清開靈膠囊抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究

安徽省第二人民醫(yī)院藥學(xué)部，安徽 合肥 230061

清開靈膠囊抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究

魏瑜

安徽省第二人民醫(yī)院藥學(xué)部，安徽 合肥 230061

目的分析清開靈膠囊的抑菌作用，為臨床合理用藥提供數(shù)據(jù)參考。方法采用體外與體內(nèi)兩種抑菌試驗(yàn)方法對(duì)清開靈膠囊抑菌的作用進(jìn)行分析。結(jié)果清開靈膠囊內(nèi)容物對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸桿菌44102、金黃色葡萄球菌26003以及分離菌株大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌等均具有一定的體外抑菌作用；口服清開靈膠囊0.5、1.0、2.0g/kg，能對(duì)被金黃色葡萄球菌與肺炎克雷伯氏菌所感染的小鼠具有良好的保護(hù)作用。結(jié)論清開靈膠囊能有效抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌等菌種，具有良好的抑菌效果。

清開靈膠囊；抑菌效果；試驗(yàn)研究

清開靈膠囊具有抗菌、退熱、消炎、退黃、鎮(zhèn)靜及提高機(jī)體免疫力等作用，常用于外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱、咽喉腫痛、病毒性感冒及上呼吸道感染等病癥[1]。清開靈膠囊的主要成分包括膽酸、豬去氧膽酸、板藍(lán)根、珍珠母、黃芩苷等[2-3]。為了進(jìn)一步探討清開靈膠囊的抑菌作用，本試驗(yàn)根據(jù)清開靈膠囊的功能主治進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料和儀器

1.1 藥物 清開靈膠囊(廣州白云山明興制藥有限公司提供，國藥準(zhǔn)字Z10950087，規(guī)格：2.5g/粒，用法：3次/d、2～4粒/次)，實(shí)驗(yàn)樣品配制方法為：稱取一定的清開靈膠囊內(nèi)容物，置入乳缽內(nèi)，并添加少量蒸餾水進(jìn)行磨細(xì)，一邊加水，一邊研磨，配制成實(shí)驗(yàn)所需的各種濃度。

1.2 菌種

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株 標(biāo)準(zhǔn)菌株為大腸桿菌44102、金黃色葡萄球菌26003，均由黑龍江省藥品檢驗(yàn)所提供，并由中國藥品生物制品檢定所鑒定。

1.2.2 臨床分離菌株 臨床分離菌株主要包括大腸桿菌、肺炎克雷伯氏桿菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌及乙型溶血性鏈球菌，均由廣東南方醫(yī)科大學(xué)微生物教研室提供。

1.3 試劑 傷寒、副傷寒甲、乙三聯(lián)菌苗(批號(hào)：040102-1-3，長春生物制品研究所)；胃膜素(國藥準(zhǔn)字H13023865，唐山葵花藥業(yè)集團(tuán)生物制藥有限公司)；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(批號(hào)040214，黑龍江省藥品檢驗(yàn)所)。

1.4 儀器 千分之一電子天平，由上海奕宇電子科技有限公司提供。

1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小白鼠，由黑龍江省藥品檢驗(yàn)所動(dòng)物室提供，合格證號(hào)為SYXK(黑)20130014。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本次實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 方法和結(jié)果

