Neuritin在胃癌中的表達水平及意義＊

李維嘉，鐘 晨，王錦國，牛少雄，牛建華△，李永康，黃 瑾

（石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院：1.第一附屬醫(yī)院普外三科；2.生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，新疆石河子832000）

Neuritin是以色列科學(xué)家Nedivi等［1］在1993年通過構(gòu)建谷氨酸類似物海人藻酸（kainic acid，KA）激活型大鼠海馬齒狀回cDNA文庫得到的一個基因。之前的研究表明，Neuritin在神經(jīng)突起的生長和成熟中起著重要作用［2－4］。但近年來有研究表明，Neuritin的作用不僅局限于神經(jīng)系統(tǒng)，在神經(jīng)系統(tǒng)以外的某些腫瘤組織中存在高表達，且在一定程度上參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［5－11］。然而，胃癌作為消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，目前國內(nèi)外尚未見Neuritin在胃癌中表達的研究。本研究旨在通過檢測Neuritin在胃癌組織中的表達水平，以探討其與胃癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料 本實驗所采用的標本為58例胃癌患者手術(shù)存檔蠟塊（胃癌組織及同一患者的癌旁正常組織），均來自2010～2013年石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科，均經(jīng)本院病理科行病理診斷證實。所有患者均經(jīng)術(shù)后組織病理學(xué)確診為胃癌，有明確的手術(shù)時間，術(shù)前均未接受化療和放療，其中男40例（68.97%），女18例（31.03%）；標本患者年齡35～80歲，平均60歲；隆起型胃癌4例（6.70%），潰瘍型胃癌45例（77.59%），浸潤型胃癌9例（15.52%）。Neuritin抗體購于Sigma公司（PRS4101），第二抗體購于中杉金橋公司（PV－6001）。

1.2 方法 免疫組織化學(xué)染色，每張切片的厚度為4μm。采用Envision兩步法：切片脫蠟至水，微波加熱（95℃、15min）以修復(fù)抗原，H2O2孵育10min以減少背景染色；4℃一抗孵育過夜（1∶200稀釋）；PBS振洗3次，每次5min；滴加第二抗體，37℃孵育30min；PBS振洗3次，每次5min。DAB顯色后進行蘇木素核復(fù)染、脫水、透明、封片、干燥。每次實驗均以PBS代替第一抗體作為陰性對照。結(jié)果判斷采用AB值法。A：按切片中細胞顯色有無及深淺評分，0分：無著色；1分：淺黃色；2分：棕／深黃色；3分：棕褐色。B：按切片中顯色細胞比例評分，1分：顯色細胞占切片中細胞總數(shù)的10%以下；2分：大于等于10%至小于50%的細胞顯色；3分：大于等于50%至小于75%以上細胞顯色；4分：75%以上細胞顯色。每例樣本積分＝A×B，按積分高低劃分：小于等于4分：陰性；5～8分：陽性；9～12分：強陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對所得數(shù)據(jù)進行分析處理，百分率比較用χ2檢驗。檢驗水準α＝0.05。

2 結(jié) 果

2.1 胃癌石蠟組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 Neuritin表達的陽性部位位于胞漿和胞核，胞漿著色明顯，著色為棕黃色或棕褐黃色；胞核著色較弱，著色為淡黃色或棕黃色。58例胃癌組織中有2例表達為陰性，8例表達為陽性，48例表達為強陽性（圖1、2），陽性率為96.55%，強陽性率為82.76%；58例癌旁正常組織中有3例表達為陰性，46例表達為陽性（圖3、4），9例表達為強陽性，陽性率為94.83%，強陽性率為15.52%。圖5為陰性對照。Neuritin在兩組間表達的陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1，但Neuritin在兩組間表達的強陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

圖1 胃癌組織中Neuritin蛋白陽性表達（×200）

圖2 胃癌組織中Neuritin蛋白強陽性表達（×200）

圖3 癌旁正常組織中Neuritin蛋白陽性表達（×200）

2.2 胃癌中Neuritin的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 Neuritin高表達與患者的性別、年齡、腫瘤的TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、病理學(xué)類型及有無遠處轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性（均P＞0.05），見表3。

圖4 癌旁正常組織中Neuritin蛋白強陽性表達（×200）

圖5 陰性對照（×200）

表1 Neuritin在胃癌及癌旁正常組織中表達水平比較［n（%）］

表2 Neuritin在胃癌及癌旁正常組織中表達的強陽性情況［n（%）］

表3 Neuritin的表達水平與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

續(xù)表3 Neuritin的表達水平與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討 論

Neuritin是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族中的一種小分子物質(zhì)，之前Neuritin的研究一直集中在神經(jīng)系統(tǒng)，近年來的研究顯示在神經(jīng)系統(tǒng)外的其他組織也有 Neuritin的表達［5－11］。黃瑾等［7］發(fā)現(xiàn)Neuritin在人臍靜脈內(nèi)皮細胞、肝細胞等正常人體細胞中存在有表達。Kojima等［5］發(fā)現(xiàn)Neuritin在心、肺、卵巢也有一定的表達。Raggo等［12］將轉(zhuǎn)染了Neuritin的3T3細胞注射到裸鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)相應(yīng)部位可出現(xiàn)腫瘤。巴鵬飛等［9］發(fā)現(xiàn)Neuritin在肺癌組織中存在高表達，可能參與了肺癌的發(fā)生、發(fā)展。曹健等［13］發(fā)現(xiàn)Neuritin在乳腺癌組織中存在高表達，且與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)。黃瑾等［7］發(fā)現(xiàn)Neuritin在膀胱癌細胞及膽管內(nèi)皮癌細胞等細胞株中無表達。而胃癌作為消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，目前國內(nèi)外尚未見Neuritin在胃癌中表達的研究。

