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    β—胡蘿卜素高產(chǎn)菌株的選育

    2014-10-22 09:56:42左樂(lè)余茜煒向夢(mèng)雄蔡俊王常高
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年17期
    關(guān)鍵詞:胡蘿卜素

    左樂(lè)+余茜煒+向夢(mèng)雄+蔡俊+王常高

    摘要:采用紫外線和硫酸二乙酯對(duì)三孢布拉氏霉(Blakeslea trispora)負(fù)菌進(jìn)行了2次誘變處理,通過(guò)平板初篩和三角瓶搖瓶復(fù)篩,得到了一株突變菌株U-D-2,其β-胡蘿卜素產(chǎn)量(1 236 mg/L)較原始菌株(635 mg/L)提高了94.6%。遺傳穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明,該突變菌株具有較好的遺傳穩(wěn)定性。

    關(guān)鍵詞:β-胡蘿卜素;三孢布拉氏霉(Blakeslea trispora);菌株選育

    中圖分類號(hào):Q939.97 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0439-8114(2014)17-4148-03

    Breeding Strain with High β-carotene Production

    ZUO Le, YU Xi-wei, XIANG Meng-xiong, CAI Jun, WANG Chang-gao

    (Key Laboratory of Fermentation Engineering,Ministry of Education/Hubei Provincial Cooperative Innovation Center of Industrial Fermentation/School of Biological Engineering, Hubei University of Technology, Wuhan 430068, China)

    Abstract: Blakeslea trispora, mating type(-), was mutated by utraviolet(UV) and diethylfulfate(DES) twice. One mutant U-D-2 was obtained by plate screening first and shake flask screening second. Its yield of β-carotene(1 236 mg/L) 94.6% was more than that of the orignal train(635 mg/L). The test of genetic stability indicated the genetic stability of mutant was good.

    Key words: β-carotene;Blakeslea trispora;breeding

    β-胡蘿卜素是聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織一致認(rèn)定的A類營(yíng)養(yǎng)色素,是人體內(nèi)維生素A的重要來(lái)源,且具有良好的抗氧化、抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)免疫等功能,在醫(yī)藥、食品著色及營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化、日用化妝品及飼料添加劑等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景[1]。目前,市場(chǎng)上的β-胡蘿卜素產(chǎn)品主要有化學(xué)合成品和天然產(chǎn)品兩種類型。天然β-胡蘿卜素因其功能性強(qiáng)、安全性好及生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)而日益受到人們的青睞。發(fā)酵法是目前生產(chǎn)天然β-胡蘿卜素的主要途徑。在可合成β-胡蘿卜素的微生物中,菌種三孢布拉氏霉無(wú)論是生物量(50 g干菌體/L),還是菌體細(xì)胞中β-胡蘿卜素的含量(可達(dá)菌體干重的1%~5%)都是較理想的,已成為目前國(guó)內(nèi)外研究和生產(chǎn)天然β-胡蘿卜素的主要菌種[2]。在前期發(fā)酵條件優(yōu)化的基礎(chǔ)上[3],本研究通過(guò)各種理化因子對(duì)生產(chǎn)菌株三孢布拉氏霉的負(fù)菌進(jìn)行誘變選育,以期進(jìn)一步提高β-胡蘿卜素的發(fā)酵產(chǎn)量。

    1 材料與方法

    1.1 菌種

    三孢布拉氏霉正菌(Blakeslea trispora +)、三孢布拉氏霉負(fù)菌從中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心購(gòu)買。

    1.2 培養(yǎng)基

    PDA培養(yǎng)基:新鮮馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、自來(lái)水1 000 mL。平板初篩培養(yǎng)基:含有0.3%脫氧膽酸鈉(SDC)的PDA。

    三角瓶復(fù)篩培養(yǎng)基:4%玉米粉、2%大豆粉、1%麩皮浸出液、0.1% KH2PO4、0.05%MgSO4、0.01% 維生素B1、1%植物油,pH 7.0。

    1.3 孢子懸浮液制備

    將活化的三孢布拉氏霉負(fù)菌接種至PDA平板培養(yǎng)基上,26 ℃培養(yǎng)5 d,每個(gè)平板加入20 mL無(wú)菌水,用接種環(huán)輕輕刮洗下表面的孢子,將孢子懸浮液合并轉(zhuǎn)入裝有玻璃珠的無(wú)菌三角瓶中,振蕩將孢子打散形成單孢子懸浮液。

