稻田土壤中鹽酸嗎啉胍液相色譜分析方法及消解動態(tài)研究

周驗旭，郭正元，譚 紅，戴 亮

（湖南農業(yè)大學資源環(huán)境學院，湖南 長沙410128）

鹽酸嗎啉胍作為一種抗病毒藥，主要用于流感病毒及皰疹病毒感染[1-2]。現廣泛應用于農作物上，可有效防治番茄、煙草、水稻等作物的病毒病，而應用于水稻作物，主要防治黑條矮縮病[3]。由于鹽酸嗎啉胍極易溶于水，且水稻田土壤基質中水分含量極高，國內針對鹽酸嗎啉胍在煙草、番茄等土壤的殘留量分析方法并不適用于水稻田土壤。目前我國和食品法典委員會（CAC）、歐盟、美國等國家和組織均沒有規(guī)定農產品中鹽酸嗎啉胍的農藥最高殘留限量（MRL）[4-5]，根據農藥殘留試驗結果推薦鹽酸嗎啉胍在糙米中的MRL 值為3.0 mg/kg[6]，暫擬鹽酸嗎啉胍在土壤中的MRL 值為3.0 mg/kg。

研究結合稻田土壤水含量多以及鹽酸嗎啉胍易溶于水且在水中穩(wěn)定的特性，試圖建立稻田土壤中鹽酸嗎啉胍的高效液相色譜檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

Agilent-1200 型高效液相色譜儀；ZHWY-2102 雙層大容量全溫度恒溫培養(yǎng)振蕩器；RE-2000 旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器有限公司生產）；TP-220A 電子天平；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）。

1.2 試劑

鹽酸嗎啉胍標準品（純度99.8%）、庚烷磺酸鈉、甲醇、乙酸、三乙胺、丙酮、飽和氯化鈉、超純水（以上試劑均為分析純及以上純度）。

1.3 樣品制備

供試農藥為5%鹽酸嗎啉胍水劑，2013年于湖南、貴州和吉林三地在水稻作物種植期噴施，施藥劑量：50 kg/hm2；施藥次數：1 次；采樣距施藥間隔期：2 h、1、2、3、5、7、10、14、21、28、35、45 d；在小區(qū)中用隨機方式選擇10個以上采樣點，用土鉆取10 cm 深土壤，每小區(qū)采集土壤樣本1～2 kg，在不銹鋼盆中去除碎石、雜草和植物根莖等雜物，碾碎后過篩，充分混勻，用四分法分取200 g樣品兩份，按SOPFT-01-05《樣品標簽的使用標準操作規(guī)程》貼好標簽。盡快測定土壤樣品中鹽酸嗎啉胍殘留量。

1.4 樣品提取

準確稱取20 g 水稻田土壤樣品于250 mL 錐形瓶中，加5 mL 蒸餾水、5 mL 飽和氯化鈉溶液和60 mL 丙酮，在35℃恒溫條件下振蕩1 h，經抽濾過濾，濾液轉移至旋轉蒸發(fā)儀濃縮至丙酮完全揮發(fā)，殘余水相移入刻度試管，用蒸餾水分多次淋洗瓶壁，并入刻度試管，定容至15 mL，過0.45 μm 膜，待HPLC 測定。

1.5 色譜分析條件

色譜柱為Lichrospher C18（250 mm×4.6 mm）；流動相：緩沖液-甲醇（55:45，V/V），其中緩沖溶液含0.025 mol/L 庚烷磺酸鈉和0.2%三乙胺，pH 值為3.2；流速：0.7 mL/min；檢測波長：238 nm；進樣量：20 μL。

2 結果與討論

2.1 標準曲線和相關性

用 超 純 水 配 制0.100、0.504、2.016、5.040、10.080 mg/L鹽酸嗎啉胍標準溶液系列，在上述液相色譜條件下，鹽酸嗎啉胍標準溶液濃度在0.10～10.08 mg/L 范圍時，峰面積（y，mAU）與鹽酸嗎啉胍的濃度（x，mg/L）呈良好的線性關系，線性回歸方程為：Y=160.83 X+2.516 4，相關系數R2=0.999 2，如圖1。

圖1 鹽酸嗎啉胍的標準曲線

2.2 提取條件的優(yōu)化

2.2.1 提取劑的選擇 鹽酸嗎啉胍在水或甲醇中都有較大的溶解度且穩(wěn)定，而水作為提取劑不易濃縮，故采用水與有機試劑配比的方法。通過多次試驗，比較了甲醇、甲醇-水（60∶10，體積比，下同）、甲醇-水-飽和氯化鈉（60∶5∶5）、丙酮-水-飽和氯化鈉（60∶5∶5）四組提取劑在常溫下對稻田土壤中鹽酸嗎啉胍的提取效果。經分析檢測，結果見表1。由表1 可見，以丙酮-水-飽和氯化鈉（60∶5∶5）為提取劑，回收率最高，達58.1%；以甲醇為提取劑，回收率最低，僅0.7%。

