固相萃取——氣相色譜法測定果蔬中有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留

呂建霞+余翀?zhí)?/p>

有機氯農(nóng)藥曾經(jīng)被廣泛使用，其化學性質(zhì)穩(wěn)定，在環(huán)境中難以進行化學和生物降解，殘留期長，有生物蓄積作用，在我國從1980年開始禁用，但其至今仍存在于自然界中，并可通過食物途徑對人類造成危害。作為有機氯農(nóng)藥的替代品之一，擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中得到了廣泛應用，這類農(nóng)藥施用量較小、易生物降解、殘留期較短，但由于其對病菌、害蟲、雜草等具有更強的殺傷作用，因此對哺乳動物的傷害不容忽視。目前世界許多國家都對有機氯及擬除蟲菊酯農(nóng)藥的最高殘留限量作了嚴格的規(guī)定，其中最嚴苛的應該是日本的肯定列表制度，設定了進口食品、農(nóng)產(chǎn)品中可能出現(xiàn)的734種農(nóng)藥、獸藥和飼料添加劑的近5萬個暫定標準，對沒有涉及到的產(chǎn)品，設定了統(tǒng)一標準0.01mg/kg。因此有必要建立一個前處理過程簡單、檢測靈敏度高的方法來測定果蔬中的有機氯農(nóng)藥和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥。

儀器

Trace1310氣相色譜儀，配ECD檢測器（Thermo Scientific）；AS1310自動進樣器（Thermo Scientific）；高速均質(zhì)儀；離心機；天平；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；

耗材

色譜柱：T G - 5 M S（30mx0.25mmx0.25μm）。

試劑與標準品

標 準 品 （α- 六 六 六，β- 六六 六，γ- 六 六 六，δ-六六六，六氯苯，氯硝胺，西瑪津，莠去津，五氯硝基苯，百菌清，敵稗，乙烯菌核利，七氯，艾氏劑，腐霉利，o，p-DDD，o，p-DDT，p，p-DDE，p，p-DDD，p，p-DDT，硫丹，丁草胺，狄氏劑，乙酯殺螨醇，異狄氏劑，三氯殺螨醇，異菌脲，胺菊酯，聯(lián)苯菊酯，甲氰菊酯，高效氯氟氰菊酯，氯菊酯，氟氯氰菊酯，氯氰菊酯，氟氰戊菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯，氟胺氰菊酯）由百靈威公司提供，乙腈、甲苯等有機試劑為Fisher公司提供。其他未注明試劑均為分析純，由國藥集團試劑有限公司提供。

標準溶液的制備

儲備液：準確稱取10.0mg農(nóng)藥標準品，用正己烷稀釋，逐一配制成 100mg/L單一農(nóng)藥標準儲備液，儲存在冰箱中備用。

混合標準中間液：將38種農(nóng)藥逐一吸取1mL的單個農(nóng)藥儲備液分別注入同一容量瓶中，用正己烷稀釋定容至100mL，得到濃度為1mg/L的混合標準中間液。

混合標準工作溶液：取混合標準中間液，用甲苯稀釋配制成20、40、100、200、400μg/L，待GC/ECD分析。

樣品前處理

稱取經(jīng)磨碎的試樣20.00g，加入40mL乙腈均質(zhì)提取1min，加入5.0g氯化鈉，繼續(xù)均質(zhì)1min。然后以10000rpm的速度離心10min，取上清液20mL至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中蒸至近干。待固相萃取凈化。于Cleanert PC/NH2-SPE小柱 （500mg，6mL）上層添加1cm高無水Na2SO4；先用8mL乙腈+甲苯（3+1，體積比）淋洗層析柱，小柱淋洗后下面接上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶接收溶液，再將濃縮后的提取液用6mL乙腈+甲苯（3+1，體積比）分三次洗滌旋蒸瓶，轉(zhuǎn)移至層析柱內(nèi)，然后用25mL乙腈+甲苯（3+1，體積比）混合溶劑洗脫，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮近干后，用甲苯定容至1.0mL待上機分析。

