植物生長延緩劑B9對(duì)馬鈴薯種質(zhì)資源離體保存的影響

朱云芬+程群+李衛(wèi)東+徐怡+陳永波

摘要：以MS為基本培養(yǎng)基，以馬鈴薯（Solarium tuberosum L.）品種鄂馬鈴薯5號(hào)脫毒試管苗為試驗(yàn)材料，研究不同濃度B9對(duì)馬鈴薯試管苗離體保存的影響。結(jié)果表明，B9對(duì)馬鈴薯試管苗的生長有不同程度的抑制作用，延長了試管苗的保存時(shí)間，其中濃度為60 mg/L的B9的保存效果最為理想，可以使試管苗保存10個(gè)月以上，且生長健壯，成活率達(dá)76%，不影響試管苗繼代。

關(guān)鍵詞：馬鈴薯（Solarium tuberosum L.）；脫毒試管苗；生長延緩劑B9；離體保存

中圖分類號(hào)：S482.8+1； S532 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）15-3501-03

Effects of Plant Growth Retardants B9 on Preservating Potato Germplasm in Vitro

ZHU Yun-fen1，2，CHENG Qun1，2，LI Wei-dong，XU Yi1，2，CHEN Yong-bo1

（1. Enshi Autonomous Prefecture Academy of Agricultural Sciences，Enshi 445002，Hubei，China；

2. The Ministry of Agriculture Centra China Potato Observation Experiment Station，Enshi 445002，Hubei，China）

Abstract：Using MS as the basic medium and virus-free plantlets of E-malingshu No.5 as the experimental materials， the effects of different B9 concentration on the preservation of potato germplasm in vitro were studied. The results showed that there were different degrees of inhibition of B9 on potato plantlet growth. The preservation time was prolonged. The preservation effect of B9 with concentration of 60 mg/L was best for making the plantlets stored for more than 10 months with strong growth， survival rate of 76%. It didn't affect the plantlet subculture.

Key words： potato（Solarium tuberosum L.）； virus-free plantlets； growth retardant B9； preservation in vitro

收稿日期：2013-12-13

基金項(xiàng)目：湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心資助項(xiàng)目（2007-620-001-03）

作者簡介：朱云芬（1982-），女，湖北荊門人，農(nóng)藝師，碩士，主要從事馬鈴薯組織培養(yǎng)及病毒檢測工作，（電話）15071884902（電子信箱）

azhu19@163.com。

馬鈴薯（Solarium tuberosum L.）屬茄科茄屬，具有豐富的營養(yǎng)，含有維生素A、維生素C和各種礦物質(zhì)，優(yōu)質(zhì)淀粉的含量約為16.5%，還含有大量木質(zhì)素等，譽(yù)為人類的“第二面包”，是一種糧食、蔬菜、飼料及工業(yè)原料兼用型高產(chǎn)高效作物。馬鈴薯是世界第四大糧食作物，其種植面積和產(chǎn)量僅次于小麥、水稻和玉米，我國已成為世界上馬鈴薯種植面積最大的國家[1]，據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前我國馬鈴薯的種植面積在500萬hm2以上，占世界的1/4，總產(chǎn)量約8500萬t，占世界的1/5。近年來，我國馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展速度快，馬鈴薯在我國國民經(jīng)濟(jì)增長中占有重要的地位。我國擁有豐富的馬鈴薯種質(zhì)資源，具有獨(dú)特的區(qū)域適應(yīng)性，馬鈴薯種質(zhì)資源的多樣性為新品種的選育提供了必要的物質(zhì)基礎(chǔ)[2，3]。我國馬鈴薯育種者高度重視種質(zhì)資源的搜集引進(jìn)、鑒定、創(chuàng)新和利用工作，隨著馬鈴薯品種的逐漸增多，如何有效地保存引進(jìn)的和現(xiàn)有的種質(zhì)資源，成了各個(gè)地方在育種過程中必須解決的首要問題。

