玉郎傘提取物平喘鎮(zhèn)咳作用的研究

曾 嶸，焦 楊，張士軍，陳兆霓，黃仁彬*

0 引言

玉郎傘是一種尚未開發(fā)利用的民間草藥，為蝶形花科植物疏葉崖豆Millettia pulchra Kurz var.laxior(Dunn)Z.Wei的塊根，用于治療高血壓、跌打損傷、消化不良、病后虛弱等。研究表明，本品具有擴(kuò)張血管、降低血壓、增加冠脈流量、抑制心肌收縮力、抑制腸道平滑肌活動、保肝及抗自由基作用［1-3］。本課題組在前期預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，玉郎傘水提物有較好的平喘作用。本實(shí)驗(yàn)從玉郎傘中分離提取3種有效成份:黃酮、皂苷、多糖，以進(jìn)一步探討玉郎傘的平喘作用，并確定其平喘的活性成份。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 402AL型超聲霧化器(江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司)、磷酸組織胺(上海生化研究所)、氯化乙酰膽堿 (sigma公司)、地塞米松磷酸鈉注射液(天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司)、濃氨水(白銀化學(xué)試劑廠)，復(fù)方甘草片(青海制藥有限公司)、玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖均由本實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 動物 豚鼠150～200 g，小鼠20～25 g，雌雄兼用，由本校動物實(shí)驗(yàn)中心提供。試驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證:SCXK桂2003-0003，試驗(yàn)動物使用許可證:SYXK桂2003-0005。

1.3 方法

1.3.1 豚鼠整體引喘實(shí)驗(yàn) 按噴霧致喘法［4］選用豚鼠，置入20 cm×20 cm×150 cm的有機(jī)玻璃箱內(nèi)，超聲霧化噴入2%乙酰膽堿和0.2%磷酸組胺混合液15 s，進(jìn)行篩選，引喘潛伏期超過120 s者不予選用。次日，豚鼠隨機(jī)分成10組，每組10只，分別為空白組(生理鹽水，10 mL/kg);陽性組(地塞米松，5 mg/kg);玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖(以上4種藥物大劑量均為30 g生藥/kg，小劑量均為15 g生藥/kg)，灌胃給藥1次。用藥后1 h超聲霧化噴入2%乙酰膽堿和0.2%磷酸組胺混合液15 s測定引喘潛伏期(即從噴霧開始到哮喘發(fā)作，呼吸困難，直至抽搐倒地的時間)。

1.3.2 對濃氨水致小鼠咳嗽反應(yīng)的影響［5］取小鼠100只，隨機(jī)分為空白組(生理鹽水，10 mL/kg);陽性組(復(fù)方甘草片組，136 mg/kg);玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖(分設(shè)大劑量、小劑量組，劑量同上)。灌胃給藥，每日1次，連續(xù)2 d，末次給藥1 h后，將小鼠分別置于自制噴霧箱內(nèi)，開動霧化器以18.7 kPa恒壓使氨水呈霧狀噴入箱內(nèi)30 s，取出小鼠，置于清潔大燒杯內(nèi)，觀察記錄咳嗽潛伏期(以小鼠腹肌收縮并張口吐舌作為咳嗽指標(biāo))和3 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。

1.4 統(tǒng)計方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計量資料用±s表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 玉郎傘水提物及各成份對豚鼠引喘潛伏期的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，除多糖低劑量組外，其余各組與空白組比較，豚鼠引喘潛伏期均有明顯延長。說明玉郎傘水提物及從玉郎傘中提取的3種成份-黃酮、皂苷、多糖均能明顯延長豚鼠的引喘潛伏期，并呈劑量依賴關(guān)系。其中YLS黃酮高劑量組的引喘潛伏期最長，平喘效果最好，作用強(qiáng)于地塞米松(5 mg/kg)組。

表1 玉郎傘水提物及各成份對豚鼠引喘潛伏期的影響( ±s，n=10)

表1 玉郎傘水提物及各成份對豚鼠引喘潛伏期的影響( ±s，n=10)

注:其中黃酮、皂苷、多糖高劑量相當(dāng)于30 g生藥/kg，低劑量相當(dāng)于15 g生藥/kg(下同)。與空白組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別 劑量 引喘潛伏期(s)空白組10 mL/kg 73.3±22.1地塞米松組 5 mg/kg 150.1±26.1＊＊水提物高劑量組 30 g生藥/kg 128.7±27.8＊＊水提物低劑量組 15 g生藥/kg 115.8±28.4*黃酮高劑量組 0.14 g/kg 153.3±17.2＊＊黃酮低劑量組 0.07 g/kg 122.2±21.7*皂苷高劑量組 2.7 g/kg 114.2±35.3*皂苷低劑量組 1.35 g/kg 108.1±33.9*多糖高劑量組 25 g/kg 99.3±33.0*多糖低劑量組12.5 g/kg 89.3±25.3

2.2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠咳嗽潛伏期的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示，除多糖低劑量組外，其余各組與空白組比較，小鼠咳嗽潛伏期均有明顯延長且咳嗽次數(shù)減少。說明玉郎傘水提物及從玉郎傘中提取的3種成份-黃酮、皂苷、多糖均能顯著減少氨水致小鼠的咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期，呈劑量依賴關(guān)系。其中YLS黃酮高劑量組的咳嗽潛伏期最長，鎮(zhèn)咳效果最好，作用強(qiáng)于復(fù)方甘草片組。

表2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠咳嗽潛伏期的影響( ±s，n=10)

表2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠咳嗽潛伏期的影響( ±s，n=10)

