飼料中銅暴露對(duì)吉富羅非魚幼魚血紅細(xì)胞微核和組織中銅蓄積的影響

王文龍，崔 欣，李成成，邢 星，安立龍,，許英梅

1. 廣東海洋大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)系, 湛江 5240882. 欽州保稅港出入境檢驗(yàn)檢疫局, 欽州 535008

飼料中銅暴露對(duì)吉富羅非魚幼魚血紅細(xì)胞微核和組織中銅蓄積的影響

王文龍1，崔 欣1，李成成1，邢 星2，安立龍1,*，許英梅1

1. 廣東海洋大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)系, 湛江 5240882. 欽州保稅港出入境檢驗(yàn)檢疫局, 欽州 535008

為了研究飼料中銅暴露對(duì)吉富羅非魚幼魚的毒性作用，將1 080條羅非魚幼魚暴露于6個(gè)濃度梯度的高銅日糧中，通過(guò)60 d的暴露試驗(yàn)，測(cè)定羅非魚血紅細(xì)胞微核變化和組織中銅的蓄積。結(jié)果表明，銅在各組織中積累量的順序依次為：肝臟>脾臟>腸道>鰓>肌肉，與對(duì)照組相比，其中肝臟、脾臟、腸道中銅的含量隨著時(shí)間和日糧中銅濃度的升高而逐漸升高，而鰓和肌肉中銅含量無(wú)顯著差異；羅非魚幼魚血紅細(xì)胞微核率、核異常率、總核異常率與日糧中銅的濃度存在一定的劑量—效應(yīng)關(guān)系，并且核異常率高于微核率。

銅暴露；蓄積；組織；血紅細(xì)胞；微核率；吉富羅非魚

羅非魚是世界性的主要養(yǎng)殖魚類之一，隸屬于鱸形目、麗魚科、羅非魚屬，是一種淡咸水兩棲性的中小型魚類，具有生長(zhǎng)繁育快，產(chǎn)量高，食性雜，抗性強(qiáng)，肉質(zhì)好等優(yōu)點(diǎn)，深受養(yǎng)殖戶和消費(fèi)者的喜愛。廣東省憑借其優(yōu)越的地理和氣候條件，是我國(guó)養(yǎng)殖羅非魚最早的省份，也是我國(guó)最大和產(chǎn)量最高的羅非魚產(chǎn)地。2009年，廣東羅非魚產(chǎn)量已達(dá)全國(guó)總產(chǎn)量的47%，約為59萬(wàn)t，2010年產(chǎn)量達(dá)到60萬(wàn)t，并呈現(xiàn)逐年增長(zhǎng)的態(tài)勢(shì)[1]，2012年廣東出口的羅非魚高居全國(guó)第一，并在北美占有相當(dāng)高的市場(chǎng)份額[2]。但隨著社會(huì)工業(yè)化進(jìn)程的加快，作為改革開放最前沿的廣東省所承受的重金屬污染也越發(fā)嚴(yán)重，直接威脅羅非魚等經(jīng)濟(jì)水生生物的安全和產(chǎn)品品質(zhì)，影響其養(yǎng)殖和出口。近年來(lái)，重金屬污染對(duì)生物體的毒性作用成為新的研究熱點(diǎn)。

銅(copper)是生物體必須的微量元素之一，也是主要的重金屬之一，過(guò)量的銅會(huì)產(chǎn)生毒性效應(yīng)[3]，對(duì)生物體機(jī)體造成嚴(yán)重?fù)p害，與此同時(shí)，銅在水生生物體內(nèi)的蓄積更是帶來(lái)了不容忽視的食品安全隱患[4]，引發(fā)人們的廣泛關(guān)注。目前關(guān)于飼料中高銅脅迫對(duì)畜禽的毒性作用的報(bào)道比較多，但飼料中銅暴露對(duì)魚類的毒性研究很少，未見飼料中銅暴露對(duì)羅非魚組織蓄積和遺傳毒性的報(bào)道，少數(shù)的相關(guān)研究?jī)H限于對(duì)銅最適添加量的探索，但實(shí)際上魚飼料中銅的添加量往往大于其實(shí)際需要量，在不同條件下的需要量也不盡相同[5]，本文以飼喂銅暴露飼料的吉富羅非魚幼魚為模型，研究飼料中過(guò)量銅對(duì)羅非魚的毒性作用，探究飼料中銅暴露對(duì)吉富羅非魚幼魚血紅細(xì)胞微核以及組織中銅的蓄積的影響。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與材料

