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      支原體肺炎患兒D-二聚體、免疫功能變化及其意義

      2014-09-18 07:20:50郝麗鄭成中
      中國(guó)生化藥物雜志 2014年3期
      關(guān)鍵詞:亞群二聚體支原體

      郝麗,鄭成中

      (1.安徽醫(yī)科大學(xué)解放軍306醫(yī)院臨床學(xué)院 兒科,北京 100101;2.解放軍306醫(yī)院 兒科,北京 100101)

      支原體肺炎患兒D-二聚體、免疫功能變化及其意義

      郝麗1,鄭成中2Δ

      (1.安徽醫(yī)科大學(xué)解放軍306醫(yī)院臨床學(xué)院 兒科,北京 100101;2.解放軍306醫(yī)院 兒科,北京 100101)

      目的探討肺炎支原體肺炎(mycoplasma pneumonia,MPP)患兒T淋巴細(xì)胞亞群、D-二聚體和免疫球蛋白的變化及其臨床意義。方法應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)技術(shù)測(cè)定肺炎支原體肺炎患兒(MPP組,n=50)和健康兒童(正常對(duì)照組,n=50)CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的水平;免疫比濁法檢測(cè)2組中D-二聚體水平;免疫透射比濁法檢測(cè)2組的血清免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)水平。結(jié)果T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果:與正常對(duì)照組比較,MPP組外周血CD3+和CD4+細(xì)胞降低差異顯著(P<0.001)、CD8+細(xì)胞升高無(wú)顯著差異、CD4+/CD8+比值降低無(wú)顯著差異。D-二聚體水平檢測(cè)結(jié)果:與正常對(duì)照組比較,MPP組D-二聚體水平升高差異顯著(P<0.001)。免疫球蛋白檢測(cè)結(jié)果:MPP組血清IgA、IgM較正常對(duì)照組相比,差異顯著(P<0.05),MPP組血清IgG與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論肺炎支原體肺炎患兒體內(nèi)免疫功能紊亂,受到不同程度抑制,凝血功能異常,故支原體肺炎患兒除了常規(guī)抗肺炎支原體治療外,需根據(jù)不同的臨床癥狀和疾病發(fā)展情況,監(jiān)測(cè)D-二聚體水平的表達(dá),并加強(qiáng)對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)和治療。

      支原體肺炎;T淋巴細(xì)胞亞群;D2聚體;免疫球蛋白

      1 材料與方法

      1.1 材料

      1.1.1 研究對(duì)象 收集解放軍306醫(yī)院2013年9月~2014年1月住院的MPP患兒50例,年齡為6個(gè)月~14歲,平均年齡(7.25±3.43)歲,其中男30例,女20例,所有患兒均符合諸福棠《實(shí)用兒科學(xué)》肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]:①發(fā)熱,多表現(xiàn)為弛張熱或不規(guī)則熱,可伴咳嗽、氣促等癥狀;②肺部聽(tīng)診可聞及雙肺呼吸音粗,或可聞及干、濕啰音,或胸部X線片顯示肺部有實(shí)變體征;③胸片可表現(xiàn)為大葉性肺炎、小葉性肺炎、肺間質(zhì)X線征或肺門(mén)X線征;④通過(guò)被動(dòng)凝集法檢測(cè)血清MP-IgM滴度≥1∶80。收集的病例均為急性期,即病程1周以內(nèi),有呼吸系統(tǒng)癥狀或體征,無(wú)其他混合感染,并排除其他細(xì)菌、病毒、衣原體感染。所有患兒近期均無(wú)使用過(guò)免疫抑制劑及免疫調(diào)節(jié)劑治療。同期收集解放軍306醫(yī)院門(mén)診健康查體的50例健康兒童作為正常對(duì)照組,年齡為6個(gè)月~13歲,平均年齡(6.59±3.12)歲,其中男28例,女22例,既往無(wú)免疫系統(tǒng)疾病史和慢性感染性疾病史,近3個(gè)月內(nèi)無(wú)感染、發(fā)熱及咳嗽等病史。2組性別、年齡等一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,有可比性。

      1.1.2 主要試劑 SmultestMK-Lymphocyte試劑盒(340503,50 T),均購(gòu)自美國(guó) BD公司;D-二聚體試劑盒(D-Dimer HS-0020007700),購(gòu)自挪威AXIS-SHIELD PoCAS公司;IgA、IgM、IgG單試劑免疫透射比濁測(cè)定試劑盒(YZB/GER 1783-2012),購(gòu)自上海明華體外診斷試劑有限公司;質(zhì)控血清,購(gòu)自衛(wèi)生部臨檢中心;流式細(xì)胞儀(Flow cytometer,F(xiàn)ACSCalibur),購(gòu)自美國(guó) BD公司;半自動(dòng)生化分析儀(HITACHI),購(gòu)自日本。