本研究發(fā)現(xiàn)，Neuritin在胃癌及癌旁正常組織中均有表達，顯微鏡下大部分胃癌癌旁正常組織切片中Neuritin著色為棕黃色，著色細胞比例大于50%，表明胃癌癌旁正常組織存在Neuritin表達；顯微鏡下大部分胃癌組織切片中Neuritin著色為棕褐色，著色細胞比例大于75%，統(tǒng)計學(xué)分析表明胃癌組織中Neuritin的表達程度明顯高于癌旁正常組織組中Neuritin的表達程度（P＜0.05），表明Neuritin在胃癌組織中存在高表達。鐘晨［14］研究表明，Neuritin的高表達能夠部分抑制Notch信號途徑配體JAG1蛋白的內(nèi)吞，進而抑制Notch信號途徑的激活。還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)Notch1信號通路的激活可以抑制胃癌細胞的增殖［15］。所以，Neuritin的高表達或許在一定程度上通過影響Notch信號途徑的激活促進了胃癌細胞的增殖，進而影響了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。但Neuritin在胃癌組織中的高表達是否能夠通過影響Notch1通路從而影響胃癌的發(fā)生、發(fā)展，這還有待于進一步研究。本研究表明Neuritin的表達與胃癌患者的年齡、腫瘤的分化程度及病理學(xué)類型無相關(guān)性，這與曹健等［13］在乳腺癌中的研究結(jié)果相似。但是，曹健等［13］發(fā)現(xiàn)Neuritin的表達與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)，而本研究發(fā)現(xiàn)Neuritin的表達與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等沒有相關(guān)性，這或許是因為本實驗樣本量有限，有待于擴大樣本量進一步研究。

綜上所述，Neuritin在胃癌組織與癌旁正常組織中的表達水平存在差異，胃癌組織中Neuritin存在高表達，并且Neuritin有可能成為胃癌預(yù)防和治療的一個新靶點。

［1］Nedivi E，Hevroni D，Naot D，et al.Numerous candidate plasticity－related gense revealed by differential cDNA cloning［J］.Nature，1993，363（6431）：718－722.

［2］Putz U，Harwell C，Nedivi E.Soluble CPG15expressed during early development rescues cortical progenitor from apoptosis［J］.Nat Neurosci，2005，8（3）：323－331.

［3］Cantallops I，Haas K，Cline HT.Postsynaptic CPG15promotes synaptic maturation and presynaptic axon arbor elaboration in vivo［J］.Nat Neurosci，2000，3（10）：1004－1011.

［4］Klussmann S，Martin－villalba A.Molecular targets in spinal cord injury［J］.J Mol Med（Berl），2005，83（9）：657－671.

［5］Kojima N，Shiojiri N，Sakai Y，et al.Expression of neuritin during liver maturation and regeneration［J］.FEBS Lett，2005，579（21）：4562－4566.

［6］Seale P，Ishibashi J，Holterman C，et al.Muscle satellite cell－specific genes identified by genetic profiling of MyoD－deficient myogenic cell［J］.Dev Biol，2004，275（2）：287－300.

［7］黃瑾，楊磊，應(yīng)康，等.Neuritin cDNA的克隆及表達［J］.復(fù)旦學(xué)報：自然科學(xué)版，2001，40（5）：521－524.

［8］徐芬，巴鵬飛，張樹軍，等.人部分正常與腫瘤細胞株中neuritin表達的檢測［J］.農(nóng)墾醫(yī)學(xué)，2007，29（3）：161－164.

［9］巴鵬飛，趙瑾，李新麗，等.Neuritin基因在肺癌及正常肺組織中表達的檢測［J］.農(nóng)墾醫(yī)學(xué)，2007，29（4）：254－256.

［10］李樂翔，趙永更，張磊，等.Neuritin基因在膠質(zhì)瘤組織中的表達研究［J］.中華神經(jīng)外科疾病研究雜志，2009，8（5）：409－412.

［11］Zhang L，Zhao YG，Wang CG，et al.Neuritin expression and its relation with proliferation，apoptosis，and angiogenesis in human astrocytoma［J］.Med Oncol，2011，28（3）：907－912.

［12］Raggo C，Ruhl R，McAllister S，et al.Novel cellular genes essential for transformation of endothelial cells by Kaposi′s sarcoma－associated herpesvirus［J］.Cancer Res，2005，65（12）：5084－5095.

［13］曹健，王瑞，侯進，等.乳腺癌組織中神經(jīng)營養(yǎng)因子Neuritin的表達及其臨床意義［J］吉林大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2013，39（4）：799－803.

［14］鐘晨.Neuritin對Neuralized介導(dǎo)的Notch信號途徑配體JAG1泛素化的影響［D］.石河子：石河子大學(xué)，2011.

［15］默娟，李紅.Notch1信號通路對胃癌細胞增殖的影響［J］.山東醫(yī)藥，2012，52（7）：15－17.