試驗(yàn)魚由廣東省吳川國(guó)聯(lián)羅非魚良種場(chǎng)提供，試驗(yàn)前用藥浴消毒，用對(duì)照組飼料馴養(yǎng)15 d，使其適應(yīng)試驗(yàn)環(huán)境及試驗(yàn)飼料，選擇健康無(wú)病、活躍靈敏的個(gè)體作為試驗(yàn)用魚；試驗(yàn)中銅以CuSO4·5H2O(分析純，上海易蒙斯化工科技有限公司)形式添加。

1.2 試驗(yàn)飼料

以魚粉、豆粕、玉米粉、面粉、磷酸二氫鈣、豆油、膽堿、食鹽、預(yù)混料為基礎(chǔ)飼料，所有原料經(jīng)粉碎后過(guò)60目篩后混勻，采用逐級(jí)擴(kuò)大法混合，日糧中設(shè)計(jì)銅的添加梯度為：0 mg·kg-1、3 mg·kg-1、30 mg·kg-1、300 mg·kg-1、1 000 mg·kg-1、3 000 mg·kg-16個(gè)水平，試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧及營(yíng)養(yǎng)組成見表1。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧及營(yíng)養(yǎng)成分(飼喂基礎(chǔ))Table 1 Ingredients and nutrient composition of basal diet(fed-basis)

注：*每千克預(yù)混料含VA 350 000 IU、VD3100 000 IU、VE 4 000 mg、VK3250 mg、VB1400 mg、VB21 500 mg、VB6600 mg、VB122.5 mg、D-泛酸鈣2 000 mg、煙酰胺2 500 mg、葉酸250 mg、D-生物素5 mg、肌醇7 000 mg、VC 6300 mg、鋅2 250 mg、錳1 200 mg、鐵6 500 mg、鈷120 mg、碘120 mg、硒25 mg。

Note： *Each kilogram of premix provided：VA 350 000 IU、VD3100 000 IU、VE 4 000 mg、VK3250 mg、VB1400 mg、VB21 500 mg、VB6600 mg、VB122.5 mg、calcium d-pantothenate 2 000 mg、nicotinamide 2 500 mg、folic acid 250 mg、biotin 5 mg、Inositol 7 000 mg、VC 6300 mg、Zn 2 250 mg、Mn 1 200 mg、Fe 6 500 mg、Co 120 mg、I 120 mg、Se 25 mg.

1.3 試驗(yàn)分組與飼養(yǎng)管理

選取健康無(wú)病的羅非魚1 080尾，將其分為6組(見表2)，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)60尾，飼養(yǎng)在規(guī)格為500 L的玻璃鋼魚缸中?？諝鈮嚎s機(jī)24 h增氧，每3 d換水1/2缸，每天上午9點(diǎn)和下午6點(diǎn)投放兩次相應(yīng)組別的飼料，日投料量為魚體重的3%(每10 d測(cè)一次魚的平均體重，及時(shí)調(diào)整日投料量)，30 min后將剩余餌料吸出，烘干稱重，每天觀察記錄水溫、羅非魚攝食和死亡情況。

1.4 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

試驗(yàn)第20天、40天、60天各分別取樣一次，取樣前饑餓24 h，每次每個(gè)重復(fù)分別取12條羅非魚，其中取4尾進(jìn)行尾靜脈采血，微核試驗(yàn)的測(cè)定參見何理平等[8]的方法；剩余8尾采用搗毀腦髓法將魚處死，取出肌肉、鰓、脾臟、肝臟、空全腸，用0.65%的

