蠶沙的薄層鑒別研究

史蕾喆 李 柯 陳 丹 李若存

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208;2.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長沙 410013;3.湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 湘潭 411102

蠶沙為蠶蛾科昆蟲家蠶Bonbyx mori L.的干燥糞便，具有祛風(fēng)除濕、活血定痛的功效，用于風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)不遂、皮膚不仁、腰腿冷痛、風(fēng)疹瘙癢、頭風(fēng)頭痛、烘弦風(fēng)眼[1]?，F(xiàn)代藥理和臨床研究表明蠶沙有抗腫瘤、降血糖、改善和治療貧血作用，并且成功地開發(fā)了金糖尿膠囊、生血寧片。其中1-脫氧野尻霉素 (1-DNJ)和派可林酸為蠶沙降血糖、抗腫瘤、抗病毒的有效成分[2、3]。《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥材 (第一冊)采用TLC鑒別了蠶沙藥材中含有的β-谷甾醇成分，為了更好地控制蠶沙藥材質(zhì)量，我們以1-DNJ和派可林酸為對照品，對蠶沙TLC鑒別條件進(jìn)行了研究，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與儀器

1.1 儀器 薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng) (瑞士CAMAG公司);超聲波清洗器 (武漢恒信世紀(jì)科技有限公司，型號HX-06);硅膠G薄層板 (產(chǎn)自德國Merck默克公司);電熱恒溫干燥箱 (上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)。

1.2 試藥 蠶沙藥材分別購自長沙市岳麓區(qū)高新大藥房、濟(jì)仁堂大藥房、永康堂大藥房、湖南上藥九旺醫(yī)藥有限公司，均由湖南省中醫(yī)藥研究院李若存研究員鑒定為家蠶Bonbyx mori L.的干燥糞便;1-DNJ對照品 (批號:MUST-1305502，純度＞98%)，購自成都曼思特生物科技有限公司;派可林酸對照品 (批號:111751-200601)和蠶沙對照藥材 (批號:121419-200501)均購自中國藥品生物制品檢定研究院;其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 1-DNJ薄層鑒別 取蠶沙藥材約2g，加水20mL，加熱回流20min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?0%乙醇5ml使溶解，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。取1-DNJ對照品適量，加90%乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液10μl、1-DNJ對照品溶液15μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水 (16:4:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，于105℃加熱至斑點(diǎn)明顯后，再置碘蒸氣中熏至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見圖1。

2.2 派可林酸的薄層鑒別 取派可林酸對照品適量，加乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液10μl、派可林酸對照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水 (5:4.5:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，于105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見圖2。

3 討論

3.1 1-DNJ和派可林酸為降血糖的藥效物質(zhì)，同時1-DNJ也是抗腫瘤、艾滋病病毒 (HIV)和丙型肝炎病毒(HCV)的藥效物質(zhì)，故以此2種成分來衡量蠶沙藥材質(zhì)量的優(yōu)劣比β-谷甾醇更加合理。

3.2 顯色劑的選擇[4、5]由于1-DNJ和派可林酸分子中均無不飽和結(jié)構(gòu)，不能采用紫外光燈進(jìn)行檢視，且GF254板也未檢測到特征斑點(diǎn)，最后決定選用日光檢視。1-DNJ為生物堿類成分，常用顯色劑為改良碘化鉍鉀試液、吲哚醌試液;派可林酸為氨基酸類成分，常用顯色劑為茚三酮試液。試驗(yàn)結(jié)果表明，上述顯色劑對1-DNJ不靈敏，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)樣品與1-DNJ對照品用茚三酮試液顯色，加熱至斑點(diǎn)明顯后，再置碘蒸氣中熏，日光下檢視，可增加顯色的靈敏性。因此，采用茚三酮試液和碘蒸氣作為1-DNJ的顯色劑;茚三酮試液對派可林酸顯紫色斑點(diǎn)，靈敏性好、專屬性強(qiáng)，所以選茚三酮試液作為派可林酸的顯色劑。

3.3 展開劑的選擇 1-DNJ分子含有多個羥基，具有較強(qiáng)的極性。因此，考慮采用①乙酸乙酯-甲酸-水 (16:3:1);②乙酸乙酯-無水乙醇 (1:2);③三氯甲烷-甲醇-水 (5:4.5:1);④正丁醇-醋酸-水 (6:1:1)作為展開劑進(jìn)行試驗(yàn)。以乙酸乙酯-甲酸-水 (16:3:1)的展開系統(tǒng)，分離得到的斑點(diǎn)最多。所以確定用乙酸乙酯-甲酸-水為展開系統(tǒng)，分別采用 (16:3:1)、(16:4:1)、(16:5:1)不同比例進(jìn)行比較，經(jīng)過多次試驗(yàn)，確定以 (16:4:1)的分離度及Rf值最為合適。派可林酸分子中含有羧基，極性較強(qiáng)。采用乙酸乙酯-甲酸-水 (16:3:1)和三氯甲烷-甲醇-水 (5:4.5:1)作為展開劑進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三氯甲烷-甲醇-水 (5:4.5:1)的展開系統(tǒng)，分離得到的斑點(diǎn)分離度好，斑點(diǎn)非常清晰。考慮到三氯甲烷的毒性，換用二氯甲烷進(jìn)行試驗(yàn)，但是斑點(diǎn)的分離度不夠好。所以，最后確定以三氯甲烷-甲醇-水(5:4.5:1)為展開劑。

3.4 耐用性試驗(yàn) 選用不同廠家的硅膠G板進(jìn)行了比較，結(jié)果市售4個批次的蠶沙藥材與蠶沙對照藥材試驗(yàn)均與1-DNJ和派可林酸對照品相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，且分離度好。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥材第一冊[M].1992:69.

[2]蘇鳳蓮.高效液相色譜法測定金糖寧膠中派可林酸的含量[J].海峽藥學(xué)，2001，13(3):42.

[3]梁明，王鵬，張會慧，等.1-脫氧野尻霉素的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40(17):9222.

[4]李曉偉，易智彪，曾寶，等.巴豆生物堿薄層色譜鑒別研究[J].北方藥學(xué)，2013，10(2):3.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:3.