      1.2 方法

      1.2.1 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè) 分別抽取正常對(duì)照組及MPP組清晨空腹外周靜脈血1mL,于EDTA抗凝管中-30℃保存。T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè):取兩個(gè)專用試管分別標(biāo)A、B,取待檢測(cè)樣本100μL的全血分別加入 A管、B管,加入對(duì)應(yīng)的 A劑、B劑20μL,混勻,室溫避光20min。再于A管、B管分別加入事先配置好的配置溶血素1000μL,混勻,室溫避光10 min。在室溫下離心1 500 rmp/min,5min,棄上清,在試管底留下約50μL殘留液。再在每管中加入洗滌液2 mL,混勻后,離心1 500 rmp/min,5min,棄上清,在試管底留下約50μL殘留液。在每管中加入鞘液400μL,混勻后,上機(jī)。

      1.2.2 D-二聚體檢測(cè) 分別抽取正常對(duì)照組及MPP組清晨空腹外周靜脈血3mL,置于加入比例為9∶1(血:抗凝劑)的129mmol/L檸檬酸鈉的抗凝管中,2000 r/min離心分離血漿置于-30℃冰箱保存待檢。D-二聚體檢測(cè)采用Latex乳膠凝集法(嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作)。

      1.2.3 免疫球蛋白IgA、IgM、IgG測(cè)定 分別抽取正常對(duì)照組及MPP組清晨空腹外周靜脈血2 mL,于EDTA抗凝管中,2 000 r/min離心置于-30℃冰箱保存待檢。采用免疫透射比濁法進(jìn)行檢測(cè)(按照說(shuō)明書(shū)的操作步驟嚴(yán)格進(jìn)行)。

      1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;計(jì)量資料采用“x±s”描述;兩組間比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的t檢驗(yàn);檢驗(yàn)水準(zhǔn)P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)情況 MPP組CD+3細(xì)胞百分率(59.88±5.21)較正常對(duì)照組CD+3細(xì)胞百分率(69.58±4.61)低,2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);MPP組CD+4細(xì)胞百分率(36.37±3.86)較正常對(duì)照組CD+4細(xì)胞百分率(39.64±4.49)低,2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);MPP組CD+8細(xì)胞百分率(24.64±3.55)與正常對(duì)照組CD+8細(xì)胞百分率(23.59±3.46)比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;MPP組CD+4/CD+8比值(1.57±0.28)與正常對(duì)照組CD+4CD+8比值(1.64±0.33)比較,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果見(jiàn)表1。

      表1 MPP組與正常對(duì)照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群的比較Tab.1 MPP group and normal control group comparison of peripheral blood in T lymphocyte subsets

      2.2 D-二聚體檢測(cè)情況 MPP組D-二聚體表達(dá)水平(0.70±0.05)與正常對(duì)照組D-二聚體表達(dá)水平(0.39±0.05)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。

      2.3 血清免疫球蛋白檢測(cè)情況 MPP組與正常對(duì)照組比較,血清免疫球蛋白IgA增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);MPP組與正常對(duì)照組比較,血清免疫球蛋白IgM增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);MPP組血清免疫球蛋白IgG與正常對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表2)。

      表2 MPP組免疫球蛋白水平與正常對(duì)照組的比較(g/L)Tab.2 MPP group and normal control group comparison of peripheral blood in IgA、IgM、IgG(g/L)

      3 討論

      肺炎支原體(MP)是人類支原體肺炎的病原體,易引起兒童及青少年社區(qū)獲得性肺炎,由MP引起的肺炎支原體肺炎(MPP)曾稱原發(fā)性非典型性肺炎,是常見(jiàn)的呼吸道疾?。?-10]。MP感染機(jī)體后不僅可以通過(guò)釋放有毒的代謝產(chǎn)物損傷宿主,還可以通過(guò)刺激免疫細(xì)胞B細(xì)胞產(chǎn)生自身抗體或引起宿主細(xì)胞抗原結(jié)構(gòu)改變,從而導(dǎo)致病理免疫反應(yīng)[11-14]。有學(xué)者表明,引起MPP的發(fā)病主要有MP的直接侵入、呼吸道上皮細(xì)胞的吸附作用和免疫系統(tǒng)功能紊亂等,但目前傾向于免疫紊亂學(xué)說(shuō)[15]。