表2 試驗(yàn)分組Table 2 Design of groups

生理鹽水漂洗并濾干，取樣品加硝酸和高氯酸濕消解，用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS，美國(guó)安捷倫科技有限公司)測(cè)定樣品中銅的含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 20.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan’s法多重比較差異的顯著性，差異顯著定義為P<0.05，數(shù)據(jù)采用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”來(lái)表示。

2 結(jié) 果(Results)

2.1 飼料銅暴露對(duì)吉富羅非魚血紅細(xì)胞微核的影響

20 d時(shí)，對(duì)照組和第Ⅰ組沒(méi)有微核，而其余各組間無(wú)顯著差異(p>0.05)，微核率最高是第Ⅴ組，為(0.32±0.02)‰。核異常率隨著日糧中銅含量的升高逐漸升高，其中最高為第Ⅴ組(1.09±0.05)‰。總核異常率也隨銅含量的升高逐漸升高，第Ⅳ組和第Ⅴ組的總核異常率分別為(1.13±0.04)‰和(1.41±0.03)‰，顯著高于其它組(p<0.05)，而其它組間無(wú)顯著差異(p>0.05)。

40 d時(shí)，第Ⅳ組和第Ⅴ組的微核率顯著高于對(duì)照組(p<0.05)，前三組與對(duì)照組無(wú)顯著差異(p>0.05)。核異常率隨著銅含量的升高而有不同程度的上升，第Ⅳ組和第Ⅴ組的核異常率顯著高于對(duì)照組(p<0.05)，分別為(1.20±0.02)‰和(1.27±0.05)‰。高劑量組的總核異常率上升的幅度大于低劑量組，第Ⅴ組總核異常率最高(1.66±0.04)‰，與對(duì)照組相比升高1.43‰。

表3 銅對(duì)羅非魚血紅細(xì)胞微核的影響Table 3 Effects of dietary copper on micronucleus in erythrocytes of tilapia

注：同列小寫字母不同表示差異顯著(p<0.05)，同行肩標(biāo)中大寫字母完全不同表示差異顯著(p<0.05)，有相同字母或無(wú)字母表示差異不顯著(p>0.05)，大小寫字母間不比較。下表同。

Note: In the same column, values with different lowercase superscripts mean significant difference(p<0.05). In the same row, values with different uppercase superscripts mean significant difference(p<0.05). While with the same letter or no letter mean no significant difference(p>0.05), and there is no contrast between lowercase and uppercase. The same below.

60 d時(shí)，第Ⅳ組的微核率最高，為(0.57±0.03)‰，第Ⅴ組略低于第Ⅳ組，為(0.48±0.01)‰，兩者間無(wú)顯著差異(p>0.05)，但都顯著高于對(duì)照組。核異常率隨著銅含量的升高有逐漸升高的趨勢(shì)，第Ⅴ組最高(1.34±0.04)‰?？偤水惓Ｂ适堑冖踅M最高，相比對(duì)照組升高1.61‰，比第Ⅳ組高0.07‰，各組間差異顯著(p<0.05)。

隨著日糧中銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，同一組微核率、核異常率和總核異常率均有不同程度的升高。前40 d，第Ⅳ組和第Ⅴ組核異常率升高幅度較大，而前三組的微核率變化不明顯。說(shuō)明隨著日糧銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)和銅含量的升高，羅非魚血細(xì)胞損傷加重。2.2 飼料銅暴露對(duì)吉富羅非魚組織中銅蓄積的影響

2.2.1 飼料銅暴露對(duì)吉富羅非魚腮中銅蓄積的影響

由表4可以看出，在第40天和60天時(shí)，各組間鰓中銅的含量隨著日糧中銅濃度的升高有增加的趨勢(shì)，第60天時(shí)，第Ⅴ組鰓中銅的含量達(dá)到最高，為3.16±0.51 mg·kg-1。隨著銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，銅在鰓中的積累無(wú)顯著變化。其中第Ⅲ組和第Ⅳ組鰓中銅的含量在第40天時(shí)達(dá)到最高，分別為3.10±0.29 mg·kg-1和2.87±0.47 mg·kg-1，對(duì)照組、Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅴ組均在第60天時(shí)達(dá)到最高。說(shuō)明日糧中銅暴露對(duì)羅非魚鰓中的銅的積累無(wú)顯著影響，但隨著添加銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)有升高的趨勢(shì)。 2.2.2 飼料銅暴露對(duì)吉富羅非魚脾臟中銅蓄積的影響