    1.4 孢子誘變處理

    將制備的單孢子懸浮液分別用不同劑量的紫外線(UV)或硫酸二乙酯(DES)進(jìn)行處理,之后將孢子懸液涂布于平板上進(jìn)行培養(yǎng)。

    1.5 突變菌株平板初篩

    將經(jīng)過(guò)誘變處理后的孢子懸浮液涂布在含有0.3%SDC的PDA平板培養(yǎng)基上,26 ℃培養(yǎng)3~5 d,經(jīng)過(guò)多次誘變處理,根據(jù)三孢布拉氏霉負(fù)菌菌落顏色深淺及孢子生長(zhǎng)數(shù)量從平板上挑選了5株比較理想的突變菌株,以供復(fù)篩。

    1.6 突變菌株三角瓶搖瓶復(fù)篩

    將從初篩平板上挑選的菌株接種至三角瓶復(fù)篩培養(yǎng)基中,同時(shí)接入三孢布拉氏霉正菌,26 ℃、180 r/min培養(yǎng)5 d,測(cè)定其β-胡蘿卜素的產(chǎn)量。

    1.7 β-胡蘿卜素產(chǎn)量的測(cè)定

    將每瓶培養(yǎng)好的菌絲分別用雙層紗布過(guò)濾,自來(lái)水沖洗菌絲至濾過(guò)液無(wú)色,擠干菌絲水分后置于真空干燥箱中50 ℃干燥20 h,稱取干菌絲體的重量,計(jì)算生物量。將干菌絲體碾碎,稱取適量干菌體粉末,加入60~90 ℃沸程的石油醚浸泡至菌粉呈白色,測(cè)定浸出液在波長(zhǎng)450 nm下的吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出干菌體中β-胡蘿卜素的含量,再算出β-胡蘿卜素的產(chǎn)量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)曲線

    精確稱取β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品,用60~90 ℃沸程的石油醚溶解并稀釋成不同濃度,分別測(cè)定其在波長(zhǎng)450 nm下的吸光度。以β-胡蘿卜素濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見(jiàn)圖1。endprint

    2.2 紫外線誘變致死曲線

    保持紫外燈功率和照射距離不變,控制不同的時(shí)間照射三孢布拉氏霉負(fù)菌單孢子懸浮液,以照射時(shí)間為橫坐標(biāo),孢子致死率為縱坐標(biāo)繪制致死曲線,結(jié)果見(jiàn)圖2。隨著照射時(shí)間的延長(zhǎng),三孢布拉氏霉負(fù)菌單孢子致死率逐漸升高。一般認(rèn)為致死率在75%左右時(shí)誘變效果較好,但三孢布拉氏霉在任何生長(zhǎng)階段都是多核體,且β-胡蘿卜素高產(chǎn)突變屬于隱形突變,因此必須采用高劑量誘變處理,使孢子形成生理上的單核體,才有可能得到穩(wěn)定的高產(chǎn)突變菌株[4],故后面的誘變處理采用10 min照射。

    2.3 紫外線誘變平板初篩

    經(jīng)過(guò)多次誘變處理,根據(jù)三孢布拉氏霉負(fù)菌菌落顏色深淺及孢子生長(zhǎng)數(shù)量從平板上挑選出了5株比較理想的突變菌株(表1),以供復(fù)篩。

    2.4 紫外線誘變?nèi)瞧繌?fù)篩

    從表2可以看出,初篩得到的突變菌株U-4的β-胡蘿卜素產(chǎn)量最高,為894 mg/L,比原始菌株的產(chǎn)量提高了39.3%,同時(shí)在平板上生長(zhǎng)的孢子也比較豐富,所以選擇突變菌株U-4作為進(jìn)一步誘變的菌株。突變菌株U-5在平板上顏色很深,基本上呈紅色,其β-胡蘿卜素產(chǎn)量與原始菌株相當(dāng),說(shuō)明其菌落顏色可能是一些其他的色素類物質(zhì)。