注:與空白組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別 劑量 咳嗽潛伏期(s)3 min內(nèi)咳嗽次數(shù)(次/3 min)空白組10 mL/kg 47.2±17.1 10.5±3.0復(fù)方甘草片組 136 mg/kg 102.1±35.1＊＊ 4.5±2.0＊＊水提物高劑量組 30 g生藥/kg 98.7±27.8＊＊ 4.9±2.3＊＊水提物低劑量組 15 g生藥/kg 85.8±28.4* 6.8±2.6*黃酮高劑量組 0.14 g/kg 110.3±37.2＊＊ 3.5±1.5＊＊黃酮低劑量組 0.07 g/kg 95.2±31.7* 6.3±2.6*皂苷高劑量組 2.7 g/kg 94.2±35.3* 6.6±2.8*皂苷低劑量組 1.35 g/kg 80.1±33.9* 6.9±2.9*多糖高劑量組 25 g/kg 67.3±33.0* 7.3±2.6*多糖低劑量組12.5 g/kg 55.2±25.3 9.3±3.0

3 討論

支氣管哮喘(哮喘)是由多種細(xì)胞包括氣道的炎癥細(xì)胞和結(jié)構(gòu)細(xì)胞(如嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等)和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病，這種慢性炎癥導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性［6-8］。通常表現(xiàn)廣泛多變的可逆性氣道受限、并引起反復(fù)發(fā)作性喘息、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀。支氣管哮喘病情反復(fù)發(fā)作導(dǎo)致氣道平滑肌收縮、粘液分泌過多、血管滲漏引起黏膜水腫和神經(jīng)活性增加等病理變化，最終引起氣道重塑［9-10］。在上述病情演變過程中，嗜酸性粒細(xì)胞浸潤是其基本特征，EOS的浸潤程度始終與氣道重塑、肺功能的衰退及威脅生命發(fā)作性哮喘的嚴(yán)重程度有關(guān)［11］。目前治療哮喘常用藥物有腎上腺素受體激動藥、茶堿、M膽堿受體阻斷藥、腎上腺皮質(zhì)激素、肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定藥等，在哮喘的藥物治療中，糖皮質(zhì)激素、β2受體激動劑等是主要的治療藥物，但因有劑量相關(guān)的副作用，不宜長期使用［12-14］。中草藥因其多成份、多靶點(diǎn)及重視整體調(diào)理，且副作用相對較小，越來越受到醫(yī)學(xué)專家的重視。

本課題組在前期預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，玉郎傘水提物有較好的平喘作用。為了進(jìn)一步探討玉郎傘提取物的平喘鎮(zhèn)咳作用，為臨床疾病的治療提供指導(dǎo)，筆者采用豚鼠噴霧致喘法、小鼠氨水引咳法，觀察玉郎傘水提物及3種成份對豚鼠引喘潛伏期、小鼠咳嗽潛伏期的影響。在本實(shí)驗(yàn)中，觀察到除了YLS多糖低劑量組外，其余各組藥物均可明顯延長豚鼠的引喘潛伏期、減少氨水致小鼠的咳嗽次數(shù)并延長咳嗽潛伏期，說明YLS水提物以及從YLS中提取的3種活性成份-黃酮、皂苷、多糖有較好的平喘鎮(zhèn)咳作用。本實(shí)驗(yàn)組將在后期進(jìn)一步對YLS水提物、黃酮、皂苷、多糖治療支氣管哮喘的藥效學(xué)及作用機(jī)制做進(jìn)一步研究。

［1］簡潔，劉曦，黃仁彬，等.玉郎傘兩種黃酮單體對心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用［J］.中國藥理學(xué)通報，2009，25(7):942-945.

［2］郭又嘉，文坎，張仕軍，等.玉郎傘皂苷對四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的影響［J］.中國藥理學(xué)通報，2012，28(4):554-558.

［3］蔡文娥，張緒東，黃仁彬，等.玉郎傘多糖對小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用［J］.時珍國醫(yī)國藥，2011，22(7):1681-1683.

［4］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2011:324，639.

［5］徐叔云，卞如廉.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1991:722.

［6］張曉萍，邵潤霞，趙銘琴.支氣管激發(fā)試驗(yàn)診斷支氣管哮喘的漏診率分析［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2013，29(18):3039-3040.

［7］中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組.支氣管哮喘防治指南(支氣管哮喘的定義、診斷、治療管理方案)［J］.中華結(jié)核和呼吸雜志，2008，31(3):177-185

［8］李中燕，王宋平.氣道上皮細(xì)胞在支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制中的研究進(jìn)展［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2012，28(20):3485-3487.

［9］Moore WC，Meyers DA，Wenzel SE，et al.Identification of asthma phenotypes using cluster analysis in the Severe Asthma Research Program［J］.Am J Respir Crit Care Med，2010，181(4):315-323.

［10］趙立宇，徐貴華，陳春鳳.辛芩霧化劑對支氣管哮喘患者肺功能及其生命質(zhì)量的影響［J］.中國醫(yī)藥，2013，8(7):931-933.

［11］Fabbri LM，Romagnoli M，Corbctta L，et al.Differences in airway inflammation in patients with fixed airflow obstruction due to asthma or chronic obstructive pulmonary disease［J］.Am J Respir Crit Care Med，2003，167(3):418-424.

［12］Nelson HS，Carr W，Nathan R，et al.Update on the safety of long-acting beta-agonists in combination with inhaled corticosteroids for the treatment of asthma.Ann Allergy［J］.Asthma Immunol，2009，102(1):11.

［13］丁娟娟，時軍.吸人糖皮質(zhì)激素聯(lián)合茶堿與聯(lián)合長效β2受體激動劑治療哮喘的臨床對照研究［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2012，28(18):3124-3125.

［14］郝璐，崔麗英.阿奇霉素聯(lián)合布地奈德福莫特羅在支氣管哮喘治療中的治療［J］.中國醫(yī)藥，2013，8(9):1231-1233.