由表5可以看出，在第20天時(shí)，各組脾臟中銅含量無(wú)顯著差異，但第Ⅴ組含量最高12.20±0.24 mg·kg-1。第40天時(shí)，對(duì)照組與第Ⅰ組無(wú)顯著差異，第Ⅱ組脾臟中銅含量為20.16±0.23 mg·kg-1，較對(duì)照組顯著升高(P<0.05)，第Ⅴ組最高，為29.54±0.52 mg·kg-1，Ⅳ組和Ⅴ組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。第60天時(shí)，隨著日糧中銅濃度的升高各組脾臟中銅的積累量也隨之升高，且差異顯著(P<0.05)，第Ⅴ組達(dá)到最高，為45.76±3.13 mg·kg-1。

表4 銅在羅非魚鰓中的積累Table 4 Copper accumulation in gill of tilapia

表5 銅在羅非魚脾臟中的積累Table 5 Copper accumulation in spleen of tilapia

對(duì)照組脾臟中銅的積累隨日糧中銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而有所增加，但不顯著。第Ⅰ組腸道中銅的含量在第20天和第40天時(shí)與開始時(shí)比較仍無(wú)顯著變化，但到第60天時(shí)上升到18.74±0.23 mg·kg-1。Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組和Ⅴ組脾臟中銅的積累量在第40天和60天時(shí)都顯著升高，第Ⅴ組升高的幅度最大，在第60天時(shí)為45.76±3.13 mg·kg-1。說(shuō)明隨著日糧中銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)和日糧中銅濃度的升高，銅在羅非魚脾臟中顯著積累。

2.2.3 飼料銅暴露對(duì)吉富羅非魚肝臟中銅蓄積的影響

如表6所示，隨著飼料中銅的含量的升高各組肝臟中銅的積累量也隨之增加，第Ⅴ組肝臟中銅含量最高，為63.23±3.14 mg·kg-1，與對(duì)照組相比顯著升高(P<0.05)。第40天和60天時(shí)，各組肝臟中銅的含量均隨著飼料中銅的升高而增加，且各組間差異顯著(P<0.05)。

表6 銅在羅非魚肝臟中的積累Table 6 Copper accumulation in liver of tilapia

隨著銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)照組肝臟中銅的含量無(wú)顯著變化，但是其它組肝臟中銅的含量隨之增加，而且差異顯著(p<0.05)，以第Ⅴ組在60天時(shí)含量最高，為102.3±16.54 mg·kg-1。說(shuō)明隨著銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)和日糧中銅濃度的升高，銅在羅非魚肝臟中顯著積累。2.2.4 飼料銅暴露對(duì)吉富羅非魚腸道中銅蓄積的影響

由表7可知，第20天時(shí)，對(duì)照組與第Ⅰ組無(wú)顯著差異，分別為3.17±0.15 mg·kg-1和3.16±0.41 mg·kg-1。之后隨著日糧中銅的升高其它各組腸道中銅的含量逐漸增加。第40天時(shí)，第Ⅴ組腸道中銅的含量最高，為26.42±4.10 mg·kg-1，顯著高于對(duì)照組(p<0.05)。第60天時(shí)，隨著日糧中銅的升高，各組腸道中銅的積累也逐漸上升，第Ⅴ組腸道中銅含量最高，為48.61±6.13 mg·kg-1，較對(duì)照組顯著升高(P<0.05)。