取20μg/L標準溶液，按照上述色譜條件測定，得到色譜圖1。

配制38種農(nóng)藥組份的混合標準溶液，各濃度分別為：20.0，40.0，100.0，200.0， 400.0μg/L，采用上述方法分別進樣分析，考察各組分在20.0～400μg/L濃度范圍內(nèi)的線性。方法回收率和重現(xiàn)性的考察：甘藍和水果黃瓜樣品分別進行加標回收實驗，加標水平為10μg/kg，做3個平行樣品，計算回收率和精密度。以3倍信噪比計算各組分的萬法檢出限。結(jié)果表明，38種農(nóng)藥組分線性關系良好，回收率在71.3%～113.6%之間，精密度（RSD值，n=3）在2.7%～9.9%之間，檢出限在0.1～2.0μg/kg之間，儀器檢測靈敏度高。

實際樣品測試

采用樣品加標，觀察各色譜峰出峰情況（圖2）。對實際樣品測試，也未出現(xiàn)色譜峰干擾情況。標準溶液、樣品、樣品加標譜圖見圖2。

結(jié)論

采用賽默飛世爾新型的氣相色譜儀檢測果蔬中的農(nóng)藥殘留，準確定量目標物，RSD值小，靈敏度高，無雜質(zhì)峰干擾。石墨碳/氨基復合固相萃取小柱能夠去除果蔬中的基質(zhì)干擾，方法簡單，自動化程度高，凈化效果理想。endprint

有機氯農(nóng)藥曾經(jīng)被廣泛使用，其化學性質(zhì)穩(wěn)定，在環(huán)境中難以進行化學和生物降解，殘留期長，有生物蓄積作用，在我國從1980年開始禁用，但其至今仍存在于自然界中，并可通過食物途徑對人類造成危害。作為有機氯農(nóng)藥的替代品之一，擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中得到了廣泛應用，這類農(nóng)藥施用量較小、易生物降解、殘留期較短，但由于其對病菌、害蟲、雜草等具有更強的殺傷作用，因此對哺乳動物的傷害不容忽視。目前世界許多國家都對有機氯及擬除蟲菊酯農(nóng)藥的最高殘留限量作了嚴格的規(guī)定，其中最嚴苛的應該是日本的肯定列表制度，設定了進口食品、農(nóng)產(chǎn)品中可能出現(xiàn)的734種農(nóng)藥、獸藥和飼料添加劑的近5萬個暫定標準，對沒有涉及到的產(chǎn)品，設定了統(tǒng)一標準0.01mg/kg。因此有必要建立一個前處理過程簡單、檢測靈敏度高的方法來測定果蔬中的有機氯農(nóng)藥和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥。

儀器

Trace1310氣相色譜儀，配ECD檢測器（Thermo Scientific）；AS1310自動進樣器（Thermo Scientific）；高速均質(zhì)儀；離心機；天平；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；

耗材

色譜柱：T G - 5 M S（30mx0.25mmx0.25μm）。

試劑與標準品

標 準 品 （α- 六 六 六，β- 六六 六，γ- 六 六 六，δ-六六六，六氯苯，氯硝胺，西瑪津，莠去津，五氯硝基苯，百菌清，敵稗，乙烯菌核利，七氯，艾氏劑，腐霉利，o，p-DDD，o，p-DDT，p，p-DDE，p，p-DDD，p，p-DDT，硫丹，丁草胺，狄氏劑，乙酯殺螨醇，異狄氏劑，三氯殺螨醇，異菌脲，胺菊酯，聯(lián)苯菊酯，甲氰菊酯，高效氯氟氰菊酯，氯菊酯，氟氯氰菊酯，氯氰菊酯，氟氰戊菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯，氟胺氰菊酯）由百靈威公司提供，乙腈、甲苯等有機試劑為Fisher公司提供。其他未注明試劑均為分析純，由國藥集團試劑有限公司提供。

