肺寧膠囊中氫醌TLC鑒別方法的優(yōu)化

唐姍，劉冬，孫佳明，李欣悅，張輝*

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，吉林 長春 130118)

中藥工業(yè)

肺寧膠囊中氫醌TLC鑒別方法的優(yōu)化

唐姍1，2，劉冬1，孫佳明1，李欣悅1，張輝1*

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，吉林 長春 130118)

目的：對肺寧膠囊中氫醌TLC鑒別方法進(jìn)行優(yōu)化。方法：對3種TLC鑒別方法進(jìn)行對比研究，對比提取方法、展開劑和顯色劑。結(jié)果：以超聲提取法制備供試品溶液，展開劑為三氯甲烷-丙酮(7∶ 3)、10%鐵氰化鉀水溶液和2%三氯化鐵水溶液的混合溶液(1∶ 1)為顯色劑獲得的TLC圖譜清晰。結(jié)論：所建立的方法簡便、可靠，可用于肺寧膠囊中氫醌的質(zhì)量控制。

肺寧膠囊；返魂草；氫醌；TLC鑒別

肺寧膠囊為已上市的臨床常用中成藥，由返魂草提取加工制成。返魂草地上部分主要含有的生物堿為千里光啡啉，千里光堿A、B、C；含有的酚酸類成分為氫醌、綠原酸、熊果苷、對羥基苯乙酸甲酯、鄰羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸等[1-2]。肺寧膠囊具有清熱祛痰，鎮(zhèn)咳平喘的功能，用于肺內(nèi)感染，慢性支氣管炎，喘息性支氣管炎，急性呼吸道感染等。氫醌為肺寧膠囊中主要成分。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定[3]對其特征成分進(jìn)行TLC鑒別檢驗，但執(zhí)行過程中，出現(xiàn)檢不出的現(xiàn)象，筆者通過對該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中氫醌TLC鑒別方法的優(yōu)化，得到了滿意、可靠的結(jié)果。

1 材料

返魂草藥材(吉林省通化博祥藥業(yè)股份有限公司)；肺寧膠囊(合格品、不合格品)(吉林省通化博祥藥業(yè)股份有限公司，批號：131101，121001)，不合格品為吉林省食品藥品藥檢所抽檢檢測不出氫醌的樣品。

氫醌對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100221-200301)；薄層層析用硅膠G預(yù)制板；三氯甲烷、丙酮、石油醚、乙醚、三氯化鐵、鐵氰化鉀等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

取肺寧膠囊內(nèi)容物(合格品、不合格品)2 g，研細(xì)，加丙酮-甲醇(9∶ 1)混合溶液25 mL，超聲處理30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL，使其溶解，作為供試品溶液1。取本品內(nèi)容物(合格品、不合格品)2 g，加100 mL水煮沸1 h，離心，取上清液，加入5%明礬溶液15 mL，攪拌，放置，離心，取上清液用乙醚萃取3次，每次40 mL，合并乙醚液，用5%碳酸氫鈉溶液洗滌3次，每次15 mL，乙醚層再用去離子水洗滌2次，每次15 mL，取乙醚液置水浴鍋上低溫?fù)]干，殘渣加去離子水1 mL使其溶解，用45 μL微孔濾膜過濾作為供試品溶液2[4]。取本品內(nèi)容物(合格品、不合格品)1 g，研細(xì)，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加水20 mL使其溶解，用乙醚提取3次，每次10 mL，合并提取液，揮干，殘渣加乙醇1 mL使其溶解，作為供試品溶液3[5]。

2.2 藥材溶液的制備

取返魂草藥材10 g，加水200 mL，回流提取2 h，加硅藻土5 g，混勻，過濾，濾液蒸干，作為藥材溶液1。另取返魂草，同供試品溶液2制備方法制成藥材溶液2[4]。另取返魂草，同供試品溶液3制備方法制成藥材溶液3[5]。

2.3 對照品溶液的制備

取氫醌對照品適量，加乙醇制成質(zhì)量濃度為0.4 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液1。取氫醌對照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.2 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液2[4]。取氫醌對照品適量，加乙醇制成質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液3[5]。

2.4 薄層層析

方法一：吸取對照品溶液1 2 μL，藥材溶液1 15 μL，供試品溶液1 5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮(7∶ 3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%鐵氰化鉀水溶液和2%三氯化鐵水溶液的混合溶液(1∶ 1)。供試品色譜中，在與對照品及藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的藍(lán)色斑點，見圖1。

方法二：吸取供試品溶液2 10 μL，藥材溶液2 15 μL，對照品溶液2 5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板，以三氯甲烷-丙酮(7∶ 4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵和2%鐵氰化鉀混合溶液(臨用前等體積混合)。供試品色譜中，在與對照品及藥材色譜相應(yīng)的位置顯相同顏色斑點[4]，見圖1。