馬鈴薯是一種無性繁殖作物，盡管它自身可以通過有性繁殖方式產(chǎn)生種子，但由于其具有高度的雜合分離特性，既不能直接用于生產(chǎn)，也不適宜作為種質(zhì)加以保存和利用。因而，生產(chǎn)上長期采用的是田間薯塊的形式進(jìn)行保存和繁殖，但由于其繁殖器官體積較大，含水量較高，在存儲(chǔ)的過程中容易發(fā)芽，這樣不僅要花費(fèi)大量的成本，占用一定面積的土地，而且由于常年的田間種植和越冬貯藏，導(dǎo)致各種病蟲害不斷侵染和病毒的積累，品種不斷地退化。馬鈴薯資源的保存一直是全球關(guān)注的一個(gè)重點(diǎn)問題[4]，尋求更加簡單、科學(xué)和高效的保存方法，己成為當(dāng)今馬鈴薯種質(zhì)資源保存的迫切需要，到目前為止，已經(jīng)建立了多種馬鈴薯種質(zhì)資源的保存方法。20世紀(jì)50年代和60年代，植物組織培養(yǎng)技術(shù)的不斷完善和發(fā)展，在短時(shí)期內(nèi)得到大量組培試管苗[5]，這為離體保存植物種質(zhì)資源提供了可行性。

恩施州農(nóng)業(yè)科學(xué)院馬鈴薯研究所長期從事馬鈴薯品種資源的引進(jìn)、鑒定、篩選與創(chuàng)新，現(xiàn)已保存了近300份馬鈴薯種質(zhì)資源試管苗材料，為安全保存構(gòu)建好的品種資源，本試驗(yàn)研究了植物生長延緩劑B9對(duì)馬鈴薯試管苗的生長和有效保存期的影響，以期得到簡單高效的馬鈴薯種質(zhì)材料保存方法，進(jìn)一步節(jié)省人力、物力和財(cái)力成本， 為馬鈴薯種質(zhì)資源有效保存提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試植物材料為鄂馬鈴薯5號(hào)脫毒試管苗，由恩施州農(nóng)業(yè)科學(xué)院保存。B9粉劑是由四川國光實(shí)業(yè)公司生產(chǎn)的國光牌植物生長調(diào)節(jié)劑。

1.2 試驗(yàn)方法

篩選生長較一致的脫毒試管苗，將其剪切成帶一個(gè)腋芽、長約1 cm的莖段，接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行B9的單因子試驗(yàn)。以MS為基本培養(yǎng)基，B9的濃度設(shè)置為0、10、20、40、60、80 mg/L，培養(yǎng)基中均加入6 g/L瓊脂，80 g/L蔗糖，pH調(diào)為5.8～6.0，配制后高壓滅菌20 min。在每支試管內(nèi)接種3個(gè)莖段，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)10支。培養(yǎng)條件為：光照時(shí)間16 h/d，光照度2000 lx，溫度（22±2） ℃。接種后的第30 天，從每個(gè)處理隨機(jī)抽取3支試管，調(diào)查莖長、莖粗、葉片、根數(shù)、根長等表型性狀，計(jì)算平均值；接種后的30、90、180、240、300 d調(diào)查試管苗成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 B9不同濃度處理對(duì)試管苗株高的影響

試管苗在未添加B9的培養(yǎng)基中長得很快，而在含B9的培養(yǎng)基中，試管苗的生長情況隨濃度的變化有顯著的差異。由表1可知，在0～60 mg/L范圍內(nèi)B9使用濃度與莖長呈反比，隨著B9濃度的增加， 莖長逐漸變短，節(jié)間變短，有明顯的抑制作用；但B9濃度達(dá)到80 mg/L時(shí)，莖長又增至3.7 cm。

2.2 B9不同濃度處理對(duì)試管苗莖粗的影響

如表1所示，在0～60 mg/L范圍內(nèi)，隨著B9濃度的增加，對(duì)莖粗的增加也有一定促進(jìn)作用，當(dāng)B9濃度為40 mg/L和60 mg/L時(shí)，平均莖粗達(dá)到最高值0.72 mm，B9使用濃度與莖粗之間呈正比的關(guān)系說明在一定濃度范圍內(nèi)B9對(duì)馬鈴薯試管苗的莖粗有直接的作用，表現(xiàn)為矮化壯苗。