    2.5 硫酸二乙酯誘變致死曲線

    在10 mL 菌株U-4的孢子懸浮液中加入不同量的DES,以配成不同濃度的DES,充分振蕩使DES分散均勻,30 ℃振蕩處理2 h后,加入5 mL 25%Na2S2O3溶液終止反應(yīng)。以DES的濃度為橫坐標(biāo),孢子致死率為縱坐標(biāo)繪制致死曲線,結(jié)果見(jiàn)圖3。從圖3可以看出,隨著DES濃度的增加,三孢布拉氏霉負(fù)菌孢子致死率逐漸升高。同樣,考慮到三孢布拉氏霉是多核體,后面的誘變選育采用高致死劑量1.6% DES進(jìn)行孢子誘變處理。

    2.6 硫酸二乙酯誘變初篩

    利用DES對(duì)突變菌株U-4的孢子進(jìn)行多次誘變處理,根據(jù)菌落顏色深淺及孢子生長(zhǎng)數(shù)量從平板上挑選出了4株比較理想的突變菌株(表3),以供三角瓶復(fù)篩。

    2.7 硫酸二乙酯誘變復(fù)篩

    從表4可以看出,初篩得到的突變菌株U-D-2的β-胡蘿卜素產(chǎn)量最高,達(dá)到1 236 mg/L,比菌株U-4提高了37.0%,比原始菌株提高了94.6%,且該菌株孢子生長(zhǎng)情況比較理想。因此,選擇突變菌株U-D-2為進(jìn)一步的選育菌株。

    2.8 遺傳穩(wěn)定性

    對(duì)突變菌株U-D-2進(jìn)行7次傳代培養(yǎng),并用三角搖瓶分別測(cè)定了每代的β-胡蘿卜素產(chǎn)量,結(jié)果見(jiàn)表5。從表5可以看出,經(jīng)過(guò)7次傳代培養(yǎng),突變菌株U-D-2的β-胡蘿卜素產(chǎn)量變化不大,說(shuō)明其具有較好的遺傳穩(wěn)定性。

    3 小結(jié)與討論

    本試驗(yàn)以三孢布拉氏霉負(fù)菌作為原始菌株,采用了紫外線和硫酸二乙酯兩種誘變因子,經(jīng)過(guò)2次誘變處理,得到的突變菌株U-D-2較原始菌株的β-胡蘿卜素產(chǎn)量提高了94.6%,但較其他報(bào)道的產(chǎn)量[5]或工業(yè)化生產(chǎn)還有一定的差距,這也與原始菌株產(chǎn)量偏低有關(guān)。因此,后面將進(jìn)一步采用更高效的誘變因子,如亞硝基胍、鈷輻射、等離子等進(jìn)行誘變選育,以進(jìn)一步提高其β-胡蘿卜素的產(chǎn)量。

    三孢布拉氏霉屬于一種異宗結(jié)合菌,其β-胡蘿卜素的大量合成依賴于正、負(fù)菌的結(jié)合培養(yǎng)。因此,三孢布拉氏霉正菌在β-胡蘿卜素的大量合成中也具有重要的作用,所以今后將進(jìn)行三孢布拉氏霉正菌的選育,以提高正、負(fù)菌株的結(jié)合能力及β-胡蘿卜素的產(chǎn)量。

    此外,實(shí)踐表明,三孢布拉氏霉菌種保藏方法對(duì)于菌種活性及β-胡蘿卜素的產(chǎn)量具有顯著影響。斜面低溫(4 ℃)保藏,平均1~1.5個(gè)月就會(huì)死亡,多次傳代培養(yǎng)會(huì)引起明顯的退化。筆者改用孢子進(jìn)行沙土管保藏,可以保藏2~3年,無(wú)明顯退化現(xiàn)象。因此,采用有效菌種保藏方式對(duì)于菌種選育也是非常重要的。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 王 雪.β-胡蘿卜素的研究進(jìn)展[J].中國(guó)化工貿(mào)易,2013(5):193.

    [2] 張婷婷,葛 佳,牛天貴,等.三孢布拉氏霉菌發(fā)酵產(chǎn)β-胡蘿卜素發(fā)酵條件的研究[J].食品科技,2009,11(34):2-7.

    [3] 顏?zhàn)魑?,王常高,?俊.三孢布拉氏霉菌產(chǎn)β-胡蘿卜素發(fā)酵條件的優(yōu)化[J].食品與發(fā)酵科技,2013,49(2):25-29.