標準溶液的制備

儲備液：準確稱取10.0mg農(nóng)藥標準品，用正己烷稀釋，逐一配制成 100mg/L單一農(nóng)藥標準儲備液，儲存在冰箱中備用。

混合標準中間液：將38種農(nóng)藥逐一吸取1mL的單個農(nóng)藥儲備液分別注入同一容量瓶中，用正己烷稀釋定容至100mL，得到濃度為1mg/L的混合標準中間液。

混合標準工作溶液：取混合標準中間液，用甲苯稀釋配制成20、40、100、200、400μg/L，待GC/ECD分析。

樣品前處理

稱取經(jīng)磨碎的試樣20.00g，加入40mL乙腈均質(zhì)提取1min，加入5.0g氯化鈉，繼續(xù)均質(zhì)1min。然后以10000rpm的速度離心10min，取上清液20mL至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中蒸至近干。待固相萃取凈化。于Cleanert PC/NH2-SPE小柱 （500mg，6mL）上層添加1cm高無水Na2SO4；先用8mL乙腈+甲苯（3+1，體積比）淋洗層析柱，小柱淋洗后下面接上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶接收溶液，再將濃縮后的提取液用6mL乙腈+甲苯（3+1，體積比）分三次洗滌旋蒸瓶，轉(zhuǎn)移至層析柱內(nèi)，然后用25mL乙腈+甲苯（3+1，體積比）混合溶劑洗脫，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮近干后，用甲苯定容至1.0mL待上機分析。

取20μg/L標準溶液，按照上述色譜條件測定，得到色譜圖1。

配制38種農(nóng)藥組份的混合標準溶液，各濃度分別為：20.0，40.0，100.0，200.0， 400.0μg/L，采用上述方法分別進樣分析，考察各組分在20.0～400μg/L濃度范圍內(nèi)的線性。方法回收率和重現(xiàn)性的考察：甘藍和水果黃瓜樣品分別進行加標回收實驗，加標水平為10μg/kg，做3個平行樣品，計算回收率和精密度。以3倍信噪比計算各組分的萬法檢出限。結(jié)果表明，38種農(nóng)藥組分線性關系良好，回收率在71.3%～113.6%之間，精密度（RSD值，n=3）在2.7%～9.9%之間，檢出限在0.1～2.0μg/kg之間，儀器檢測靈敏度高。

實際樣品測試

采用樣品加標，觀察各色譜峰出峰情況（圖2）。對實際樣品測試，也未出現(xiàn)色譜峰干擾情況。標準溶液、樣品、樣品加標譜圖見圖2。

結(jié)論

采用賽默飛世爾新型的氣相色譜儀檢測果蔬中的農(nóng)藥殘留，準確定量目標物，RSD值小，靈敏度高，無雜質(zhì)峰干擾。石墨碳/氨基復合固相萃取小柱能夠去除果蔬中的基質(zhì)干擾，方法簡單，自動化程度高，凈化效果理想。endprint

有機氯農(nóng)藥曾經(jīng)被廣泛使用，其化學性質(zhì)穩(wěn)定，在環(huán)境中難以進行化學和生物降解，殘留期長，有生物蓄積作用，在我國從1980年開始禁用，但其至今仍存在于自然界中，并可通過食物途徑對人類造成危害。作為有機氯農(nóng)藥的替代品之一，擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中得到了廣泛應用，這類農(nóng)藥施用量較小、易生物降解、殘留期較短，但由于其對病菌、害蟲、雜草等具有更強的殺傷作用，因此對哺乳動物的傷害不容忽視。目前世界許多國家都對有機氯及擬除蟲菊酯農(nóng)藥的最高殘留限量作了嚴格的規(guī)定，其中最嚴苛的應該是日本的肯定列表制度，設定了進口食品、農(nóng)產(chǎn)品中可能出現(xiàn)的734種農(nóng)藥、獸藥和飼料添加劑的近5萬個暫定標準，對沒有涉及到的產(chǎn)品，設定了統(tǒng)一標準0.01mg/kg。因此有必要建立一個前處理過程簡單、檢測靈敏度高的方法來測定果蔬中的有機氯農(nóng)藥和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥。

儀器

Trace1310氣相色譜儀，配ECD檢測器（Thermo Scientific）；AS1310自動進樣器（Thermo Scientific）；高速均質(zhì)儀；離心機；天平；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；