2.3 B9不同濃度處理對(duì)試管苗根的影響

除對(duì)照外，在一定范圍內(nèi)，隨著B9濃度的增加，根數(shù)和根長增加。由表1可知，當(dāng)濃度達(dá)到60 mg/L時(shí)，平均根數(shù)達(dá)到6.0條，且平均根長也高達(dá)2.2 cm，但隨著濃度的繼續(xù)增加，對(duì)根的生長有了一定的抑制作用。

2.4 B9不同濃度處理對(duì)試管苗葉數(shù)的影響

如表1所示，B9濃度為80 mg/L時(shí)，馬鈴薯試管苗的葉片數(shù)較少，僅為5.5片，其他濃度的B9對(duì)葉片生長無明顯的抑制作用，且葉片較大、葉色為深綠色，可以促進(jìn)試管苗的光合作用，有利于進(jìn)行離體保存。

2.5 B9不同濃度處理對(duì)試管苗成活率的影響

觀察試管苗生長情況可知，在對(duì)照（CK）培養(yǎng)基中，試管苗生長速度很快，48 d左右就能長滿整支試管，隨后試管苗彎曲向下生長，長勢逐漸變?nèi)?，植株分枝比較多，越靠近頂端的莖越細(xì)，呈白色，葉片較小，多數(shù)老葉退綠變黃，根細(xì)長，變成黃色，90 d以后就逐步枯死，試管苗成活率較低；從不同B9濃度對(duì)試管苗成活率的影響（圖1）可以看出，添加不同濃度的B9對(duì)試管苗保存也有一定程度的影響。當(dāng)濃度為60 mg/L時(shí)，試管苗成活率最高，此濃度下試管苗前期生長緩慢，保存時(shí)間越長，生長速度越低， 植株矮化，分枝少，葉片呈深綠色，在90 d試管苗依然健壯，試管苗成活率達(dá)到100%，培養(yǎng)基顏色無明顯變化，并且緩慢生長，試管苗在300 d時(shí)成活率還能達(dá)到76%，試管苗長勢較旺，較適宜試管苗的繼代和保存。

3 小結(jié)與討論

離體保存法作為植物種質(zhì)資源圃活體保存替代技術(shù)，是保證植物種質(zhì)資源遺傳多樣性的一種新興途徑，已經(jīng)成為植物種質(zhì)資源保存研究領(lǐng)域的重要方向。離體保存實(shí)質(zhì)上是異地保存方式的派生，因其是無菌培養(yǎng)，節(jié)約空間、勞動(dòng)力和維持開支相對(duì)較少，易于國際間種質(zhì)資源交流和瀕危物種的搶救等眾多優(yōu)點(diǎn)而得到了世界各國的高度重視，具有廣闊的應(yīng)用前景[6]。然而，常規(guī)種質(zhì)資源離體保存中頻繁的繼代培養(yǎng)不僅浪費(fèi)人力物力，而且使試管苗出現(xiàn)徒長，幼苗纖細(xì)瘦弱，葉小而泛黃的現(xiàn)象，影響了馬鈴薯試管苗的質(zhì)量和移栽成活率，不利于種質(zhì)資源的長期保存。

因此為了減少操作和勞動(dòng)力、節(jié)約保存成本，延長繼代間隔時(shí)間、減少繼代次數(shù)、抑制保存材料的生長和減少營養(yǎng)消耗，保證種質(zhì)的遺傳穩(wěn)定性一直是組織培養(yǎng)離體保存的主要研究方向，其中延緩生長速度是其研究的主要目標(biāo)。目前使用較多的延緩生長的措施有：改變培養(yǎng)環(huán)境（如降低培養(yǎng)溫度，減少氧氣含量，減少光照等）、調(diào)整培養(yǎng)基養(yǎng)分水平、添加滲透性化合物或生長延緩劑等，緩慢生長保存方法最大的優(yōu)點(diǎn)在于可以使保存材料維持緩慢而不斷的生長[7]。

