草魚魚種養(yǎng)殖中的免疫研究進展

李剛

摘要通過對草魚養(yǎng)殖研究典型試驗和報道進行分析，用當(dāng)代免疫理論和試驗成果證明草魚魚種養(yǎng)殖中應(yīng)引起重視的免疫措施和方法，分析了免疫途徑、投餌、密度、拉網(wǎng)鍛煉等措施對免疫力的影響，介紹了提高草魚魚種免疫力的新途徑。

關(guān)鍵詞草魚；魚種養(yǎng)殖；免疫研究；養(yǎng)殖密度；飼料投喂量；措施

中圖分類號S943文獻標識碼A文章編號 1007-5739（2014）11-0280-02

ResearchProgressofImmuneinGrassCarpFishBreeding

LI Gang

（Animal Husbandry and Veterinary Administration of Lixian County in Hunan Province，Lixian Hunan 415500）

AbstractThrough analyzing the grass carp aquaculture research typical test and report，with contemporary immune theory and experimental results it′s proved that the measures and methods in the grass carp fish breeding should be pay attention，effects of the immunization route，bait casting，density，net exercise and other measures on immunity were analyzed，and new ways to increase the grass carp fish immunity were introduced.

Key wordsgrass carp；fish breeding；immune research；breeding density；feed feeding amount；measures

免疫是草魚魚種養(yǎng)殖中控制疾病的基礎(chǔ)。為此科研人員進行了大量的研究，得到了許多研究成果。用現(xiàn)有的免疫研究成果對這些試驗方法、過程和結(jié)果進行再分析，可以節(jié)省人力物力，并得到一些新的認識，可以為探索更好、更有效的魚病防治辦法提供參考。

1草魚魚種的免疫研究進展

1.1免疫方法的研究

何福林對草魚的免疫方法進行了研究，從其得出的草魚出血病、爛鰓病、腸炎病、赤皮病4組免疫結(jié)果來看，注射效果最好，對出血病的保護率為77.%~92.3%，爛鰓病為25.0%~90.0%，腸炎病為16.7%~63.3%，赤皮病為19.3%~57.7%。口服對出血病的保護率為40.8%~63.0%，對其他3種病的保護率均在20.2%以下，對赤皮病幾乎沒有作用。浸泡免疫效果最差，對出血病保護率為18.9%~33.3%，對腸炎完全沒有效果，對爛鰓病和赤皮病的效果也在40%以下。從免疫結(jié)果來看，顯然，注射疫苗能夠有效的激活魚類的免疫系統(tǒng)，因此效果好。而對于草魚魚種養(yǎng)殖來說更關(guān)心的是浸泡免疫和口服免疫的效果[1-3]。

由于消化道酸堿度和多種酶類對疫苗有較大的破壞作用，通過口服免疫的魚體，其頭腎、血液和腸中都檢測出抗體分泌細胞，但鰓中卻沒有檢測出，并且在血清中出現(xiàn)特異性抗體，而在皮膚黏液中卻未出現(xiàn)。這很好地解釋了為什么口服免疫效果不好，并且對赤皮病幾乎沒有作用。

應(yīng)用顆粒劑抗原進行浸泡免疫時，1 d后經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)抗原物質(zhì)大部分仍存在于皮膚與鰓中，僅有少部分抗原物質(zhì)運轉(zhuǎn)到了頭腎和脾臟。腎和脾是魚類重要的免疫器官。真骨魚的腎臟有許多淋巴細胞與白細胞，組織不經(jīng)抗原刺激即可產(chǎn)生免疫細胞，并且頭腎和中腎細胞經(jīng)抗原刺激會出現(xiàn)增生。因此，硬骨魚類的腎臟有中樞免疫器官及外周免疫器官的雙重功能。脾臟是第二重要的免疫器官，其經(jīng)過抗原刺激后發(fā)生的增殖反應(yīng)會產(chǎn)生彌散效果。據(jù)相關(guān)研究，真骨魚的脾臟中被發(fā)現(xiàn)的抗體生成細胞，但這些細胞是否來源于脾臟仍不能確定[4-6]。

免疫效果不好的原因可能是由于抗原不能進入免疫器官，或者由于數(shù)量不夠而無法充分有效激活機體的免疫系統(tǒng)。浸泡免疫一般通過使抗原與皮膚、黏膜和鰓接觸而進入機體，但卻容易受到阻礙。排除這種阻礙的第一個辦法是使用佐劑，改變抗原物質(zhì)的性狀，使抗原能夠有效進入機體，并使其能在機體內(nèi)停留更長的時間；另外可以通過刺激單核吞噬細胞而加強其對抗原的遞呈性；還可以通過刺激淋巴細胞增強魚體的免疫應(yīng)答能力。