隨著日糧中銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)照組腸道中銅的積累量無(wú)顯著影響(p>0.05)，其它各組腸道中銅的含量均隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，第Ⅴ組腸道中銅含量在第20天時(shí)為11.24±1.82 mg·kg-1，而到第60天時(shí)升高到48.61±6.13 mg·kg-1。說(shuō)明隨著日糧中銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，高劑量的銅可在羅非魚腸道中積累。2.2.5 飼料銅暴露對(duì)吉富羅非魚肌肉中銅蓄積的影響由表8可知，第20天時(shí)，各組間肌肉中銅的積累并無(wú)顯著差異(p>0.05)，第40天時(shí)，第Ⅳ組和第Ⅴ組肌肉中銅的積累分別為2.29±0.02 mg·kg-1和2.42±0.10 mg·kg-1，顯著高于對(duì)照組(p<0.05)。第60天時(shí)，第Ⅴ組達(dá)到最高為3.10±0.13 mg·kg-1。

對(duì)照組、第Ⅰ組、第Ⅱ組肌肉中銅的含量隨著日糧中銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)無(wú)顯著變化，基本上呈現(xiàn)出先升高再降低再升高的趨勢(shì)，而Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組肌肉中銅的積累都隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而有不同程度的增加，說(shuō)明高劑量的銅隨著添加銅暴露時(shí)間的延長(zhǎng)可在羅非魚肌肉中慢慢積累。

表7 銅在羅非魚腸道中的積累 Table 7 Copper accumulation in intestine of tilapia

表8 銅在羅非魚肌肉中的積累Table 8 Copper accumulation in muscle of tilapia

3 討 論(Discussion)

3.1 飼料銅暴露對(duì)吉富羅非魚血紅細(xì)胞微核的影響

微核實(shí)驗(yàn)是用來(lái)檢測(cè)動(dòng)物細(xì)胞受外界有害物質(zhì)損害程度的一種方法，該方法快速、簡(jiǎn)單、有效，由Matter和Schmide在20世紀(jì)70年代初建立的[9]。微核是指在胞漿中獨(dú)立于主核的核小體，它的染色比主核淡，直徑一般在主核的1/4以下。它的形成主要是因?yàn)槭艿酵饨缬泻σ蛩氐挠绊?，在?xì)胞分裂后期時(shí)，無(wú)著絲點(diǎn)的染色體斷裂產(chǎn)生的斷片或者染色體落后而沒(méi)有進(jìn)入子代細(xì)胞的細(xì)胞核里，滯留在間期的子代細(xì)胞漿內(nèi)形成微核[10]。

在本實(shí)驗(yàn)中，各組間隨著日糧中銅含量的增加，微核率、核異常率、總核異常率均有不同程度的升高，對(duì)照組與第Ⅰ組、第Ⅱ組間無(wú)顯著差異，而第Ⅳ組和第Ⅴ組顯著高于對(duì)照組。這說(shuō)明高劑量的銅會(huì)對(duì)羅非魚造成一定的損害。這與王利等的研究結(jié)果一致。而薛良義等[11]報(bào)道，隨著水中銅濃度的升高，黃鱔細(xì)胞微核率開始上升，到12 h以后又下降，說(shuō)明黃鱔在12 h以后對(duì)有害物質(zhì)產(chǎn)生抵抗力，抑制了微核的產(chǎn)生。可能不同種類的魚對(duì)有害物質(zhì)的反應(yīng)存在差異，且與染毒時(shí)間的長(zhǎng)短有關(guān)。

在本研究中，核異常率比微核率高，可能是因?yàn)槲⒑寺实母叩筒粌H與有害物質(zhì)或紡錘體抑制劑的強(qiáng)弱有關(guān)，而且還與細(xì)胞有絲分裂的速度有關(guān)。而且微核率與核異常率出現(xiàn)的最高值也不一致，第Ⅳ組的微核率在第60天時(shí)達(dá)到最高，而核異常率在第40天最高。在第40天和60天時(shí)，微核率都是第Ⅳ組最高，而核異常率是第Ⅴ組最高，這可能是高銅誘發(fā)羅非魚紅細(xì)胞微核和核異常的作用機(jī)理不同，銅抑制羅非魚的紡錘體行成而產(chǎn)生核異常，使微小核物質(zhì)滯留在質(zhì)核外的時(shí)間、程度不一致，同時(shí)也表明細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生微核與核異常的時(shí)間并不完全同步。