B9是一種高效低毒的植物生長延緩劑，可抑制莖端下部區(qū)域的細(xì)胞分裂和伸長生長，從而一定程度地抑制新枝徒長，縮短節(jié)間長度，增加葉片厚度及葉綠素量， 誘導(dǎo)不定根形成，刺激根系生長，對(duì)提高植物的抗逆性， 促進(jìn)壯苗生根等都有重要作用[8-10]。試驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)基內(nèi)加入B9對(duì)鄂馬鈴薯5號(hào)試管苗影響效果較好，表現(xiàn)為莖長縮短，莖增粗， 植株生長緊湊， 葉片較綠， 適度地抑制了試管苗的縱向生長，使試管苗生長健壯。當(dāng)B9濃度為60 mg/L時(shí)，馬鈴薯試管苗長勢最好，保存時(shí)間最長，成活率最高，適宜馬鈴薯種質(zhì)資源的離體保存。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳伊里，屈冬玉.馬鈴薯產(chǎn)業(yè)與冬作農(nóng)業(yè)[M].哈爾濱：哈爾濱工程大學(xué)出版社，2006.

[2] 金黎平，屈冬玉，謝開云.我國馬鈴薯種質(zhì)資源和育種技術(shù)研究進(jìn)展[J].種子，2003（5）：98-100.

[3] BRADSHAW J E， BRYAN G J， RAM G. Genetic resources（including wild and cultivated Solasum species） and progress in their utilization in potato breeding[J]. Potato Research， 2006，49：49-65.

[4] LIZARRAGA R， HUAMAN A， DODDS J H. In vitro conservation of potato germplasm at the international potato center[J]. American Potato Journal， 1989，66：253-269.

[5] 劉慶忠，趙紅軍.高灌藍(lán)莓的組織培養(yǎng)及快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，2002，38（3）：253.

[6] SUDHERSAN C，ABOEL-NIL M，HUSSAIN J. Tissue culture technology for the conservation and propagation of certain native plants[J]. Journal of Arid Environments，2003，54（1）：133-147.

[7] 王 蒂.植物組織培養(yǎng)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

[8] REN X Q. Effects of different plant growth inhibitors on growth and flowering of narcissus[J]. Hunan Agricultural Science and Technology News Letter， 2003， 4（4）：6-9.

[9] 王小蘭.植物生長調(diào)節(jié)劑在園藝作物上的應(yīng)用[J].甘肅廣播電視大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，16（3）：46-49.

[10]張勝珍，客紹英，馬作東，等.植物延緩劑PP333和B9對(duì)菘藍(lán)試管苗生長的影響[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，22（5）：1428-1431.

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試植物材料為鄂馬鈴薯5號(hào)脫毒試管苗，由恩施州農(nóng)業(yè)科學(xué)院保存。B9粉劑是由四川國光實(shí)業(yè)公司生產(chǎn)的國光牌植物生長調(diào)節(jié)劑。

1.2 試驗(yàn)方法

篩選生長較一致的脫毒試管苗，將其剪切成帶一個(gè)腋芽、長約1 cm的莖段，接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行B9的單因子試驗(yàn)。以MS為基本培養(yǎng)基，B9的濃度設(shè)置為0、10、20、40、60、80 mg/L，培養(yǎng)基中均加入6 g/L瓊脂，80 g/L蔗糖，pH調(diào)為5.8～6.0，配制后高壓滅菌20 min。在每支試管內(nèi)接種3個(gè)莖段，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)10支。培養(yǎng)條件為：光照時(shí)間16 h/d，光照度2000 lx，溫度（22±2） ℃。接種后的第30 天，從每個(gè)處理隨機(jī)抽取3支試管，調(diào)查莖長、莖粗、葉片、根數(shù)、根長等表型性狀，計(jì)算平均值；接種后的30、90、180、240、300 d調(diào)查試管苗成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 B9不同濃度處理對(duì)試管苗株高的影響