表1 4種不同提取液提取土壤中鹽酸嗎啉胍保留時間、峰面積及回收率

2.2.2 提取時間的選擇 將土壤樣品加入提取劑后置于恒溫振蕩器中，分別振蕩0.5、1、2 h，對比提取率，經分析檢測，振蕩時間為1 h 提取的回收率最高。結果見表2。

表2 不同振蕩提取時間對鹽酸嗎啉胍提取效率的影響

2.2.3 提取溫度的選擇 在上述條件下分別設置恒溫振蕩器的溫度為25℃、35℃，振蕩1 h，對土壤樣品中鹽酸嗎啉胍進行提取。結果表明，當溫度為25℃時，回收率在60%左右；當溫度為35℃時，回收率在80%以上，回收率能達到農藥殘留分析的定量要求。

2.3 精密度與加標回收試驗

按0.10、0.50、3.00 mg/kg 三個水平對空白稻田土壤樣品進行加標回收率試驗，用上述方法進行前處理和高效液相色譜測定，外標法定量，平行測定5 次，鹽酸嗎啉胍在稻田土壤樣品中的平均加標回收率為84.7%～91.7%，RSD 為4.0%～6.6%，均符合農藥殘留分析的要求，結果見表3。空白土壤和加標樣品色譜峰見圖2、3、4、5。

表3 鹽酸嗎啉胍在稻田土壤中的回收率

圖2 標樣（7.0 mg/kg）

圖3 土壤添加空白

圖4 土壤添加濃度（3.0 mg/kg）

2.4 最小檢出量和最小檢測濃度

在上述分析條件下，鹽酸嗎啉胍的最小檢出量為2.0×10-9g，稻田土壤中鹽酸嗎啉胍的最小檢測濃度為0.075 mg/kg。

2.5 鹽酸嗎啉胍在土壤中的消解動態(tài)

用上述建立的分析方法對2013年布置在湖南長沙市、貴州貴陽市和吉林長春市三地的鹽酸嗎啉胍農藥殘留試驗稻田土壤樣品進行檢測，得出鹽酸嗎啉胍消解動態(tài)方程、相關系數（γ）及半衰期數據見表4。

表4 鹽酸嗎啉胍在稻田土壤中的消解動態(tài)方程、相關系數及半衰期

3 結 論

首次建立了稻田土壤中鹽酸嗎啉胍的高效液相色譜檢測方法。采用丙酮-水-飽和氯化鈉（60∶5∶5，體積比）混合溶液對稻田土壤中鹽酸嗎啉胍進行振蕩提取，不需凈化，雜質干擾少，費用低。鹽酸嗎啉胍在0.10～10.08 mg/L 濃度范圍內質量濃度和響應值的線性相關性為0.999 2，在稻田土壤樣品中的平均加標回收率為84.7%～91.7%，RSD 為4.0%～6.6%。鹽酸嗎啉胍在供試三地的稻田土壤中消解半衰期為8.07～13.62 d。方法的準確度、精密度等各項技術指標均符合農藥殘留檢測的基本要求，可用于稻田土壤中鹽酸嗎啉胍殘留的定量分析。

[1]方東偉，王正權.反相高效液相色譜法測定鹽酸嗎啉胍片的含量[J].中國藥業(yè)，2006，15（5）：41.

[2]錢曉曉，萬宏劍，戴色琴.20%鹽酸嗎啉胍可濕性粉劑的高效液相色譜分析[J].農藥科學與管理，2008，29（2）：13-16.

[3]農藥登記公告[M].北京：中國農業(yè)出版社，1998.611-636.

[4]楊懷鏡，李雪梅，張 玲.鹽酸嗎啉胍片含量測定方法的比較[J].中國藥事，2001，15（2）：123-124.

[5]鄭海香，安鳳穎，胡德禹，等.鹽酸嗎啉胍在煙草中的檢測方法及消解動態(tài)研究[J].農藥科學與管理，2012，33（10）：30-34.

[6]趙 琳，張曉波，任紅波，等.超高效液相色譜-串聯質譜法測定水稻糙米和植株中鹽酸嗎啉胍殘留[J].農藥，2013，52（11）：815-817.