    [4] 陸茂林,單志萍,孟 妤.多核絲狀真菌的選育及遺傳穩(wěn)定性[J].生物技術(shù),2002,12(2):16-19.

    [5] 顧秋亞.β-胡蘿卜素高產(chǎn)菌株的選育及代謝調(diào)控的初步研究[D].江蘇無(wú)錫:江南大學(xué),2008.endprint

    2.2 紫外線誘變致死曲線

    保持紫外燈功率和照射距離不變,控制不同的時(shí)間照射三孢布拉氏霉負(fù)菌單孢子懸浮液,以照射時(shí)間為橫坐標(biāo),孢子致死率為縱坐標(biāo)繪制致死曲線,結(jié)果見(jiàn)圖2。隨著照射時(shí)間的延長(zhǎng),三孢布拉氏霉負(fù)菌單孢子致死率逐漸升高。一般認(rèn)為致死率在75%左右時(shí)誘變效果較好,但三孢布拉氏霉在任何生長(zhǎng)階段都是多核體,且β-胡蘿卜素高產(chǎn)突變屬于隱形突變,因此必須采用高劑量誘變處理,使孢子形成生理上的單核體,才有可能得到穩(wěn)定的高產(chǎn)突變菌株[4],故后面的誘變處理采用10 min照射。

    2.3 紫外線誘變平板初篩

    經(jīng)過(guò)多次誘變處理,根據(jù)三孢布拉氏霉負(fù)菌菌落顏色深淺及孢子生長(zhǎng)數(shù)量從平板上挑選出了5株比較理想的突變菌株(表1),以供復(fù)篩。

    2.4 紫外線誘變?nèi)瞧繌?fù)篩

    從表2可以看出,初篩得到的突變菌株U-4的β-胡蘿卜素產(chǎn)量最高,為894 mg/L,比原始菌株的產(chǎn)量提高了39.3%,同時(shí)在平板上生長(zhǎng)的孢子也比較豐富,所以選擇突變菌株U-4作為進(jìn)一步誘變的菌株。突變菌株U-5在平板上顏色很深,基本上呈紅色,其β-胡蘿卜素產(chǎn)量與原始菌株相當(dāng),說(shuō)明其菌落顏色可能是一些其他的色素類物質(zhì)。

    2.5 硫酸二乙酯誘變致死曲線

    在10 mL 菌株U-4的孢子懸浮液中加入不同量的DES,以配成不同濃度的DES,充分振蕩使DES分散均勻,30 ℃振蕩處理2 h后,加入5 mL 25%Na2S2O3溶液終止反應(yīng)。以DES的濃度為橫坐標(biāo),孢子致死率為縱坐標(biāo)繪制致死曲線,結(jié)果見(jiàn)圖3。從圖3可以看出,隨著DES濃度的增加,三孢布拉氏霉負(fù)菌孢子致死率逐漸升高。同樣,考慮到三孢布拉氏霉是多核體,后面的誘變選育采用高致死劑量1.6% DES進(jìn)行孢子誘變處理。

    2.6 硫酸二乙酯誘變初篩

    利用DES對(duì)突變菌株U-4的孢子進(jìn)行多次誘變處理,根據(jù)菌落顏色深淺及孢子生長(zhǎng)數(shù)量從平板上挑選出了4株比較理想的突變菌株(表3),以供三角瓶復(fù)篩。

    2.7 硫酸二乙酯誘變復(fù)篩

    從表4可以看出,初篩得到的突變菌株U-D-2的β-胡蘿卜素產(chǎn)量最高,達(dá)到1 236 mg/L,比菌株U-4提高了37.0%,比原始菌株提高了94.6%,且該菌株孢子生長(zhǎng)情況比較理想。因此,選擇突變菌株U-D-2為進(jìn)一步的選育菌株。

    2.8 遺傳穩(wěn)定性

    對(duì)突變菌株U-D-2進(jìn)行7次傳代培養(yǎng),并用三角搖瓶分別測(cè)定了每代的β-胡蘿卜素產(chǎn)量,結(jié)果見(jiàn)表5。從表5可以看出,經(jīng)過(guò)7次傳代培養(yǎng),突變菌株U-D-2的β-胡蘿卜素產(chǎn)量變化不大,說(shuō)明其具有較好的遺傳穩(wěn)定性。