試管苗在未添加B9的培養(yǎng)基中長得很快，而在含B9的培養(yǎng)基中，試管苗的生長情況隨濃度的變化有顯著的差異。由表1可知，在0～60 mg/L范圍內(nèi)B9使用濃度與莖長呈反比，隨著B9濃度的增加， 莖長逐漸變短，節(jié)間變短，有明顯的抑制作用；但B9濃度達(dá)到80 mg/L時(shí)，莖長又增至3.7 cm。

2.2 B9不同濃度處理對(duì)試管苗莖粗的影響

如表1所示，在0～60 mg/L范圍內(nèi)，隨著B9濃度的增加，對(duì)莖粗的增加也有一定促進(jìn)作用，當(dāng)B9濃度為40 mg/L和60 mg/L時(shí)，平均莖粗達(dá)到最高值0.72 mm，B9使用濃度與莖粗之間呈正比的關(guān)系說明在一定濃度范圍內(nèi)B9對(duì)馬鈴薯試管苗的莖粗有直接的作用，表現(xiàn)為矮化壯苗。

2.3 B9不同濃度處理對(duì)試管苗根的影響

除對(duì)照外，在一定范圍內(nèi)，隨著B9濃度的增加，根數(shù)和根長增加。由表1可知，當(dāng)濃度達(dá)到60 mg/L時(shí)，平均根數(shù)達(dá)到6.0條，且平均根長也高達(dá)2.2 cm，但隨著濃度的繼續(xù)增加，對(duì)根的生長有了一定的抑制作用。

2.4 B9不同濃度處理對(duì)試管苗葉數(shù)的影響

如表1所示，B9濃度為80 mg/L時(shí)，馬鈴薯試管苗的葉片數(shù)較少，僅為5.5片，其他濃度的B9對(duì)葉片生長無明顯的抑制作用，且葉片較大、葉色為深綠色，可以促進(jìn)試管苗的光合作用，有利于進(jìn)行離體保存。

2.5 B9不同濃度處理對(duì)試管苗成活率的影響

觀察試管苗生長情況可知，在對(duì)照（CK）培養(yǎng)基中，試管苗生長速度很快，48 d左右就能長滿整支試管，隨后試管苗彎曲向下生長，長勢逐漸變?nèi)?，植株分枝比較多，越靠近頂端的莖越細(xì)，呈白色，葉片較小，多數(shù)老葉退綠變黃，根細(xì)長，變成黃色，90 d以后就逐步枯死，試管苗成活率較低；從不同B9濃度對(duì)試管苗成活率的影響（圖1）可以看出，添加不同濃度的B9對(duì)試管苗保存也有一定程度的影響。當(dāng)濃度為60 mg/L時(shí)，試管苗成活率最高，此濃度下試管苗前期生長緩慢，保存時(shí)間越長，生長速度越低， 植株矮化，分枝少，葉片呈深綠色，在90 d試管苗依然健壯，試管苗成活率達(dá)到100%，培養(yǎng)基顏色無明顯變化，并且緩慢生長，試管苗在300 d時(shí)成活率還能達(dá)到76%，試管苗長勢較旺，較適宜試管苗的繼代和保存。

3 小結(jié)與討論

離體保存法作為植物種質(zhì)資源圃活體保存替代技術(shù)，是保證植物種質(zhì)資源遺傳多樣性的一種新興途徑，已經(jīng)成為植物種質(zhì)資源保存研究領(lǐng)域的重要方向。離體保存實(shí)質(zhì)上是異地保存方式的派生，因其是無菌培養(yǎng)，節(jié)約空間、勞動(dòng)力和維持開支相對(duì)較少，易于國際間種質(zhì)資源交流和瀕危物種的搶救等眾多優(yōu)點(diǎn)而得到了世界各國的高度重視，具有廣闊的應(yīng)用前景[6]。然而，常規(guī)種質(zhì)資源離體保存中頻繁的繼代培養(yǎng)不僅浪費(fèi)人力物力，而且使試管苗出現(xiàn)徒長，幼苗纖細(xì)瘦弱，葉小而泛黃的現(xiàn)象，影響了馬鈴薯試管苗的質(zhì)量和移栽成活率，不利于種質(zhì)資源的長期保存。

