振脾湯對潰瘍性結腸炎模型大鼠的形態(tài)學及組織病理學的影響療效觀察

王愛磊 張學明

(河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院肛腸科，河北 唐山 063000)

1 河北省唐山工人醫(yī)院肛腸科，河北 唐山 063000

潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種病因尚不十分清楚的直腸及結腸的慢性非特異性炎癥性疾病，以腹瀉、黏液膿血便及腹痛為主要臨床表現(xiàn)，病情易反復，不易根治，并伴有多種腸外變現(xiàn)及全身表現(xiàn)［1］。本實驗研究以三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇建立的大鼠UC動物模型為研究對象，觀察自擬中藥方劑振脾湯對UC的模型大鼠的形態(tài)學及組織病理學的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 Wistar大鼠48只(由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供)，體質量200～250 g，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。動物合格證號:905013。

1.1.2 藥物 振脾湯(藥物組成:黃芪20 g，黨參20 g，茯苓20 g，炒白術 15 g，桂枝 10 g，炒白芍藥 30 g，炙甘草10 g，煨葛根 30 g，胡黃連 10 g，吳茱萸 5 g，干姜 5 g，敗醬草20 g)由河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院中藥房提供;柳氮磺吡啶片(上海三維制藥有限公司，國藥準字H31020450，批號:060501);

1.1.3 主要儀器與試劑 TNBS(日本東京化成工業(yè)株式會社);SW-CJ-1F超凈工作臺(蘇州凈化設備有限公司);Leica RM2135切片機［德國徠卡(Leica)儀器有限公司］;雙目生物顯微鏡(日本奧林巴斯株式會社);BM-Ⅱ型病理組織包埋機(安徽電子科學研究所);切片漂烘溫控儀(安徽電子科學研究所)。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物模型制備 將48只Wistar大鼠隨機分為4組:正常組、模型組、振脾湯組及柳氮磺胺吡啶片組，每組大鼠12只。全部大鼠禁食(不禁水)24 h后，采用乙醚麻醉，正常組不灌腸，模型組、振脾湯組及柳氮磺胺吡啶片組分別采用直徑2 mm的硅膠管插入距大鼠肛門約8 cm結腸處，用含20 mg TNBS的0.5 mL 30%乙醇灌腸，結束后，使大鼠平躺，保留15 min，自然清醒，自由飲食。正常組大鼠神態(tài)安逸，活動敏捷，被毛光澤，飲食量較大，體態(tài)正常，大便顆粒狀，肛周潔凈;模型組、振脾湯組及柳氮磺胺吡啶片組大鼠在造模第2 d后出現(xiàn)腹瀉，肛周污穢，大便次數(shù)增多，軟便或稀便，大便末端有黏液或膿點等表現(xiàn)，提示造模成功。

1.2.2 給藥方法 全部大鼠于造模成功2周后(14 d)開始灌胃給藥。振脾湯組予振脾湯2 mL(含生藥17 g)灌胃，每日1次;柳氮磺胺吡啶片組予柳氮磺吡啶片溶液2 mL(含藥0.25 g)灌胃，每日1次;正常組及模型組均予等容積的蒸餾水灌胃，每日1次。各組大鼠均自由飲食，連續(xù)灌胃2周。

1.3 觀察方法及指標

1.3.1 一般情況 每日觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、進食、活動、排便及體質量等情況，并做記錄。

1.3.2 各組大鼠均在給藥前及給藥1、2周后，以2%戊巴比妥鈉(3 mL/kg)麻醉后，每組分別處死4只，并留取結腸標本待檢。

1.3.2.1 大體形態(tài)學觀察 將大鼠結腸標本采用福爾馬林溶液固定后腸黏膜層向上平鋪于硬紙板上，用大頭針固定，并保持在0.9%氯化鈉注射液中，觀察黏膜損傷程度，并對大鼠結腸黏膜損傷進行評分［2］。