3.2 飼料銅暴露對(duì)吉富羅非魚不同組織中銅蓄積的影響

我國(guó)《農(nóng)產(chǎn)品安全質(zhì)量—無(wú)公害水產(chǎn)品安全要求》[12]和《無(wú)公害食品—水產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)限量》[13]中規(guī)定，水產(chǎn)品中銅的含量不能超過(guò)50 mg·kg-1。本試驗(yàn)中，在養(yǎng)殖第20天時(shí)，第Ⅴ組中肝臟的銅含量已經(jīng)達(dá)到63.23 mg·kg-1。到第40天時(shí)，第Ⅳ組中肝臟銅含量為56.52 mg·kg-1，第Ⅴ組肝臟銅含量達(dá)到98.64 mg·kg-1。養(yǎng)殖到60天時(shí)，第Ⅲ、第Ⅳ和第Ⅴ組肝臟中銅的含量分別達(dá)到60.19 mg·kg-1、89.80 mg·kg-1、102.30 mg·kg-1。因此，肝臟中銅的含量都已經(jīng)超過(guò)我國(guó)對(duì)水產(chǎn)品中銅含量的限定。說(shuō)明飼料中銅含量為3 086.76 mg·kg-1時(shí)，對(duì)羅非魚肝臟已經(jīng)造成威脅，應(yīng)禁止添加如此高的銅。日糧中銅含量分別為334.47 mg·kg-1和1 057.29 mg·kg-1時(shí)，分別在第60天和40天時(shí)，肝臟中銅含量也超過(guò)國(guó)家限定，因此也應(yīng)該減少銅的添加量。在其它組織內(nèi)銅的含量均低于國(guó)家限定標(biāo)準(zhǔn)，但在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，第Ⅴ組脾臟和腸道中銅的含量已經(jīng)達(dá)到45.26 mg·kg-1和48.61 mg·kg-1，接近國(guó)家的限定標(biāo)準(zhǔn)。而肌肉中銅的含量最少，且遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于國(guó)家的限定標(biāo)準(zhǔn)，這對(duì)食品安全來(lái)說(shuō)還是很有利的。

李湘萍等[14]研究了銅在養(yǎng)殖對(duì)蝦組織中的積累，發(fā)現(xiàn)銅在肝胰腺中的積累最高，在肌肉中的積累最低。馬桂云等[15]報(bào)道了銅在鯽魚體內(nèi)的積累特征，同樣發(fā)現(xiàn)，銅在各組織內(nèi)的積累量具有很大差異，且內(nèi)臟>鰓>肌肉。Paez等[16]、Pourang等[17]、Morales等[18]和賀亮等[19]也得出了相似的結(jié)論。這與本研究的結(jié)果一致，肝臟中銅的含量最高，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和日糧中銅含量的升高顯著增加，而肌肉中銅的含量最少，且各組間無(wú)顯著差異。這可能是因?yàn)榧∪庵械你~有自我平衡的調(diào)節(jié)能力，銅的沉積可以受到機(jī)體控制。而肝臟是主要的解毒器官，它可以過(guò)濾除去外來(lái)的有毒物質(zhì)。因此，肝臟對(duì)銅具有很強(qiáng)的累積作用，肝臟中銅的含量可以作為評(píng)價(jià)銅狀態(tài)的一個(gè)靈敏指標(biāo)。

脾臟是魚類的造血器官同時(shí)也是重要的免疫器官。在本實(shí)驗(yàn)中，銅在各組織中的蓄積由多到少依次為：肝臟>脾臟>腸道>鰓>肌肉，可見肝臟是動(dòng)物存儲(chǔ)銅的主要器官，積累最多，而銅在脾臟中積累的也比較高。在前期，各組的脾臟中銅的含量無(wú)顯著差異，但在中后期脾臟中銅的含量隨著日糧中銅的含量開始逐漸升高，且第Ⅴ組在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，銅含量達(dá)到45.26 mg·kg-1，已經(jīng)接近我國(guó)水產(chǎn)品中對(duì)銅的限定標(biāo)準(zhǔn)。銅在脾臟中的大量積累可能會(huì)對(duì)羅非魚的免疫功能造成一定影響。蔣蓉[20]在用不同水平銅的飼料投喂黃顙魚后，也發(fā)現(xiàn)銅在肝臟、脾臟、腦和卵巢中的積累較多。Gretehen等[21]用銅含量為5、571、785、1 013 μg·g-1的飼料喂養(yǎng)雜交斑紋鱸14 d，發(fā)現(xiàn)腸和肝臟中銅含量最高達(dá)45 mg·kg-1和120 mg·kg-1左右。

