枸杞花中總多酚含量的測定

2014-10-22 10:07:01程劉柯貝盞臨張欣

湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年17期

關(guān)鍵詞：枸杞

程劉柯+貝盞臨+張欣

摘要：以水和95%乙醇為提取劑，采用超聲提取法提取寧夏枸杞（Lycium barbarum L.）花中的多酚類化合物。結(jié)果表明，水提取物和95%乙醇提取物中多酚類化合物分別含有60.75 mg和13.55 mg，總量為74.30 mg，約占干枸杞花的1.49%。

關(guān)鍵詞：枸杞（Lycium barbarum L.）；沒食子酸；總多酚

中圖分類號：O657.32 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）17-4164-03

Determing the Total Polyphenol Content in Lycium barbarum Flowers

CHENG Liu-ke， BEI Zhan-lin， ZHANG Xin

（College of Biological Science and Engineering，Beifang University of Nationalities，Yinchuan 750021， China）

Abstract： Using H2O and 95% ethanol solution as extractant， polyphenol compounds were extracted from the dry flowers power of flowers of Lycium barbarum L. in Ningxia with ultrasonic-wave method. The results showed that 60.75 mg and 13.55 mg of polyphenol compounds were obtained from the extractive by H2O and 95% ethanol， solution respectively， accounting for 1.49% of dry flower.

Key words： Lycium barbarum L. flower； gallic acid； total polyphenol

枸杞（Lycium barbarum L.）全身是寶，《本草綱目》記載，“春采枸杞葉，名天精草；夏采花，名長生草；秋采子，名枸杞子；冬采根，名地骨皮”。枸杞花通常單生或二至數(shù)朵簇生于葉腋或短枝上紫色或淡紫色，花梗細(xì)，花期4～10月。對枸杞的藥用成分及藥用機(jī)理等相關(guān)研究已相當(dāng)深入。

多酚是一大類廣泛存在于植物體內(nèi)的次生代謝產(chǎn)物，其含量僅次于纖維素、半纖維素和木質(zhì)素。狹義上認(rèn)為植物多酚是單寧或鞣質(zhì)；廣義上還包括小分子酚類化合物，如花青素、兒茶素、櫟精、沒食子酸等[1，2]。目前植物多酚在很多方面都有深入研究[3-5]，例如，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)（用于制螯合肥料），生態(tài)環(huán)境保護(hù)（用來降低廢水中重金屬毒害），食品工業(yè)（用作天然抗氧化劑），醫(yī)藥（具有抑菌、抗病毒、抗癌等作用）等方多面都有深入的研究，多酚類化合物具有很大的應(yīng)用價值。對枸杞花方面，沈劍明等[6]研究了寧夏枸杞的花聯(lián)合現(xiàn)象，劉蘭英等[7]對枸杞花色素提取工藝進(jìn)行了研究，貝盞臨等[8，9]研究了枸杞花的抗氧化活性、作用以及其總黃酮的含量，其他有關(guān)枸杞花有效成分方面的研究尚未見報道。本研究對枸杞花的總多酚含量進(jìn)行了相關(guān)研究，旨在為今后探索枸杞花的活性功能因子，為枸杞花的食用和開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 試驗材料新鮮的枸杞花于2012年8月采自寧夏中寧縣康灘枸杞園，標(biāo)本保存于北方民族大學(xué)生物科學(xué)系植物標(biāo)本室。將新鮮枸杞花（寧杞1號）放置于陰涼處陰干，然后用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，粉碎后的粉末放入干凈的密封塑料袋中保藏備用。

1.1.2 藥品沒食子酸、Folin-Ciocalteu（1 mol/L）、碳酸鈉、無水乙醇（99.5%），以上試劑均為分析純，均購自北京化學(xué)試劑公司。

1.1.3 試驗器材 FW100型高速萬能粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）、FA2104B型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）、KQ-500B型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）、減壓蒸餾裝置、ALPHA型冷凍干燥機(jī)（德國Marin Christ 公司）、4K15型離心機(jī)（Sigma公司）、UV765型紫外-可見分光光度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品的制備

1）水提取物的制備。稱取粉碎后的枸杞花5.0 g，置于250 mL錐形瓶，加入去離子水100 mL，用超聲儀（40 kHz，50 ℃）超聲提取50 min，得到的提取液經(jīng)真空抽濾，得到澄清的提取液。殘渣用去離子水洗滌，并在相同的條件下提取2～3次，收集提取液，合并，減壓蒸餾得到濃縮液。

2）乙醇提取物的制備：向去離子水提取后的枸杞花殘渣中加入60%的乙醇溶液，提取方法及步驟與去離子水提取方法相同。然后，再依次用85%和95%的乙醇對經(jīng)60%乙醇提取后的殘渣再次進(jìn)行提取。合并以上60%、85%和95%乙醇提取液，對所得提取液進(jìn)行減壓蒸餾，得到乙醇提取液。將以上所得的乙醇提取液在-70 ℃下冷凍過夜。最后，用真空干燥機(jī)進(jìn)行真空干燥，真空干燥時間為27 h，干燥結(jié)束后收集粉末狀物質(zhì)。向粉末狀物體中加入95%乙醇溶液，得到可溶于95%乙醇溶液與不溶于95%乙醇溶液的沉淀。經(jīng)10 000 r/min離心15 min后，得到上清液，上清液即為溶于95%乙醇溶液，記錄最終體積，標(biāo)記為樣品95%乙醇提取物，4 ℃下保藏備用。離心得到的沉淀加入適量的去離子水，大部分溶于去離子水，再經(jīng)10 000 r/min離心15 min，得到溶于去離子水的上清液，此上清液與去離子水提取物溶液合并到一起，并記錄最終的總體積，標(biāo)記為樣品水提取物，在4 ℃下保藏備用。endprint