    3 小結(jié)與討論

    本試驗(yàn)以三孢布拉氏霉負(fù)菌作為原始菌株,采用了紫外線和硫酸二乙酯兩種誘變因子,經(jīng)過(guò)2次誘變處理,得到的突變菌株U-D-2較原始菌株的β-胡蘿卜素產(chǎn)量提高了94.6%,但較其他報(bào)道的產(chǎn)量[5]或工業(yè)化生產(chǎn)還有一定的差距,這也與原始菌株產(chǎn)量偏低有關(guān)。因此,后面將進(jìn)一步采用更高效的誘變因子,如亞硝基胍、鈷輻射、等離子等進(jìn)行誘變選育,以進(jìn)一步提高其β-胡蘿卜素的產(chǎn)量。

    三孢布拉氏霉屬于一種異宗結(jié)合菌,其β-胡蘿卜素的大量合成依賴于正、負(fù)菌的結(jié)合培養(yǎng)。因此,三孢布拉氏霉正菌在β-胡蘿卜素的大量合成中也具有重要的作用,所以今后將進(jìn)行三孢布拉氏霉正菌的選育,以提高正、負(fù)菌株的結(jié)合能力及β-胡蘿卜素的產(chǎn)量。

    此外,實(shí)踐表明,三孢布拉氏霉菌種保藏方法對(duì)于菌種活性及β-胡蘿卜素的產(chǎn)量具有顯著影響。斜面低溫(4 ℃)保藏,平均1~1.5個(gè)月就會(huì)死亡,多次傳代培養(yǎng)會(huì)引起明顯的退化。筆者改用孢子進(jìn)行沙土管保藏,可以保藏2~3年,無(wú)明顯退化現(xiàn)象。因此,采用有效菌種保藏方式對(duì)于菌種選育也是非常重要的。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 王 雪.β-胡蘿卜素的研究進(jìn)展[J].中國(guó)化工貿(mào)易,2013(5):193.

    [2] 張婷婷,葛 佳,牛天貴,等.三孢布拉氏霉菌發(fā)酵產(chǎn)β-胡蘿卜素發(fā)酵條件的研究[J].食品科技,2009,11(34):2-7.

    [3] 顏?zhàn)魑?,王常高,?俊.三孢布拉氏霉菌產(chǎn)β-胡蘿卜素發(fā)酵條件的優(yōu)化[J].食品與發(fā)酵科技,2013,49(2):25-29.

    [4] 陸茂林,單志萍,孟 妤.多核絲狀真菌的選育及遺傳穩(wěn)定性[J].生物技術(shù),2002,12(2):16-19.

    [5] 顧秋亞.β-胡蘿卜素高產(chǎn)菌株的選育及代謝調(diào)控的初步研究[D].江蘇無(wú)錫:江南大學(xué),2008.endprint

    2.2 紫外線誘變致死曲線

    保持紫外燈功率和照射距離不變,控制不同的時(shí)間照射三孢布拉氏霉負(fù)菌單孢子懸浮液,以照射時(shí)間為橫坐標(biāo),孢子致死率為縱坐標(biāo)繪制致死曲線,結(jié)果見(jiàn)圖2。隨著照射時(shí)間的延長(zhǎng),三孢布拉氏霉負(fù)菌單孢子致死率逐漸升高。一般認(rèn)為致死率在75%左右時(shí)誘變效果較好,但三孢布拉氏霉在任何生長(zhǎng)階段都是多核體,且β-胡蘿卜素高產(chǎn)突變屬于隱形突變,因此必須采用高劑量誘變處理,使孢子形成生理上的單核體,才有可能得到穩(wěn)定的高產(chǎn)突變菌株[4],故后面的誘變處理采用10 min照射。

    2.3 紫外線誘變平板初篩

    經(jīng)過(guò)多次誘變處理,根據(jù)三孢布拉氏霉負(fù)菌菌落顏色深淺及孢子生長(zhǎng)數(shù)量從平板上挑選出了5株比較理想的突變菌株(表1),以供復(fù)篩。