耗材

色譜柱：T G - 5 M S（30mx0.25mmx0.25μm）。

試劑與標準品

標 準 品 （α- 六 六 六，β- 六六 六，γ- 六 六 六，δ-六六六，六氯苯，氯硝胺，西瑪津，莠去津，五氯硝基苯，百菌清，敵稗，乙烯菌核利，七氯，艾氏劑，腐霉利，o，p-DDD，o，p-DDT，p，p-DDE，p，p-DDD，p，p-DDT，硫丹，丁草胺，狄氏劑，乙酯殺螨醇，異狄氏劑，三氯殺螨醇，異菌脲，胺菊酯，聯(lián)苯菊酯，甲氰菊酯，高效氯氟氰菊酯，氯菊酯，氟氯氰菊酯，氯氰菊酯，氟氰戊菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯，氟胺氰菊酯）由百靈威公司提供，乙腈、甲苯等有機試劑為Fisher公司提供。其他未注明試劑均為分析純，由國藥集團試劑有限公司提供。

標準溶液的制備

儲備液：準確稱取10.0mg農(nóng)藥標準品，用正己烷稀釋，逐一配制成 100mg/L單一農(nóng)藥標準儲備液，儲存在冰箱中備用。

混合標準中間液：將38種農(nóng)藥逐一吸取1mL的單個農(nóng)藥儲備液分別注入同一容量瓶中，用正己烷稀釋定容至100mL，得到濃度為1mg/L的混合標準中間液。

混合標準工作溶液：取混合標準中間液，用甲苯稀釋配制成20、40、100、200、400μg/L，待GC/ECD分析。

樣品前處理

稱取經(jīng)磨碎的試樣20.00g，加入40mL乙腈均質(zhì)提取1min，加入5.0g氯化鈉，繼續(xù)均質(zhì)1min。然后以10000rpm的速度離心10min，取上清液20mL至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中蒸至近干。待固相萃取凈化。于Cleanert PC/NH2-SPE小柱 （500mg，6mL）上層添加1cm高無水Na2SO4；先用8mL乙腈+甲苯（3+1，體積比）淋洗層析柱，小柱淋洗后下面接上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶接收溶液，再將濃縮后的提取液用6mL乙腈+甲苯（3+1，體積比）分三次洗滌旋蒸瓶，轉(zhuǎn)移至層析柱內(nèi)，然后用25mL乙腈+甲苯（3+1，體積比）混合溶劑洗脫，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮近干后，用甲苯定容至1.0mL待上機分析。

取20μg/L標準溶液，按照上述色譜條件測定，得到色譜圖1。

配制38種農(nóng)藥組份的混合標準溶液，各濃度分別為：20.0，40.0，100.0，200.0， 400.0μg/L，采用上述方法分別進樣分析，考察各組分在20.0～400μg/L濃度范圍內(nèi)的線性。方法回收率和重現(xiàn)性的考察：甘藍和水果黃瓜樣品分別進行加標回收實驗，加標水平為10μg/kg，做3個平行樣品，計算回收率和精密度。以3倍信噪比計算各組分的萬法檢出限。結(jié)果表明，38種農(nóng)藥組分線性關系良好，回收率在71.3%～113.6%之間，精密度（RSD值，n=3）在2.7%～9.9%之間，檢出限在0.1～2.0μg/kg之間，儀器檢測靈敏度高。

實際樣品測試

采用樣品加標，觀察各色譜峰出峰情況（圖2）。對實際樣品測試，也未出現(xiàn)色譜峰干擾情況。標準溶液、樣品、樣品加標譜圖見圖2。

結(jié)論

采用賽默飛世爾新型的氣相色譜儀檢測果蔬中的農(nóng)藥殘留，準確定量目標物，RSD值小，靈敏度高，無雜質(zhì)峰干擾。石墨碳/氨基復合固相萃取小柱能夠去除果蔬中的基質(zhì)干擾，方法簡單，自動化程度高，凈化效果理想。endprint