本實(shí)驗(yàn)以吉富羅非魚為研究對(duì)象，分別在飼料中添加0、3、30、300、1 000、3 000 mg·kg-1銅，研究了對(duì)其紅細(xì)胞微核和與組織中銅的蓄積的影響，得出以下主要結(jié)論：1、銅在各組織中積累的順序依次為：肝臟>脾臟>腸道>鰓>肌肉，其中肝臟、脾臟、腸道中銅的含量隨著時(shí)間和日糧中銅的濃度的升高而逐漸升高，而鰓和肌肉中銅含量無(wú)顯著差異；2、羅非魚幼魚血紅細(xì)胞微核率、核異常率、總核異常率與日糧中銅的濃度具有一定的劑量—效應(yīng)關(guān)系，且核異常率高于微核率。

致謝：感謝廣東海洋大學(xué)動(dòng)物科學(xué)系412實(shí)驗(yàn)室全體同仁，以及廣東恒興集團(tuán)湛江恒興水產(chǎn)科技有限公司、廣東吳川國(guó)聯(lián)羅非魚良種場(chǎng)對(duì)本試驗(yàn)的支持和幫助。

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◆

EffectsofDietaryCopperExposureonMicronucleusofErythrocyteandAccumulationinDifferentTissuesofJuvenileGIFTTilapia(Oreochromisniloticus)

Wang Wenlong1, Cui Xin1, Li Chengcheng1, Xing Xing2, An Lilong1,*, Xu Yingmei1

1. Department of Animal Science, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524088, China2. Free Trade Port Aera Entry-Exit Inspection and Quarantine, Qinzhou 535008, China

15 May 2014accepted22 August 2014

In this study, the effects of dietary copper exposure on juvenile GIFT tilapia were investigated. 1 080 juvenile GIFT tilapia were exposed under 6 different concentrations of high-dose copper diets for 60 days. Micronucleus changes of erythrocyte and accumulations of copper in different tissues were observed. The results showed that accumulations of copper in different tissues were liver> spleen> intestine> gill> muscle. Among them, accumulations of copper in liver, spleen and intestine gradually increased with exposure time and copper accumulation in diets. And compared with control group, the difference was significant. However, the accumulations of copper in gill and muscle were not significant. There was a positive dose-effect relationship between micronucleus rate, frequency of nuclear anomalies, total frequency of nuclear anomalies of erythrocyte in juvenile GIFT tilapia and copper dose in diets. Moreover, the frequency of nuclear anomalies was higher than micronucleus rate.

copper exposure; accumulation; tissue; erythrocyte; micronucleus rate; GIFT tilapia

2014-05-15錄用日期：2014-08-22

1673-5897(2014)4-757-08

： X171.5

： A

安立龍(1967-)，男，動(dòng)物遺傳育種學(xué)博士，教授，主要研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)與環(huán)境，發(fā)表相關(guān)學(xué)術(shù)論文80余篇。

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2010B090400376)

王文龍(1989-)，男，碩士，研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)與環(huán)境，E-mail: wangwenlong2012@yeah.net；

*通訊作者(Corresponding author)，E-mail: anlilong@126.com

10. 7524/AJE. 1673-5897. 20140515017

王文龍，崔 欣，李成成, 等. 飼料中銅暴露對(duì)吉富羅非魚幼魚血紅細(xì)胞微核和組織中銅蓄積的影響[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報(bào), 2014, 9(4): 757-764

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