2.1 體外抑菌效果 取30g營養(yǎng)肉湯置于1500ml的蒸餾水進(jìn)行溶解，每個(gè)試管中分別裝入10ml，放在高壓滅菌鍋中滅菌20min，即配置成液體營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放在4℃的冰箱保存；取5g清開靈膠囊內(nèi)容物加入到10ml生理鹽水中，將藥物的pH值調(diào)至7.4，放在高壓滅菌鍋中20min備用；采用接種環(huán)沾取菌種，并轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中，并在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)18h，采用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌濁度計(jì)對(duì)細(xì)菌密度進(jìn)行定量測(cè)定。在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，必須要用生理鹽水進(jìn)行各個(gè)菌種10-3稀釋，以作備用；取144支試管分成16組，各9支，分別添加1ml無菌培養(yǎng)基，在無菌狀態(tài)下吸收1ml的待測(cè)藥液，置于第1管中混勻，并吸出1ml加到第2管，如此類推，一直稀釋到第8 管，于第8管中吸取1ml去除，第9管無添加無菌培養(yǎng)基作對(duì)照管。除了第8管，向其余管加入0.1ml、10-3的待測(cè)菌液并混勻，并在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)18h。以濁度作為指標(biāo)，以不顯示混濁的最高藥物稀釋度與無細(xì)菌生長的試管藥液稀釋度作為最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果如表1、2所示。

表1 清開靈膠囊的抑菌效果

注：“+”為有細(xì)菌生長，“-”為無細(xì)菌生長。

表2 清開靈膠囊的抑菌效果

2.2 內(nèi)抑菌效果分析 制備5%胃膜素，先取10g胃膜素放在乳缽，加入生理鹽水研磨，研細(xì)后加入200ml生理鹽水，放在高壓滅菌鍋20min；于實(shí)驗(yàn)前1d，采用接種環(huán)沾取菌種，并轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中，并在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)18h，采用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌濁度計(jì)對(duì)細(xì)菌密度進(jìn)行定量測(cè)定。在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，必須要用生理鹽水進(jìn)行各個(gè)菌種10-3稀釋，以作備用；實(shí)驗(yàn)當(dāng)天采用5% 胃膜素將金黃色葡萄球菌進(jìn)行10-2稀釋，并將肺炎克雷伯氏桿菌10-3稀釋；最后是實(shí)驗(yàn)∶取小鼠160只，雌雄80只，分成8組，各20只。前4組注入10-2稀釋金黃色葡萄球菌，后4組注入10-3稀釋肺炎克雷伯氏桿菌，并采用5%胃膜素進(jìn)行菌液稀釋，并向各白鼠注射0.5ml。4組包括空白對(duì)照組、2.0g/kg組、1.0g/kg組、0.5g/kg組，給小鼠灌胃給藥，劑量為20ml/kg。在小鼠腹腔感染前2d給藥，連續(xù)5d。結(jié)果如表3、4所示。

表3 清開靈對(duì)兩種菌種小鼠死亡率的影響

注：比較對(duì)照組，*P<0.05

表4 清開靈對(duì)兩種菌種小鼠生存時(shí)間的影響

注：比較對(duì)照組，*P<0.05。

3 討論

從本研究的表1、表2結(jié)果中可以看出，一定濃度清開靈膠囊對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸桿菌44102、金黃色葡萄球菌26003以及分離菌株大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌等均具有一定的體外抑菌作用；而口服清開靈膠囊0.5、1.0、2.0g/kg，能對(duì)被金黃色葡萄球菌與肺炎克雷伯氏菌所感染的小鼠具有顯著的抗感染效果，能有效提高小白鼠的存活率與延長其生存時(shí)間。通過綜合4個(gè)表格中的結(jié)果可以得出：清開靈膠囊具有非常顯著的抑菌效果。

[1] 王璐，戴敬，牛小蓮．清開靈軟膠囊中膽酸和豬去氧膽酸的含量測(cè)定[J]．中國藥業(yè)，2013，2(12)：79-80．

[2] 筆雪艷，劉曉鳳，胡畔，等．清開靈片中膽酸及梔子苷含量的高效液相色譜測(cè)定[J]．時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23(3)：663-665．

[3] 楊立偉，劉瀟瀟，鞏珺，等．清開靈系列品種中膽酸和豬去氧膽酸的通用檢測(cè)定方法研究[J]．中國藥房，2012，41(35)：3340-3342．

R285.5

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1007-8517(2014)24-0008-02

2014.09.17)