1.3.2.2 組織病理學觀察 將大鼠結腸標本常規(guī)石蠟包埋、切片、蘇木精-伊紅(HE)染色，做成組織切片，在顯微鏡下觀察標本組織學改變，并按Dieleman等提出的評分標準進行評分［3］。

1.4 統(tǒng)計學分析 用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料用均數(shù)±標準差(±s)表示，采用單因素方差分析，方差齊時用最小顯著差法作兩兩比較，方差不齊時采用Tamhance T2作兩兩比較及χ2檢驗。以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠給藥前后體質量變化比較 見表1。

表1 各組大鼠給藥前后體質量變化比較g，±s

表1 各組大鼠給藥前后體質量變化比較g，±s

與正常組同期比較，*P＜0.05;與模型組同期比較，△ P＜0.05

給藥前(n=4)給藥1周后(n=4)給藥2周后(n=4)245.05 ±8.43 253.05 ±9.03 260.31 ±9.38模型組 229.05 ±6.43* 232.40 ±6.83* 238.33 ±8.45*振脾湯組 228.33 ±5.97 237.76 ±8.29 249.00 ±8.56△柳氮磺胺吡啶片組 227.68 ±7.01 235.42 ±7.41 245.05 ±8.31正常組△

由表1可見，模型組大鼠體質量與正常組同期比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);給藥1周后，振脾湯組及柳氮磺胺吡啶片組大鼠體質量與模型組同期比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);給藥2周后，振脾湯組及柳氮磺胺吡啶片組大鼠體質量與模型組同期比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但2組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.2 各組大鼠結腸黏膜大體形態(tài)學損傷評分比較 見表2。

表2 各組大鼠結腸黏膜大體形態(tài)學損傷評分比較分，±s

表2 各組大鼠結腸黏膜大體形態(tài)學損傷評分比較分，±s

與正常組同期比較，*P＜0.05;與模型組同期比較，△ P＜0.05

給藥前(n=4)給藥1周后(n=4)給藥2周后(n=4)正常組000模型組 8.47 ±1.31* 4.81 ±1.08* 4.01 ±0.67*振脾湯組 8.56 ±0.79 4.28 ±0.57 0.75 ±0.71△柳氮磺胺吡啶片組 8.44 ±1.41 4.47 ±0.96 1.28 ±0.49△

由表2可見，模型組大鼠結腸黏膜大體形態(tài)學損傷評分與正常組同期比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);給藥1周后，振脾湯組及柳氮磺胺吡啶片組大鼠結腸黏膜大體形態(tài)學損傷評分與模型組同期比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);給藥2周后，振脾湯組及柳氮磺胺吡啶片組大鼠結腸黏膜大體形態(tài)學損傷評分與模型組同期比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但2組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P ＞0.05)。

2.3 各組大鼠結腸黏膜組織病理學損傷評分比較 見表3。

表3 各組大鼠結腸黏膜組織病理學損傷評分比較分，±s

表3 各組大鼠結腸黏膜組織病理學損傷評分比較分，±s

與正常組同期比較，*P＜0.05;與模型組同期比較，△ P＜0.05

給藥前(n=4)給藥1周后(n=4)給藥2周后(n=4)正常組000模型組 9.56 ±1.31* 6.28 ±1.11* 4.01 ±0.95*振脾湯組 9.46 ±1.79 5.45 ±0.57 0.55 ±0.34△柳氮磺胺吡啶片組 9.49 ±1.41 5.67 ±0.87 1.09 ±0.56△

由表3可見，模型組大鼠結腸黏膜組織病理學損傷評分與正常組同期比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);振脾湯組及柳氮磺胺吡啶片組給藥前及給藥1周后大鼠結腸黏膜組織病理學損傷評分與模型組同期比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);振脾湯組及柳氮磺胺吡啶片組給藥2周后大鼠結腸黏膜組織病理學損傷評分與模型組同期比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但2組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