    2.4 紫外線誘變?nèi)瞧繌?fù)篩

    從表2可以看出,初篩得到的突變菌株U-4的β-胡蘿卜素產(chǎn)量最高,為894 mg/L,比原始菌株的產(chǎn)量提高了39.3%,同時(shí)在平板上生長(zhǎng)的孢子也比較豐富,所以選擇突變菌株U-4作為進(jìn)一步誘變的菌株。突變菌株U-5在平板上顏色很深,基本上呈紅色,其β-胡蘿卜素產(chǎn)量與原始菌株相當(dāng),說(shuō)明其菌落顏色可能是一些其他的色素類物質(zhì)。

    2.5 硫酸二乙酯誘變致死曲線

    在10 mL 菌株U-4的孢子懸浮液中加入不同量的DES,以配成不同濃度的DES,充分振蕩使DES分散均勻,30 ℃振蕩處理2 h后,加入5 mL 25%Na2S2O3溶液終止反應(yīng)。以DES的濃度為橫坐標(biāo),孢子致死率為縱坐標(biāo)繪制致死曲線,結(jié)果見(jiàn)圖3。從圖3可以看出,隨著DES濃度的增加,三孢布拉氏霉負(fù)菌孢子致死率逐漸升高。同樣,考慮到三孢布拉氏霉是多核體,后面的誘變選育采用高致死劑量1.6% DES進(jìn)行孢子誘變處理。

    2.6 硫酸二乙酯誘變初篩

    利用DES對(duì)突變菌株U-4的孢子進(jìn)行多次誘變處理,根據(jù)菌落顏色深淺及孢子生長(zhǎng)數(shù)量從平板上挑選出了4株比較理想的突變菌株(表3),以供三角瓶復(fù)篩。

    2.7 硫酸二乙酯誘變復(fù)篩

    從表4可以看出,初篩得到的突變菌株U-D-2的β-胡蘿卜素產(chǎn)量最高,達(dá)到1 236 mg/L,比菌株U-4提高了37.0%,比原始菌株提高了94.6%,且該菌株孢子生長(zhǎng)情況比較理想。因此,選擇突變菌株U-D-2為進(jìn)一步的選育菌株。

    2.8 遺傳穩(wěn)定性

    對(duì)突變菌株U-D-2進(jìn)行7次傳代培養(yǎng),并用三角搖瓶分別測(cè)定了每代的β-胡蘿卜素產(chǎn)量,結(jié)果見(jiàn)表5。從表5可以看出,經(jīng)過(guò)7次傳代培養(yǎng),突變菌株U-D-2的β-胡蘿卜素產(chǎn)量變化不大,說(shuō)明其具有較好的遺傳穩(wěn)定性。

    3 小結(jié)與討論

    本試驗(yàn)以三孢布拉氏霉負(fù)菌作為原始菌株,采用了紫外線和硫酸二乙酯兩種誘變因子,經(jīng)過(guò)2次誘變處理,得到的突變菌株U-D-2較原始菌株的β-胡蘿卜素產(chǎn)量提高了94.6%,但較其他報(bào)道的產(chǎn)量[5]或工業(yè)化生產(chǎn)還有一定的差距,這也與原始菌株產(chǎn)量偏低有關(guān)。因此,后面將進(jìn)一步采用更高效的誘變因子,如亞硝基胍、鈷輻射、等離子等進(jìn)行誘變選育,以進(jìn)一步提高其β-胡蘿卜素的產(chǎn)量。

    三孢布拉氏霉屬于一種異宗結(jié)合菌,其β-胡蘿卜素的大量合成依賴于正、負(fù)菌的結(jié)合培養(yǎng)。因此,三孢布拉氏霉正菌在β-胡蘿卜素的大量合成中也具有重要的作用,所以今后將進(jìn)行三孢布拉氏霉正菌的選育,以提高正、負(fù)菌株的結(jié)合能力及β-胡蘿卜素的產(chǎn)量。

    此外,實(shí)踐表明,三孢布拉氏霉菌種保藏方法對(duì)于菌種活性及β-胡蘿卜素的產(chǎn)量具有顯著影響。斜面低溫(4 ℃)保藏,平均1~1.5個(gè)月就會(huì)死亡,多次傳代培養(yǎng)會(huì)引起明顯的退化。筆者改用孢子進(jìn)行沙土管保藏,可以保藏2~3年,無(wú)明顯退化現(xiàn)象。因此,采用有效菌種保藏方式對(duì)于菌種選育也是非常重要的。

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