因此為了減少操作和勞動(dòng)力、節(jié)約保存成本，延長繼代間隔時(shí)間、減少繼代次數(shù)、抑制保存材料的生長和減少營養(yǎng)消耗，保證種質(zhì)的遺傳穩(wěn)定性一直是組織培養(yǎng)離體保存的主要研究方向，其中延緩生長速度是其研究的主要目標(biāo)。目前使用較多的延緩生長的措施有：改變培養(yǎng)環(huán)境（如降低培養(yǎng)溫度，減少氧氣含量，減少光照等）、調(diào)整培養(yǎng)基養(yǎng)分水平、添加滲透性化合物或生長延緩劑等，緩慢生長保存方法最大的優(yōu)點(diǎn)在于可以使保存材料維持緩慢而不斷的生長[7]。

B9是一種高效低毒的植物生長延緩劑，可抑制莖端下部區(qū)域的細(xì)胞分裂和伸長生長，從而一定程度地抑制新枝徒長，縮短節(jié)間長度，增加葉片厚度及葉綠素量， 誘導(dǎo)不定根形成，刺激根系生長，對(duì)提高植物的抗逆性， 促進(jìn)壯苗生根等都有重要作用[8-10]。試驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)基內(nèi)加入B9對(duì)鄂馬鈴薯5號(hào)試管苗影響效果較好，表現(xiàn)為莖長縮短，莖增粗， 植株生長緊湊， 葉片較綠， 適度地抑制了試管苗的縱向生長，使試管苗生長健壯。當(dāng)B9濃度為60 mg/L時(shí)，馬鈴薯試管苗長勢最好，保存時(shí)間最長，成活率最高，適宜馬鈴薯種質(zhì)資源的離體保存。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳伊里，屈冬玉.馬鈴薯產(chǎn)業(yè)與冬作農(nóng)業(yè)[M].哈爾濱：哈爾濱工程大學(xué)出版社，2006.

[2] 金黎平，屈冬玉，謝開云.我國馬鈴薯種質(zhì)資源和育種技術(shù)研究進(jìn)展[J].種子，2003（5）：98-100.

[3] BRADSHAW J E， BRYAN G J， RAM G. Genetic resources（including wild and cultivated Solasum species） and progress in their utilization in potato breeding[J]. Potato Research， 2006，49：49-65.

[4] LIZARRAGA R， HUAMAN A， DODDS J H. In vitro conservation of potato germplasm at the international potato center[J]. American Potato Journal， 1989，66：253-269.

[5] 劉慶忠，趙紅軍.高灌藍(lán)莓的組織培養(yǎng)及快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，2002，38（3）：253.

[6] SUDHERSAN C，ABOEL-NIL M，HUSSAIN J. Tissue culture technology for the conservation and propagation of certain native plants[J]. Journal of Arid Environments，2003，54（1）：133-147.

[7] 王 蒂.植物組織培養(yǎng)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

[8] REN X Q. Effects of different plant growth inhibitors on growth and flowering of narcissus[J]. Hunan Agricultural Science and Technology News Letter， 2003， 4（4）：6-9.

[9] 王小蘭.植物生長調(diào)節(jié)劑在園藝作物上的應(yīng)用[J].甘肅廣播電視大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，16（3）：46-49.

[10]張勝珍，客紹英，馬作東，等.植物延緩劑PP333和B9對(duì)菘藍(lán)試管苗生長的影響[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，22（5）：1428-1431.

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試植物材料為鄂馬鈴薯5號(hào)脫毒試管苗，由恩施州農(nóng)業(yè)科學(xué)院保存。B9粉劑是由四川國光實(shí)業(yè)公司生產(chǎn)的國光牌植物生長調(diào)節(jié)劑。