      本研究MPP組與正常對(duì)照組比較,CD3+細(xì)胞百分率明顯下降,結(jié)果顯示患兒感染MP早期抑制了機(jī)體T淋巴細(xì)胞的活化功能,從而導(dǎo)致機(jī)體免疫功能降低。有研究表明,CD3+細(xì)胞是鑒定T細(xì)胞的重要標(biāo)記,反映了全部T淋巴細(xì)胞的活化比例[16-18]。CD4+細(xì)胞分布于T細(xì)胞的輔助細(xì)胞誘導(dǎo)亞群和抑制細(xì)胞誘導(dǎo)亞群表面,主要是輔助性T細(xì)胞。CD4+細(xì)胞不僅可以介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答和遲發(fā)性超敏反應(yīng),還可介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答,輔助B細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白抗體。本研究MPP組患兒CD4+細(xì)胞較正常對(duì)照組明顯下降,結(jié)果顯示免疫應(yīng)答反應(yīng)紊亂。CD8+細(xì)胞是細(xì)胞毒性T細(xì)胞,具有殺傷靶細(xì)胞的功能,可以對(duì)產(chǎn)生特殊抗原反映的目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行殺滅,CD8+細(xì)胞發(fā)生變化可導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)的免疫反應(yīng)發(fā)生多種異常。CD4+、CD8+是區(qū)分成熟T細(xì)胞亞群的主要表面標(biāo)志。本研究MPP組患兒CD8+細(xì)胞百分比升高,結(jié)果顯示MPP患兒受到MP感染后機(jī)體正常免疫應(yīng)答反應(yīng)受到抑制。CD4+/CD8+是1對(duì)相互制約的細(xì)胞,機(jī)體中各種免疫細(xì)胞之間相互協(xié)作、相互制約,既可以清除機(jī)體異物抗原,還可以保護(hù)機(jī)體組織不受損傷。當(dāng)機(jī)體受到感染后,免疫細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答,維持機(jī)體正常的免疫功能狀態(tài)。正常情況下,T淋巴細(xì)胞及其亞群數(shù)目在周圍組織中相對(duì)穩(wěn)定[19],CD4+/CD8+的比值是反映機(jī)體免疫狀況的主要指標(biāo),用以監(jiān)測(cè)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能,其值改變說(shuō)明機(jī)體免疫功能發(fā)生了紊亂。本研究MPP組患兒CD4+/CD8+的比值下降,結(jié)果顯示患兒機(jī)體免疫系統(tǒng)受到損害。通過(guò)對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè),結(jié)果顯示患兒被MP感染后,CD4+和CD8+之間相互作用、相互抑制、相互調(diào)節(jié)的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)被打亂,維持機(jī)體的正常免疫功能下降,從而引起機(jī)體組織損傷。

      本研究顯示MPP組患兒D-二聚體水平明顯高于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,預(yù)示MPP患兒可能有急性肺栓塞的危險(xiǎn)。機(jī)體血液中存在著凝血和抗凝血兩系統(tǒng)(即纖維蛋白溶解系統(tǒng))[20]:在正常的生理狀態(tài)下,血液中凝血因子通過(guò)有限的不斷的被激活,從而產(chǎn)生凝血酶,進(jìn)而形成微量的沉著于心血管內(nèi)膜上的纖維蛋白,然而不斷被激活的纖維蛋白溶解系統(tǒng)又將形成的纖維蛋白溶解,且單核巨噬細(xì)胞不斷的吞噬被激活的凝血因子。上述凝血系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系統(tǒng)兩系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)平衡,既保證了機(jī)體血液存在的潛在可凝固性,又保證了機(jī)體血液不斷的流動(dòng)狀態(tài),若在某些誘發(fā)凝血過(guò)程的因素作用下,上述的動(dòng)態(tài)平衡被打破,觸發(fā)了凝血過(guò)程,便可形成血栓。血栓形成后激活纖溶系統(tǒng),產(chǎn)生D-二聚體等。即血漿D-二聚體是交聯(lián)纖維蛋白特異性降解產(chǎn)物之一,是繼發(fā)性纖溶的增強(qiáng)的特有代謝物,在高凝狀態(tài)和血栓形成的時(shí)明顯升高,能夠特異性地反應(yīng)體內(nèi)纖維蛋白降解的頻繁程度。其含量的升高反映血液系統(tǒng)纖溶活性的增強(qiáng),被公認(rèn)是纖維蛋白產(chǎn)生和纖溶發(fā)生的重要標(biāo)志物。由于D-二聚體作為纖維蛋白的一種穩(wěn)定而特異的降解產(chǎn)物,通過(guò)對(duì)D-二聚體測(cè)定用于多種血栓性疾病的輔助診斷。因此,對(duì)MPP患兒進(jìn)行血漿D-二聚體測(cè)定,有利于早期發(fā)現(xiàn)MPP患兒血液的凝集狀態(tài),預(yù)防血栓形成及血管病變的發(fā)生,對(duì)臨床實(shí)際工作中及時(shí)合理的使用抗凝藥物有指導(dǎo)作用,并有助于血栓形成的診斷、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后的評(píng)估。