3 討論

UC是世界難治性疾病之一，近年來發(fā)病率呈上升趨勢，并且隨著病程延長癌變可的能性也在增加［4］。柳氮磺吡啶在UC治療初期可以取得良好的療效，但是隨著病程以及治療時間的延長，一半以上的患者不得不因副作用停止治療或者尋求新的治療藥物［5］。近年來，大量臨床資料報道中，中藥治療UC具有獨特的優(yōu)勢，開發(fā)針對UC有效的中藥成為臨床的熱點［6］。

中醫(yī)學認為，UC屬泄瀉、痢疾、便血、腸風、臟毒等范疇，主要病變在脾、胃、腸，因感受外邪、飲食所傷、情志失調等導致臟脾虛弱而致?。?］。我們認為，UC發(fā)病過程中脾虛為發(fā)病之本，濕熱為發(fā)病之標，血瘀為局部病理變化，其治療原則應為健脾益氣，清熱燥濕，涼血解毒，祛腐生肌，澀腸止瀉。振脾湯中的黃芪補氣固表，利尿托毒，排膿，斂瘡生肌;黨參潤肺生津，健運中氣;茯苓、白術健脾利濕助運;桂枝、吳茱萸、干姜溫中和脾，助陽止瀉;胡黃連、敗醬草清熱燥濕，涼血解毒;葛根、白芍藥活血化瘀止痛，收斂澀腸;甘草調和諸藥。全方補脾益腎以固本，清熱燥濕以去邪，標本兼治，藥性平和，沒有猛烈之藥，適用于久泄、久痢之人長久服用?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芪是一種免疫調節(jié)劑，可增強機體免疫功能，還具有抗炎、抗菌作用［8］。黨參提取液對正常小鼠的免疫增強作用并不顯著，但對用環(huán)磷酰胺造成免疫抑制狀態(tài)的小鼠，能明顯增強淋巴細胞轉化及抗體形成，提高血清抗體滴度水平，增強免疫力［9］。

本實驗研究中，大鼠經(jīng)TNBS/乙醇處理后出現(xiàn)的大體形態(tài)學和組織病理學表現(xiàn)類似于人類UC，比較適合防治藥物的篩選和研究。給藥1周后，振脾湯組及柳氮磺胺吡啶片組大鼠精神狀態(tài)開始好轉，大便由完全稀便逐漸變?yōu)檐洷悖ひ簻p少，食量漸增，2組大鼠體質量較模型組雖有所增加，但比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);2組大鼠結腸黏膜形態(tài)學表現(xiàn)為充血水腫、糜爛、潰瘍形成，雖較模型組有所減輕，但其損傷評分比較差異無顯著意義(P＞0.05);2組大鼠結腸黏膜組織病理學檢查顯示病變主要位于黏膜層及黏膜下層，以中性粒細胞浸潤為主，亦可見數(shù)量不等的巨噬細胞及嗜酸性粒細胞，另可見增生的纖維母細胞，其病理損傷評分雖較模型組減輕，但比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。給藥2周后，振脾湯組大鼠大便呈顆粒狀，肛周潔凈，食量正常，柳氮磺胺吡啶片組大鼠大便呈軟顆粒狀大便，肛周潔凈，食量較好，2組大鼠體質量均較模型組明顯增加(P＜0.05)，振脾湯組雖較柳氮磺胺吡啶片組體質量增加略多，但比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);2組大鼠結腸黏膜大體形態(tài)學表現(xiàn)逐漸恢復正常，潰瘍已愈合，其損傷評分較模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，均明顯降低;2組大鼠結腸黏膜組織病理學檢查顯示組織形態(tài)逐漸恢復正常，潰瘍已愈合，結締組織增生并纖維化，其病理損傷評分與模型組組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，均明顯降低。

本實驗結果表明，振脾湯方治療UC模型大鼠臨床效果可靠，可以明顯改善大鼠一般情況，增加大鼠體質量，改善微循環(huán)，抑制炎癥反應，修復潰瘍，從而達到治療UC的效果，且安全可靠，無毒副作用，更適用于 UC的維持治療。

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