澤瀉提取物制備澤瀉醇A的研究

阮征，徐光，白景，姜永濤

(1.山東綠葉制藥有限公司，山東 煙臺(tái) 264003；2.煙臺(tái)大學(xué)，山東 煙臺(tái) 264005)

澤瀉提取物制備澤瀉醇A的研究

阮征1，徐光1，白景1，姜永濤2*

(1.山東綠葉制藥有限公司，山東 煙臺(tái) 264003；2.煙臺(tái)大學(xué)，山東 煙臺(tái) 264005)

目的：提高澤瀉中澤瀉醇A的提取收率。方法：采用硅膠柱和HPLC制備色譜分離技術(shù)，從澤瀉乙醇提取物中分離得到24-乙酰澤瀉醇A及其異構(gòu)體，通過(guò)堿降解的方法得到澤瀉醇A，根據(jù)色譜和光譜學(xué)數(shù)據(jù)鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從澤瀉乙醇提取物中制備澤瀉醇A的轉(zhuǎn)化收率為0.14%。結(jié)論：與傳統(tǒng)工藝相比，收率提高近70倍，在一定程度上解決澤瀉醇A制備困難的問(wèn)題。

澤瀉；24-乙酰澤瀉醇A；澤瀉醇A

澤瀉為澤瀉科植物澤瀉Alismaorientale(Sam.)Juzep.的干燥塊莖，具有利水滲濕，泄熱，化濁降脂功能。用于小便不利，水腫脹滿，泄瀉尿少，痰飲眩暈，熱淋澀痛，高脂血癥[1]。澤瀉含萜類、揮發(fā)油等多種化學(xué)成分，藥理活性研究表明，澤瀉醇類具有抑制動(dòng)脈粥樣硬化、活血化瘀的功效，以及利尿、降血壓、抗脂肪肝等作用[2-3]。

澤瀉醇A是澤瀉醇類中重要的三萜類活性成分，文獻(xiàn)表明澤瀉醇A具有顯著的降膽固醇作用[4]。但由于在藥材中含量甚少，導(dǎo)致在臨床上不能廣泛應(yīng)用。筆者通過(guò)研究，從澤瀉提取物中分離得到24-乙酰澤瀉醇A，并通過(guò)堿降解的方法得到澤瀉醇A[5]。與從藥材中直接提取的工藝相比，收率提高幾十倍，在一定程度上解決澤瀉醇A制備困難的問(wèn)題。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀；Bruker AVANCE 400型超導(dǎo)核磁共振波譜儀；Mariner TOF-M型質(zhì)譜儀。

1.2 試藥

澤瀉購(gòu)自安徽亳州，經(jīng)煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院生藥室趙燕燕副教授鑒定為澤瀉Alismaorientale(Sam.)Juzep.的干燥塊莖。

200～300目硅膠及GF254薄層色譜板(煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所)。

2 化合物的提取分離和堿解

2.1 化合物的提取分離

取澤瀉塊莖500 g，先用250 mL 75%乙醇水溶液回流提取。回收乙醇，得到紫紅色油狀物，用乙酸乙酯萃取，分為乙酸乙酯層和水層，將乙酸乙酯層蒸干，進(jìn)行硅膠柱色譜，以正己烷-乙酸乙酯(1∶1)洗脫，每100 mL為一個(gè)流分，以正己烷-乙酸乙酯(1∶4)為展開劑，TLC檢測(cè)，合并相同流分，得到兩種無(wú)色結(jié)晶(化合物10.538 g、化合物20.542 g)和一種黃色油狀物。

2.2 化合物的堿解

將化合物1、2混晶溶于40 mL新配制的5%乙醇鈉-乙醇溶液中，室溫放置4 h，真空抽干，丙酮溶解，揮干溶劑，干燥，得到一種無(wú)色粉末(0.695 g)，化合物3[6]。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無(wú)色針晶，通過(guò)ESI-MS測(cè)定其m/z為515[M-H2O+H]+，結(jié)合DEPT譜，提示其分子式為C32H53O6。在1H-NMR譜中，出現(xiàn)3個(gè)連氧碳上的質(zhì)子信號(hào)δ 4.55(s)，3.86(m)，3.82(m)。在δ 2.16處給出一個(gè)乙酰基上特征的甲基質(zhì)子信號(hào)，在高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn)8個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)。在13C-NMR譜中，在低場(chǎng)區(qū)給出2個(gè)羰基碳信號(hào)，其中δ 170.8應(yīng)為乙?；系聂驶夹盘?hào)。在烯碳區(qū)，由DEPT提示，含有一對(duì)雙鍵碳信號(hào)δ 138.2，135.0，且均為季碳。在連氧區(qū)，給出4個(gè)連氧碳信號(hào)δ 69.7，69.0，78.0，73.8，由DEPT譜提示，δ 73.8為一連氧季碳。以上信息提示其具有澤瀉醇類結(jié)構(gòu)特征，其碳譜數(shù)據(jù)與24-乙酰澤瀉醇A基本一致[3]，其相關(guān)結(jié)果見(jiàn)表1。并進(jìn)一步通過(guò)1H-1HCOSY、HMBC譜對(duì)其歸屬，其相關(guān)結(jié)果見(jiàn)圖1～4。