1.2免疫研究現(xiàn)狀

黃海水產(chǎn)研究所于2012年3月30日 和9月10日先后報道了“魚用浸泡疫苗多組合佐劑及其應(yīng)用和使用方法”，并獲得了國家的2項專利授權(quán)。這2項發(fā)明都聲稱可顯著提高疫苗的免疫效果，使用方法簡便安全，成本低，無需額外設(shè)施與工序，且對魚的存活率與生長速度無影響。這對于草魚魚種的浸泡免疫來說是一個很好的訊息[7-9]。

雞新城疫弱毒苗的滴鼻滴眼、豬偽狂的基因缺失弱毒苗滴鼻，在免疫方面都取得了很好的效果。弱毒疫苗的優(yōu)點是病原可在免疫動物體內(nèi)繁殖，用量小，免疫原性好，免疫期長，成本低，使用方便，克服了滅活苗接種量大，需多次免疫，抗體產(chǎn)生慢，維持時間短，細胞免疫差，抗原需量大，濃度高，只能通過注射接種等缺點?；蚬こ桃呙缈梢詫⒖乖迦胼d體，修飾的載體能夠表達保護性抗原基因。細菌與病毒載體產(chǎn)生的疫苗兼具安全性和活疫苗效力。以上幾種疫苗都適宜廣泛使用，且經(jīng)濟效益好。

國內(nèi)草魚免疫防疫技術(shù)研究始于20世紀60年代。1969年，珠江水產(chǎn)研究所首次研制出草魚出血病組織漿滅活疫苗（即“土法”疫苗）?！捌呶濉?、“八五”期間，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院組織聯(lián)合科技攻關(guān)研制出我國第1個高效弱毒疫苗——草魚出血病弱毒疫苗，并開展多聯(lián)疫苗的研制，構(gòu)建了與草魚出血病弱毒疫苗聯(lián)用的草魚細菌性爛鰓、赤皮、腸炎四聯(lián)滅活疫苗的大規(guī)模制備技術(shù)。2011年3月，歷經(jīng)多年研制的草魚出血病活疫苗（GCHV-892株）獲得我國首個水產(chǎn)疫苗生產(chǎn)批準文號。該疫苗已在多個省份地區(qū)進行了區(qū)域性試驗，免疫保護率高達90%以上?？梢灶A(yù)見下一個草魚免疫疫苗的突破性發(fā)展將是基因工程苗。草魚魚種的免疫將從基因工程苗和佐劑中受益。

2養(yǎng)殖密度和飼料投喂量對草魚魚種非特異性免疫力的影響

2.1高密度養(yǎng)殖嚴重影響草魚魚種的非特異性免疫

施海濤在《高密度放養(yǎng)導(dǎo)致草魚爛鰓病》中進行試驗，2007年某魚種培育場連片魚種池6 hm2，6月中下旬至7月上旬，水面又放養(yǎng)夏花15萬尾/hm2左右，其中草魚的放養(yǎng)密度達7.5萬~9.0萬尾/hm2。剔除水草的投喂量外，顆粒料的投餌率均在6%以上，少數(shù)塘口的投餌率高達10%?！疤铠喪健钡娘曃狗绞?，加之池塘水位多在0.5～1.2 m，魚池的水體自凈力非常微弱。魚池超負荷的利用，導(dǎo)致草魚夏花小車輪蟲并發(fā)爛鰓病的流行，發(fā)病率近100%。

王文博等利用平均體重（53.05±5.03）g的草魚試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高密度養(yǎng)殖從3個方面顯著影響草魚魚種的非特異性免疫功能。一是高密度對草魚的血清殺菌活性造成了極大抑制，可能也引起了補體活性或濃度的下降，或者是補體中某些組份的失活，從而阻斷了補體的激活途徑使其不能發(fā)揮殺菌作用。二是經(jīng)長時間高密度放養(yǎng)的草魚吞噬細胞吞噬百分率、吞噬指數(shù)2項指標都顯著降低，且隨時間增長呈下降趨勢。三是高密度組草魚脾臟與正常魚相比有明顯的萎縮癥狀。脾臟的臟器系數(shù)（臟器系數(shù)=脾臟重量/體重×100%）平均值為0.005%~0.044%，顯著低于對照組的0.12%。合理密養(yǎng)有利于草魚魚種的非特異性免疫增強[10]。