      本研究通過(guò)對(duì)MPP組和正常對(duì)照組的免疫球蛋白IgA、IgM和IgG進(jìn)行檢測(cè),進(jìn)一步的研究體液免疫在MPP發(fā)病機(jī)制中的作用。結(jié)果顯示MPP組患兒的IgA、IgM水平均較正常對(duì)照組IgA、IgM水平增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);MPP組患兒的IgG水平與正常對(duì)照組IgG水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明患兒感染MP早期,機(jī)體體液免疫應(yīng)答中可產(chǎn)生IgA和IgM,免疫球蛋白IgG在感染早期表達(dá)不明顯。進(jìn)一步表明IgA對(duì)支原體感染具有抗菌、抗毒素、抗病毒作用;IgM對(duì)菌血癥感染有重要的防御作用。免疫球蛋白是具有抗體活性的動(dòng)物蛋白,是由淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)產(chǎn)生的一種具有高度特異性、具有不同理化性質(zhì)并能與多種抗原決定簇特異性結(jié)合的多種抗體的混合物,主要存在于血漿中,也可見(jiàn)于其他體液、組織和一些分泌液中。感染MP后機(jī)體一方面會(huì)刺激B細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)性抗體(即免疫球蛋白IgM及IgG),另一方面可致機(jī)體細(xì)胞膜抗原結(jié)構(gòu)改變或者相似的自身抗原產(chǎn)生自身抗體發(fā)生自身免疫應(yīng)答反應(yīng)。通過(guò)對(duì)免疫球蛋白含量的測(cè)定,進(jìn)而輔助多種疾病的診斷、療效和預(yù)后的觀察。免疫球蛋白IgA在機(jī)體免疫系統(tǒng)中具有抗菌、抗病毒、抗毒素的作用,可能對(duì)某些真菌和支原體也有作用,IgA含量低下機(jī)體易受感染從而引起呼吸道疾?。?1]。IgM是機(jī)體免疫應(yīng)答中最早產(chǎn)生的免疫球蛋白,是人體血清分子量最大的免疫球蛋白,其增高往往提示近期感染,有助于疾病的早期診斷。IgM具有溶菌和溶血作用,并具有較高的抗原結(jié)合價(jià)以及明顯的補(bǔ)體激活能力。IgG在機(jī)體免疫系統(tǒng)的免疫防護(hù)中起重要的作用,不僅可以調(diào)理吞噬細(xì)胞的吞噬作用,還可以對(duì)游離病毒和外毒素起到中和作用[21],是血清中含量最高、半衰期最長(zhǎng)的免疫球蛋白。

      綜上所述,MPP組患兒存在免疫失衡和紊亂情況,是MPP患兒病情嚴(yán)重或反復(fù)的重要原因之一,與T細(xì)胞功能紊亂及MP感染后機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)組織自身抗體導(dǎo)致多系統(tǒng)免疫損傷有關(guān)。血漿D-二聚體測(cè)定,利于早期發(fā)現(xiàn)MPP患兒血栓形成、預(yù)防急性肺栓塞的發(fā)生、指導(dǎo)抗凝藥物的及時(shí)應(yīng)用,并對(duì)療效觀察和評(píng)估預(yù)后具有重要意義。而免疫指標(biāo)的改變又為MP感染后機(jī)體的免疫功能狀態(tài)提供了科學(xué)依據(jù),可用于MPP患兒的輔助診斷和免疫調(diào)節(jié)治療的監(jiān)測(cè)。因此,兒童感染MP后免疫功能紊亂,受到不同程度抑制,因此在常規(guī)抗支原體治療的基礎(chǔ)上,結(jié)合不同的臨床癥狀及疾病進(jìn)展情況,進(jìn)一步監(jiān)測(cè)D-二聚體水平的表達(dá),加強(qiáng)對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)和治療。