化合物2：根據(jù)化合物2的柱色譜行為及制備純化時(shí)HPLC圖譜特征(圖2)，發(fā)現(xiàn)化合物2會(huì)向化合物1轉(zhuǎn)化。進(jìn)一步通過(guò)HPLC-MS及HPLC-ELSD對(duì)照檢測(cè)，該化合物的分子量與化合物1相同，其ESI-MS m/z：515[M-H2O+H]+，并與化合物1碳譜對(duì)比，初步推測(cè)該化合物可能為23-乙酰澤瀉醇A。

化合物3：無(wú)色粉末；ESI-MS m/z：473[M-H2O+H]+，推測(cè)該化合物為去乙?；a(chǎn)物；1H-NMR(CDCl3)，δH1.00(3H，s)，1.04(3H，s)，1.07，1.14，1.24，1.27(3H，s)，1.66(1H，m，H-22)，1.77(1H，d，J=10.6 Hz，H-9)，2.78(1H，m，H-12)，3.00(1H，brs，H-24)，3.77(1H，dd，J=3.5，9.3 Hz，H-23)，3.88(1H，ddd，J=5.9，10.7，10.7 Hz，H-11)；13C-NMR(CDCl3)：C-1→C-30，δC：31.2，33.7，220.0，46.8，48.7，20.1，34.5，40.7，49.8，37.0，70.0，34.9，137.4，57.0，30.6，29.5，135.5，23.1，25.7，28.5，20.1，40.1，69.4，77.6，74.0，27.5，26.2，29.5，20.3，24.2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[3]，即為澤瀉醇A。

表1 化合物1的核磁共振數(shù)據(jù)

圖1 化合物1的1H-1HCOSY譜

圖2 化合物1的1H-1HCOSY相關(guān)信息

圖3 化合物1的HMBC譜

圖4 化合物1的HMBC相關(guān)信息

圖5 化合物2的HPLC圖

4 討論

資料[6]，澤瀉提取物中澤瀉醇A含量約為0.002%，而通過(guò)本研究工藝，澤瀉醇A的收率約為0.14%，是文獻(xiàn)收率的近70倍。本研究與傳統(tǒng)工藝相比，在一定程度上解決澤瀉醇A制備困難的問(wèn)題。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：212-213.

[2] 徐暉.澤瀉藥理作用研究進(jìn)展[J].湖南中醫(yī)雜志，2004，20(3)：77.

[3] 胡雪艷，陳海霞，高文遠(yuǎn)，等.澤瀉化學(xué)成分的研究[J].中草藥，2008，39(12)：1788-1790.

[4] 徐飛，吳啟南.澤瀉醇類化合物調(diào)脂作用的研究進(jìn)展[G].廣州：全國(guó)第九屆天然藥物資源學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集，2010：707-709.

[5] 邱東鳳.澤瀉化學(xué)成分研究[D].蘭州：蘭州大學(xué)，2009.

[6] 彭國(guó)平，朱國(guó)元，樓鳳昌.澤瀉中二個(gè)三萜新成分的研究Ⅱ[J].天然藥物研究與開發(fā)，2002，14(4)：5.

PreparationofAlisolAfromAlismaorientalisExtract

RUAN Zheng1，XUGuang1，BAIJing1，JIANGYongtao2*

(1.ShandongLuyePharmaceuticalCo.，Ltd.，Yantai264003，China；2.YanTaiUniversity，Yantai264005，China)

Objective：To improve the yield of alisol A fromAlismaorientalis.Methods：Silica and HPLC column chromatography were used to purify the chemical constituents and their structures were elucidated on the basis of spectral data of mass and NMR.Alisol A-24-acetate was isolated from fraction of ethanol extract ofA.orientalisand was used to prepare alisol A by alkali degradation.Results：The conversion yield of preparing alisol A was 0.14%.Conclusion：Compared with the traditional process，the yield of new process can increase 70 times，to a certain extent，which can solve the difficulty of preparing alisol A.

Alismaorientalis；Alisol A-24-acetate；Alisol A

2014-01-28)

*

姜永濤，副教授，研究方向：天然藥物新藥；Tel：(0535)6706025，E-mail：yongtao@luye.cn

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.09.005