2.2投餌不當(dāng)使草魚魚種的非特異性免疫力下降

魚體的健康狀況對其免疫能力有一定影響，當(dāng)營養(yǎng)物質(zhì)攝入量不當(dāng)時會使魚的抗病能力下降。蛋白質(zhì)的缺乏和不足導(dǎo)致淋巴細胞數(shù)目的降低，對刺激引起的反應(yīng)降低，NK細胞活性降低；高蛋白則會加大代謝負擔(dān)和能量消耗。魚體組織中多不飽和脂肪酸（PUFA）的含量高，組織易因脂類氧化酸敗而發(fā)生變化，一般情況下魚飼料中的營養(yǎng)物質(zhì)可以保證魚的必需脂肪酸（EFA）的需要，PUFA是細胞膜的重要組成部分，不飽和脂肪酸對于魚體生長發(fā)育至關(guān)重要，同時對于提高魚的免疫能力也是必需脂肪酸。許多魚類異常反應(yīng)和疾病均與飼料中PUFA氧化酸敗有關(guān)，例如鰭損傷和皮膚發(fā)炎等癥狀均與此有關(guān)。VC在魚體生長過程中也很重要，在傷口愈合、機體代謝等方面作用顯著，并且VC可有效降低環(huán)境的負面影響，提高魚類抵抗幾種細菌和病毒病原體的能力。飼喂的日糧中含有VC（>300 mg/kg）可有效降低魚類由于水質(zhì)惡劣而引發(fā)的中毒癥狀，提高魚對環(huán)境應(yīng)激的適應(yīng)能力。VE與VC、類胡蘿卜素和硒都是保證魚體免疫系統(tǒng)正常發(fā)揮作用的必需物質(zhì)，可以降低脂類過氧化物對免疫系統(tǒng)及其他組織的破壞作用，所以為保證魚類的免疫能力，在高濃度PUFA和氧化劑促進劑（鐵、銅等）日糧中必須提高VE的添加量。V■參與體內(nèi)碳水化合物的代謝，草魚飼料中增加V■有明顯促長和節(jié)約飼料的效果。VA參與機體免疫器官的生長發(fā)育，缺乏將造成免疫器官損傷。微量元素在魚類免疫器官的發(fā)育過程中作用較大，缺乏時會引起一系列免疫能力下降問題。

3增強水生動物免疫力的新措施

3.1益生菌增強免疫力

草魚腸道內(nèi)的短乳酸桿菌可以增加腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量，降低水和消化道中弧菌數(shù)量，調(diào)整養(yǎng)殖水體和腸道菌群的構(gòu)成。投喂富含光合細菌的飼料能有效促進草魚的生長發(fā)育，顯著提高生長率，并且能提高草魚肝臟及血清中堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、超氧化物歧化酶（SOD）活性。

3.2免疫多糖等能顯著提高草魚魚種的免疫力

黃芪多糖具有提高動物免疫力、阻止病毒復(fù)制、殺滅細菌、排出毒素等功效。馬貴華等[5]用黃芪多糖等免疫增強劑，對4塊不同水域進行了草魚出血病、爛鰓病和肝膽綜合癥（每塊水域的發(fā)病情不完全一致，除出血病外其他2種并發(fā)1種或3種同時存在）治療初步試驗。結(jié)果2~4 d全部治愈，經(jīng)過6 d給藥鞏固治理，完全防止了復(fù)發(fā)。投喂由黃連、黃柏、黃芪、板藍根、茵陳、甘草等組成的中草藥藥餌，并輔以VC、VE等藥物護肝，對提高魚類的抗應(yīng)激能力和免疫力效果顯著。

3.3水質(zhì)調(diào)節(jié)和拉網(wǎng)鍛煉增強草魚魚種免疫力的有效措施

草魚魚種喜好生活在水質(zhì)較清新的環(huán)境中。在養(yǎng)殖過程中由于剩余餌料、魚類糞便等長久積聚，使得水質(zhì)惡化，容易引發(fā)暴發(fā)性疾病。水體缺氧和有毒物質(zhì)妨礙機體的正常機能，使魚體抵抗力下降。據(jù)此采用充氣、換水、沖水和益生菌改良水質(zhì)等方法增強草魚魚種免疫力。拉網(wǎng)鍛煉可明顯增加魚類粘液分泌，溶菌酶活性顯著升高，加速免疫細胞的分化和生長。李必華的草魚大規(guī)格魚種高產(chǎn)技術(shù)——一養(yǎng)到底法也把定期拉網(wǎng)鍛煉做為增強草魚魚種體質(zhì)的重要方法，而且還推薦當(dāng)年魚種應(yīng)拉網(wǎng)6~7次。

4結(jié)語

草魚魚種養(yǎng)殖中通過適當(dāng)降低密度，控制餌料等一系列措施，可避免大量抗生素的使用，以獲得更加健康的魚種，應(yīng)引起廣大漁民的重視。基因工程活疫苗研究將是魚種免疫的研究方向，也將是草魚魚種養(yǎng)殖中新的養(yǎng)殖技術(shù)方法。

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