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      (編校:李璐璐)

      Changes of D-Dimer and Immunoglobulin in Children w ith M ycop lasma Pneumonia and its Significance

      HAO Li1,ZHENG Cheng-zhong2Δ

      (1.Department of Pediatric,Clinical College of The 306 Hospital of PLA of AnhuiMedical University,Beijing 100101,China;2.Department of Pediatric,The 306 Hospital of PLA,Beijing 100101,China)

      ObjectiveTo explore the changes of T-lymphocyte subsets,D-Dimer and immunoglobulin in mycoplasma pneumonia children and its significance.MethodsThe levels of T lymphocyte subsets(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)in 50 children with mycoplasma pneumonia(MPP Group)and 50 healthy children were detected by flow cytometry;The levels of D-Dimer were detected by immunoturbidimetry;The levels of serum immunoglobulin were detected by immune turbidimetric method.ResultsThe results of T lymphocyte subsets:Compared with normal control group,CD3+and CD4+peripheral blood cells in MPP group were significantly declined(P<0.001)、CD8+cellswere increased slightly,butwith no significant difference、CD4+/CD8+ratioswere decreased slightly.The results of D-Dimer:Compared with normal control group,the levels of D-Dimer in MPP group were significantly escalated(P<0.001).The results of immunoglobulin:IgA and IgM in MPP group were both significantly higher than those of normal group,but IgGwas notdifferent from that in normal group.ConclusionChildren withmycoplasma pneumonia have immune disorder,whichmay generate abnormal clotting.Therefore,besides the conventional anti-mycoplasma pneumonia treatment,we need to detect the levels of D-Dimer according to the clinical symptoms and disease progression and strength the regulation and treatment of the immune system.

      mycoplasma pneumonia;T lymphocyte subsets;D-Dimer;immunoglobulin

      R446.63

      A

      1005-1678(2014)03-0156-04

      發(fā)展中國(guó)家肺炎是兒童時(shí)期最常見(jiàn)的疾病之一,也是我國(guó)住院患兒死亡中的首要病因,嚴(yán)重地威脅著我國(guó)兒童的身體健康[1]。肺炎支原體(Mycoplasma,MP)是兒童呼吸道感染常見(jiàn)的病原體,大小介于細(xì)菌與病毒之間,是已知能獨(dú)立生活的病原微生物中最小的細(xì)胞外寄生菌,廣泛寄居于自然界。肺炎支原體肺炎(mycoplasma pneumonia,MPP)好發(fā)于兒童及青少年,是最常見(jiàn)的由MP引起的下呼吸道感染性疾病,發(fā)病率在近年來(lái)有明顯上升的趨勢(shì)[2-3]。故對(duì)于MPP發(fā)病機(jī)制及治療的探討越來(lái)越引起人們的重視,有研究認(rèn)為,MP致病機(jī)制除與直接感染病原體相關(guān)外,還與機(jī)體的免疫平衡功能失調(diào)有關(guān)[2-4],其中T淋巴細(xì)胞為機(jī)體重要的免疫細(xì)胞。D-二聚體來(lái)源于纖溶酶溶解的交聯(lián)纖維蛋白凝塊,其增高反映了體內(nèi)凝血和纖溶系統(tǒng)的激活[5]。通過(guò)對(duì)D-二聚體的檢測(cè)可作為排查急性肺栓塞的有效發(fā)法,是急性肺栓塞診斷的重要手段之一。也有研究認(rèn)為,MPP發(fā)病機(jī)制中,相關(guān)細(xì)胞因子都直接或者間接地參與了免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)及免疫損傷[6]。在MPP體液免疫方面,免疫球蛋白IgA、IgM、IgG與疾病的嚴(yán)重程度和病程長(zhǎng)短成為人們研究的焦點(diǎn)。本文通過(guò)對(duì) MPP患兒 T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、D-二聚體及免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)水平進(jìn)行研究,探討其在診治小兒MPP中的價(jià)值,為MPP患兒的臨床診斷及治療提供理論依據(jù)。

      郝麗,女,碩士,住院醫(yī)師,研究方向:兒童感染性疾病與兒童過(guò)敏性疾病診治,E-mail:hao19840815li@163.com;鄭成中,通信作者,男,碩士,教授,研究方向:兒童感染性疾病與兒童過(guò)敏性疾病診治,E-mail:zcz3066@126.com。

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