1.2 試驗(yàn)方法

篩選生長較一致的脫毒試管苗，將其剪切成帶一個(gè)腋芽、長約1 cm的莖段，接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行B9的單因子試驗(yàn)。以MS為基本培養(yǎng)基，B9的濃度設(shè)置為0、10、20、40、60、80 mg/L，培養(yǎng)基中均加入6 g/L瓊脂，80 g/L蔗糖，pH調(diào)為5.8～6.0，配制后高壓滅菌20 min。在每支試管內(nèi)接種3個(gè)莖段，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)10支。培養(yǎng)條件為：光照時(shí)間16 h/d，光照度2000 lx，溫度（22±2） ℃。接種后的第30 天，從每個(gè)處理隨機(jī)抽取3支試管，調(diào)查莖長、莖粗、葉片、根數(shù)、根長等表型性狀，計(jì)算平均值；接種后的30、90、180、240、300 d調(diào)查試管苗成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 B9不同濃度處理對(duì)試管苗株高的影響

試管苗在未添加B9的培養(yǎng)基中長得很快，而在含B9的培養(yǎng)基中，試管苗的生長情況隨濃度的變化有顯著的差異。由表1可知，在0～60 mg/L范圍內(nèi)B9使用濃度與莖長呈反比，隨著B9濃度的增加， 莖長逐漸變短，節(jié)間變短，有明顯的抑制作用；但B9濃度達(dá)到80 mg/L時(shí)，莖長又增至3.7 cm。

2.2 B9不同濃度處理對(duì)試管苗莖粗的影響

如表1所示，在0～60 mg/L范圍內(nèi)，隨著B9濃度的增加，對(duì)莖粗的增加也有一定促進(jìn)作用，當(dāng)B9濃度為40 mg/L和60 mg/L時(shí)，平均莖粗達(dá)到最高值0.72 mm，B9使用濃度與莖粗之間呈正比的關(guān)系說明在一定濃度范圍內(nèi)B9對(duì)馬鈴薯試管苗的莖粗有直接的作用，表現(xiàn)為矮化壯苗。

2.3 B9不同濃度處理對(duì)試管苗根的影響

除對(duì)照外，在一定范圍內(nèi)，隨著B9濃度的增加，根數(shù)和根長增加。由表1可知，當(dāng)濃度達(dá)到60 mg/L時(shí)，平均根數(shù)達(dá)到6.0條，且平均根長也高達(dá)2.2 cm，但隨著濃度的繼續(xù)增加，對(duì)根的生長有了一定的抑制作用。

2.4 B9不同濃度處理對(duì)試管苗葉數(shù)的影響

如表1所示，B9濃度為80 mg/L時(shí)，馬鈴薯試管苗的葉片數(shù)較少，僅為5.5片，其他濃度的B9對(duì)葉片生長無明顯的抑制作用，且葉片較大、葉色為深綠色，可以促進(jìn)試管苗的光合作用，有利于進(jìn)行離體保存。

2.5 B9不同濃度處理對(duì)試管苗成活率的影響

觀察試管苗生長情況可知，在對(duì)照（CK）培養(yǎng)基中，試管苗生長速度很快，48 d左右就能長滿整支試管，隨后試管苗彎曲向下生長，長勢逐漸變?nèi)?，植株分枝比較多，越靠近頂端的莖越細(xì)，呈白色，葉片較小，多數(shù)老葉退綠變黃，根細(xì)長，變成黃色，90 d以后就逐步枯死，試管苗成活率較低；從不同B9濃度對(duì)試管苗成活率的影響（圖1）可以看出，添加不同濃度的B9對(duì)試管苗保存也有一定程度的影響。當(dāng)濃度為60 mg/L時(shí)，試管苗成活率最高，此濃度下試管苗前期生長緩慢，保存時(shí)間越長，生長速度越低， 植株矮化，分枝少，葉片呈深綠色，在90 d試管苗依然健壯，試管苗成活率達(dá)到100%，培養(yǎng)基顏色無明顯變化，并且緩慢生長，試管苗在300 d時(shí)成活率還能達(dá)到76%，試管苗長勢較旺，較適宜試管苗的繼代和保存。