方法三：照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄IVB)試驗，吸取氫醌對照品溶液3 4 μL，吸取藥材溶液3、供試品溶液3各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙醚(3∶ 5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%鐵氰化鉀水溶液和3%三氯化鐵水溶液的混合溶液(1∶ 1)。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置顯相同的藍(lán)色斑點[5]，見圖1。

1.氫醌對照品 2.返魂草藥材 3.肺寧膠囊(合格品) 4.肺寧膠囊(不合格品)圖1 肺寧膠囊中氫醌的3種方法TLC圖

3 結(jié)論

圖1顯示，方法一中返魂草藥材、肺寧膠囊合格品及不合格品在與對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同藍(lán)色斑點，表明方法一對供試品都能檢測出氫醌。方法二和方法三均參考國家標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)方法，肺寧膠囊不合格品與對照品所顯藍(lán)色斑點未能對應(yīng)，操作方法缺乏肺寧膠囊中氫醌質(zhì)量控制的可行性。因此，方法一可作為肺寧膠囊的TLC鑒別法。

4 討論

4.1 提取方法的選擇

按照方法一、方法二和方法三對肺寧膠囊中的氫醌進(jìn)行TLC鑒別，由圖1可見，方法一中返魂草藥材、肺寧膠囊(合格品)、肺寧膠囊(不合格品)均可檢出含有氫醌；方法二、方法三中肺寧膠囊(不合格品)未能檢出含有氫醌。方法一與方法二、方法三的區(qū)別在于其采用丙酮-甲醇混合溶劑超聲提取方法，避免了水煎后乙醚萃取或醇提后乙醚萃取對氫醌含量的損失。提取液加入硅藻土助其濾過，有效地去除雜質(zhì)的干擾。由此可知，供試品溶液1的制備方法最佳。

4.2 展開劑的選擇

方法一中展開劑比較三氯甲烷-丙酮(1∶ 1)、三氯甲烷-丙酮(7∶ 3)，結(jié)果表明三氯甲烷-丙酮(7∶ 3)薄層層析展開斑點Rf值適中，展開效果較好。見圖2。

1.氫醌對照品 2.返魂草藥材 3.肺寧膠囊(合格品) 4.肺寧膠囊(不合格品)圖2 方法一展開劑與改進(jìn)后展開劑的 肺寧膠囊中氫醌的TLC鑒別

4.3 顯色劑的選擇

方法一顯色劑曾比較了10%鐵氰化鉀水溶液和2%三氯化鐵醇溶液的混合溶液(1∶ 1)、10%鐵氰化鉀水溶液和2%三氯化鐵水溶液的混合溶液(1∶ 1)，結(jié)果表明前者易黏稠變質(zhì)且顯色效果不佳，后者不掩蓋色譜斑點，得到的TLC圖譜斑點清晰、持久。因此，采用10%鐵氰化鉀水溶液-2%三氯化鐵水溶液(1∶ 1)為顯色劑。見圖3。

1.氫醌對照品 2.返魂草藥材 3.肺寧膠囊(合格品) 4.肺寧膠囊(不合格品)圖3 方法一顯色劑與改進(jìn)后顯色劑的 肺寧膠囊中氫醌的TLC鑒別

通過實驗研究，對肺寧膠囊中氫醌TLC鑒別進(jìn)行優(yōu)化，所建立的方法簡便、可靠，可用于肺寧膠囊中氫醌的質(zhì)量控制。

[1] 嚴(yán)仲鎧.中國長白山藥用植物彩色圖志[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：44.

[2] 王吉彥，李麗靜，張連珠.HPLC法測定返魂草及其注射劑中綠原酸[J].中草藥，2005，36(8)1166-1167.

[3] 衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑[S].第四冊.1991：82.

[4] 南敏倫，邢振發(fā)，赫玉芳，等.返魂草的鑒別研究[J].黑龍江醫(yī)藥，2009，22(4)：454-456.

[5] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].YB/Z 1078-2008.2008.

OptimizationofTLCIdentificationMethodsforhydroquinoneofFeiningCapsules

TANG Shan1,2，LIU Dong1，SUN Jiaming1，LI Xinyue1，ZHANG Hui1*

(1.ChangchunUniversityofChineseMedicine，Changchun130117，China； 2.JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118，China)

Objective：To optimize the method of TLC Identification forSenecioCannabifoliushydroquinone of Feining Capsules.Methods：three TLC identification methods were studied by comparing the method of extraction，development and chromogenic.Results：Test sample solution were prepared by ultrasonic extraction method.By usinng the development of chloroform-acetone(7∶ 3)，the chromogenic of 10% potassium ferricyanide and 2% ferric chloride aqueous mixed solution(1∶ 1)，the TLC chromatogram were fairly clear.Conclusion：The established method was simple and reliable.It can be used for the quality control of Feining Capsules.

Feining Capsules；SenecioCannabifolius；Hydroquinone；TLC Identification

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.11.011

2014-03-19)

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張輝，博士研究生導(dǎo)師，教授，研究方向：天然藥物化學(xué)；Tel：(0431)86172080，E-mail：zhanghui_8080@163.com