸引起的肺損傷、敗血癥以及SARS-CoV和SARSCoV-2引起的嚴(yán)重感染。然而，我們對(duì)ACE2是否參與了臭氧誘導(dǎo)的肺部炎癥及其在臭氧誘導(dǎo)的肺部炎癥中生物學(xué)機(jī)制了解十分有限。本研究的結(jié)果顯示，臭氧暴露的ACE2 KO小鼠肺組織的炎癥病理學(xué)變化相比WT組更加嚴(yán)重，ACE2 KO組小鼠肺組織的支氣管和肺泡的膠原沉積陽(yáng)性區(qū)域面積較WT 組明顯增加，IL-6、IL-1β、TNF-α、KC和MCP-1等炎癥因子的水平顯著上調(diào)，肺組織中氣道重塑相關(guān)指標(biāo)的MMP-9、MMP-13、TIMP4、COL1A1、TGF-β的mRNA水平顯著升高，這說(shuō)明暴露于臭氧環(huán)境下會(huì)誘導(dǎo)小鼠肺部的炎癥和損傷，促進(jìn)相關(guān)促炎細(xì)胞因子和氣道重塑相關(guān)指標(biāo)的釋

放，造成實(shí)質(zhì)性細(xì)胞損傷，肺泡空間塌陷，氣體交換受損，且ACE2的缺失會(huì)加重肺組織的炎癥與損傷。與之前探討ACE2在PM2.5、酸霧誘導(dǎo)的肺損傷研究中的結(jié)果類(lèi)似。

根據(jù)式(7)得出無(wú)偏灰色預(yù)測(cè)模型的未知參數(shù)A、B為：A=-0.035 362，B=7.877 3，則無(wú)偏灰色預(yù)測(cè)模型為：

此外，本研究顯示臭氧暴露的WT 小鼠和ACE2 KO小鼠的氣道阻力沒(méi)有出現(xiàn)明顯差異。呼吸道上皮形成物理屏障和粘膜免疫的第一道防線(xiàn)，有研究顯示，臭氧可直接破壞上皮屏障，細(xì)支氣管上皮細(xì)胞屏障立即受損，細(xì)胞應(yīng)激、脫屑和死亡，1～2 h內(nèi)即可發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)和DNA泄漏，引起氣道阻力增加。本研究連續(xù)暴露5 d，時(shí)間略長(zhǎng)，這可能與臭氧暴露的兩組小鼠氣道阻力沒(méi)有發(fā)現(xiàn)差異直接相關(guān)。但本研究中檢測(cè)肺組織勻漿中氣道重塑相關(guān)指標(biāo)mRNA 的表達(dá)水平，臭氧暴露的ACE2 KO小鼠的明顯高于WT組小鼠。我們的結(jié)果表明ACE2的缺失會(huì)增強(qiáng)臭氧在鼠肺中誘導(dǎo)的氣道重塑反應(yīng)。這與之前探討ACE2/Ang-（1-7）/Mas 軸參與了哮喘的氣道重塑的結(jié)果類(lèi)似。盡管本研究證實(shí)了ACE2參與了臭氧誘導(dǎo)的小鼠肺部炎癥及氣道重塑，但具體的機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究，ACE2的缺失與不同時(shí)間、濃度臭氧誘導(dǎo)的肺部炎癥及氣道重塑之間是否存在劑量依賴(lài)關(guān)系，ACE2的干預(yù)是否可以緩解不同時(shí)間、濃度臭氧誘導(dǎo)的肺部炎癥及氣道重塑等仍需進(jìn)一步的研究來(lái)進(jìn)行闡明。

近年來(lái)，ACE2因其作為SARS-CoV-2的主要受體而飽受關(guān)注。許多研究發(fā)現(xiàn)，ACE2參與了肺部炎癥與感染性疾病的過(guò)程，包括細(xì)菌性肺炎、哮喘、新冠肺炎等。過(guò)去的大量報(bào)告表明，ACE2可作為一種保護(hù)性分子，維持生理穩(wěn)態(tài)并防止多種病理的發(fā)展。ACE2 拮抗經(jīng)典RAS 系統(tǒng)的激活，防止器官損傷，預(yù)防高血壓、糖尿病和心血管疾病。肺組織具有高RAS活性，是Ang II合成的主要場(chǎng)所。Ang II是一種有效的肺血管收縮劑。RAS 活性參與哮喘的氣道重塑，ACE2/Ang-（1-7）/Mas 軸可防止肺成纖維細(xì)胞遷移和肺纖維化。外源性Ang-（1-7）可抵消血管緊張素II 的作用，直接抑制TGF-β在肺泡上皮細(xì)胞中誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。Ang II不僅能促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的生長(zhǎng)反應(yīng)，還能直接促進(jìn)血管重構(gòu)，預(yù)防與肺損傷相關(guān)的肺炎和分流。然而，Ang II 也能促進(jìn)肺水腫的發(fā)生，損害肺功能。ACE2 通過(guò)將Ang I 轉(zhuǎn)化為Ang（1-9）以及將Ang II轉(zhuǎn)化為Ang（1-7）來(lái)調(diào)節(jié)Ang I和Ang II的水平，后者與MAS和AT2受體結(jié)合形成腎素-血管緊張素的“保護(hù)臂”系統(tǒng)導(dǎo)致血管舒張、一氧化氮合成增加、抗炎和抗纖維化作用。這抵消了Ang II/AT1臂的“經(jīng)典”血管收縮、促炎和促纖維化作用。研究表明，ACE2的過(guò)度表達(dá)可抑制炎癥損傷和細(xì)胞增殖，從而保護(hù)肺、心臟和腎臟免受損傷的影響。ACE2 KO小鼠已被用于與酸吸入、PM2.5相關(guān)的肺損傷、敗血癥和嚴(yán)重感染（例如SARS-CoV、SARS-CoV-2和流感病毒），表明ACE2的缺失會(huì)導(dǎo)致急性肺衰竭。有研究顯示，在小鼠中敲除ACE2導(dǎo)致ACE/ACE2和Ang II/Ang-（1-7）之間的不平衡，從而加重肺損傷，而外源性ACE2顯著減少損傷病變。它抵消了ACE 的功能并負(fù)調(diào)節(jié)了Ang II水平。

綜上，ACE2與臭氧誘導(dǎo)的小鼠肺部炎癥及氣道重塑有關(guān)，但是ACE2在臭氧誘導(dǎo)小鼠肺部炎癥及氣道重塑中的作用與機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。