3 小結(jié)與討論

離體保存法作為植物種質(zhì)資源圃活體保存替代技術(shù)，是保證植物種質(zhì)資源遺傳多樣性的一種新興途徑，已經(jīng)成為植物種質(zhì)資源保存研究領(lǐng)域的重要方向。離體保存實(shí)質(zhì)上是異地保存方式的派生，因其是無菌培養(yǎng)，節(jié)約空間、勞動(dòng)力和維持開支相對(duì)較少，易于國際間種質(zhì)資源交流和瀕危物種的搶救等眾多優(yōu)點(diǎn)而得到了世界各國的高度重視，具有廣闊的應(yīng)用前景[6]。然而，常規(guī)種質(zhì)資源離體保存中頻繁的繼代培養(yǎng)不僅浪費(fèi)人力物力，而且使試管苗出現(xiàn)徒長，幼苗纖細(xì)瘦弱，葉小而泛黃的現(xiàn)象，影響了馬鈴薯試管苗的質(zhì)量和移栽成活率，不利于種質(zhì)資源的長期保存。

因此為了減少操作和勞動(dòng)力、節(jié)約保存成本，延長繼代間隔時(shí)間、減少繼代次數(shù)、抑制保存材料的生長和減少營養(yǎng)消耗，保證種質(zhì)的遺傳穩(wěn)定性一直是組織培養(yǎng)離體保存的主要研究方向，其中延緩生長速度是其研究的主要目標(biāo)。目前使用較多的延緩生長的措施有：改變培養(yǎng)環(huán)境（如降低培養(yǎng)溫度，減少氧氣含量，減少光照等）、調(diào)整培養(yǎng)基養(yǎng)分水平、添加滲透性化合物或生長延緩劑等，緩慢生長保存方法最大的優(yōu)點(diǎn)在于可以使保存材料維持緩慢而不斷的生長[7]。

B9是一種高效低毒的植物生長延緩劑，可抑制莖端下部區(qū)域的細(xì)胞分裂和伸長生長，從而一定程度地抑制新枝徒長，縮短節(jié)間長度，增加葉片厚度及葉綠素量， 誘導(dǎo)不定根形成，刺激根系生長，對(duì)提高植物的抗逆性， 促進(jìn)壯苗生根等都有重要作用[8-10]。試驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)基內(nèi)加入B9對(duì)鄂馬鈴薯5號(hào)試管苗影響效果較好，表現(xiàn)為莖長縮短，莖增粗， 植株生長緊湊， 葉片較綠， 適度地抑制了試管苗的縱向生長，使試管苗生長健壯。當(dāng)B9濃度為60 mg/L時(shí)，馬鈴薯試管苗長勢最好，保存時(shí)間最長，成活率最高，適宜馬鈴薯種質(zhì)資源的離體保存。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳伊里，屈冬玉.馬鈴薯產(chǎn)業(yè)與冬作農(nóng)業(yè)[M].哈爾濱：哈爾濱工程大學(xué)出版社，2006.

[2] 金黎平，屈冬玉，謝開云.我國馬鈴薯種質(zhì)資源和育種技術(shù)研究進(jìn)展[J].種子，2003（5）：98-100.

[3] BRADSHAW J E， BRYAN G J， RAM G. Genetic resources（including wild and cultivated Solasum species） and progress in their utilization in potato breeding[J]. Potato Research， 2006，49：49-65.

[4] LIZARRAGA R， HUAMAN A， DODDS J H. In vitro conservation of potato germplasm at the international potato center[J]. American Potato Journal， 1989，66：253-269.

[5] 劉慶忠，趙紅軍.高灌藍(lán)莓的組織培養(yǎng)及快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，2002，38（3）：253.

[6] SUDHERSAN C，ABOEL-NIL M，HUSSAIN J. Tissue culture technology for the conservation and propagation of certain native plants[J]. Journal of Arid Environments，2003，54（1）：133-147.

[7] 王 蒂.植物組織培養(yǎng)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

[8] REN X Q. Effects of different plant growth inhibitors on growth and flowering of narcissus[J]. Hunan Agricultural Science and Technology News Letter， 2003， 4（4）：6-9.

[9] 王小蘭.植物生長調(diào)節(jié)劑在園藝作物上的應(yīng)用[J].甘肅廣播電視大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，16（3）：46-49.

[10]張勝珍，客紹英，馬作東，等.植物延緩劑PP333和B9對(duì)菘藍(lán)試管苗生長的影響[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，22（5）：1428-1431.