1.2.2多酚類化合物的測定多酚類化合物的測定方法參照[10-12]，略有改動。

1）最大吸收波長的確定：精確稱取干燥至恒重的沒食子酸5.0 mg，置于100 mL棕色容量瓶中，用去離子水溶解，定容至刻度，搖勻，即得到0.05 mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確吸取0.05 mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液2 mL，加入Folin-Ciocalteu試劑1 mL和7.5%碳酸鈉溶液8 mL；充分混勻后，在50 ℃水浴下保持10 min；迅速冷卻。同時，以未加入沒食子酸的溶液作為空白溶液，于紫外-可見分光光度計在400～900 nm下進(jìn)行掃描。檢測最大吸收峰，最大吸收峰為753 nm。

2）多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精確吸取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，于已標(biāo)記好0、1、2、3、4、5、6、7號的25 mL棕色容量瓶中；再依次加入Folin-Ciocalteu試劑1 mL和7.5%碳酸鈉溶液8 mL；最后用去離子水定容到25 mL；充分混勻，在50 ℃水浴下保持10 min；迅速冷卻。以0號作對照，于753 nm處測定不同濃度的沒食子酸對應(yīng)的吸光值。其中，0-7號標(biāo)準(zhǔn)樣最終得到的濃度為0.000、0.001、0.002、0.003、0.005、0.006、0.007 mg/mL。做3組重復(fù)，取平均值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出回歸方程。

3）樣品水提取物中多酚類化合物的測定：將樣品水提取物稀釋10倍；精確吸取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL液體于已標(biāo)記好0、1、2、3、4、5、6號的25 mL棕色容量瓶中。其余步驟同上。做3組重復(fù)，以0號作對照，于753 nm處測定吸光度。取平均值，記錄各組數(shù)據(jù)，繪制出吸光度隨樣品水提取物體積變化的曲線。在曲線上找到樣品水提取物稀釋10倍，取1 mL樣品所得到的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相對應(yīng)的沒食子酸的濃度，進(jìn)而得出樣品水提取物的多酚類化合物的含量。

4）樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物的測定：精確吸取樣品95%乙醇提取物溶液0.0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0 mL于已標(biāo)記0、1、2、3、4、5、6號的25 mL棕色容量瓶中，其他步驟同樣品水提取物的測定步驟。記錄各組數(shù)據(jù)，繪制出吸光度隨樣品95%乙醇提取物體積的變化曲線。在曲線上找到1 mL 95%乙醇提取物溶液所對應(yīng)的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相對應(yīng)的沒食子酸的濃度，進(jìn)而得到95%乙醇提取物的多酚類化合物的含量。

由水提取物與95%乙醇提取物分別測定的多酚類化合物的含量可得出5 g枸杞干花粉末中含有的多酚類化合物的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溶劑提取所得體積

樣品水提取物的總體積為81 mL，樣品95%乙醇提取物的總體積為126 mL。根據(jù)樣品的總體積計算多酚類化合物和黃酮類化合物的總量。

2.2 多酚類化合物結(jié)果分析

在400～900 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，檢測出最大吸收峰波長為753 nm。由以上數(shù)據(jù)及曲線（表1-表3；圖1-圖3）表明，多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為：y= 100.500 0x+0.013 5（R2=0.999 3）。以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品測定的多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。

樣品水提取物稀釋10倍后，測定多酚類化合物得到的線性回歸方程為：y=0.325 2x-0.006 0 （R2=0.998 3）。則樣品水提取物稀釋10倍后，取1 mL測定的吸光度為0.319 2，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的沒食子酸濃度為0.003 0 mg/L，則樣品水提取物的多酚類化合物總量為60.75 mg。樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物測定得到的線性回歸方程為：y= 0.399 3x+0.045 5 （R2=0.993 4）。同樣的可以計算出樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物總量為13.55 mg?？芍喾宇惢衔锎蠖嗫扇苡谒?，水溶性的多酚類化合物為醇溶性的4.48倍。5 g枸杞干花中含有的多酚類化合物為74.30 mg，即枸杞花中多酚類化合物含量約占1.49%。

3 小結(jié)與討論

采摘的寧夏本地的枸杞花陰干后，對干枸杞花依次采用水、60%、85%、95%乙醇反復(fù)提取，并借用超聲波（40 kHz）在50 ℃下提取50 min。得到的提取物經(jīng)減壓濃縮，真空抽濾等步驟，最終得到水相（樣品水提取物為81 mL）和醇相（樣品95%乙醇提取物為126 mL）兩種提取物。采用Folin-Ciocalteu法，以沒食子酸為參照品，在753 nm處測定樣品水提取物、95%乙醇提取物中多酚類化合物，得到兩者含量分別為60.75 mg和13.55 mg，很顯然水相中的多酚類化合物比醇相中的多，是其4.48倍，其中總多酚類化合物含量為74.30 mg，約占干枸杞花的1.49%。

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