三乙酰更昔洛韋的HPLC定量分析方法

郝六平，魏轉(zhuǎn)，薛娜，黃文杰，馬麗鋒

（河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥工程系，河北石家莊050026）

三乙酰更昔洛韋的HPLC定量分析方法

郝六平，魏轉(zhuǎn)，薛娜，黃文杰，馬麗鋒

（河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥工程系，河北石家莊050026）

目的建立三乙酰更昔洛韋的高效液相色譜定量分析方法，為企業(yè)決定是否回收三乙酰更昔洛韋提供依據(jù)。方法三乙酰更昔洛韋稀釋后進(jìn)高效液相色譜。色譜柱為COSMOSIL 5C18-PAQ Packed Column（4.6mm×250mm）；流動相為甲醇-水（10∶90）；檢測波長：255 nm；柱溫：25℃。結(jié)果該方法測得回歸方程為ΔA＝1156C（μg／mL）-262，相關(guān)系數(shù)r為0.9999。線性范圍為1～40μg／mL，定量限為1μg／mL，精密度RSD為0.6%，重復(fù)性RSD為0.2%。母液中濃度為23.2μg／mL。結(jié)論所建立的HPLC法，簡單、準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好。

三乙酰更昔洛韋；定量分析；高效液相色譜

更昔洛韋是一種2-脫氧鳥嘌呤核苷酸的類似物，可抑制皰疹病毒的復(fù)制，能夠預(yù)防及治療免疫功能缺陷患者的巨細(xì)胞病毒感染，如接受化療的腫瘤患者及使用免疫抑制劑的器官移植患者、巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎和巨細(xì)胞病毒性肺炎［1-3］。報道了多種更昔洛韋的合成方法［4-11］，其中三乙酰更昔洛韋（triacetylganciclovir）是生產(chǎn)更昔洛韋的中間體［11］。在更昔洛韋化學(xué)合成過程中，母液中存在一定量的三乙酰更昔洛韋。定量分析母液中三乙酰更昔洛韋的含量是藥品生產(chǎn)企業(yè)決定是否回收母液中三乙酰更昔洛韋的重要依據(jù)。生產(chǎn)更昔洛韋的企業(yè)目前還沒有建立合適的三乙酰更昔洛韋的定量分析方法，本方法以更昔洛韋含量測定方法為基礎(chǔ)［12］，對測定條件進(jìn)行了摸索，方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于三乙酰更昔洛韋的含量測定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 高效液相色譜儀（北京誠創(chuàng)康韻醫(yī)藥科技有限公司）。色譜柱：COSMOSIL 5C18-PAQ Packed Column（4.6mm×250mm）。

三乙酰更昔洛韋對照品（99.3%）和三乙酰更昔洛韋母液（河北柏奇藥業(yè)提供）；甲醇為色譜純（江蘇漢邦科技有限公司）；水為純凈水（自制），其余試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件：色譜柱：COSMOSIL 5C18-PAQ Packed Column（4.6mm×250mm），理論板數(shù)按三乙酰更昔洛韋峰計算應(yīng)不低于3000；流動相：甲醇-水（10∶90）；檢測波長：255 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20μL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：精密稱取三乙酰更昔洛韋對照品約25mg，置25mL容量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液1mL使溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，加流動相定量稀釋制成每1mL中含三乙酰更昔洛韋40μg的溶液，即為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。將此標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別稀釋成1、2、4、20μg／mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液［12］。

1.2.3 供試品溶液的制備：三乙酰更昔洛韋母液中主要成分為溶劑乙酸乙酯，并含有微量的三乙酰甲氧甘油和雙乙酰鳥嘌呤。三乙酰更昔洛韋母液用0.45μm濾膜過濾，精密量取濾液1mL，置100mL容量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液1mL使溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻制成稀釋100倍的供試品溶液，精密量取已稀釋100倍的供試品溶液10 m L置100 m L容量瓶中，加流動相稀釋至刻度搖勻制成稀釋1000倍的供試品溶液。

2 結(jié)果

2.1 吸收光譜及測定波長的選擇 標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)高效液相色譜儀，在190～300 nm進(jìn)行掃描，以紫外吸收峰高為縱坐標(biāo)，以吸收波長為橫坐標(biāo)繪制吸收圖譜，確定最大吸收波長。圖1中209 nm峰為溶劑甲醇吸收峰［13］，此外可知三乙酰更昔洛韋在255 nm處有最大吸收，故選擇255 nm為測定波長。

圖1 三乙酰更昔洛韋吸收曲線Fig.1 The absorption curve of triacetyl-ganciclovir

2.2 三乙酰更昔洛韋色譜峰 取濃度為4μg／m L的三乙酰更昔洛韋標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL進(jìn)樣，在255 nm測定其紫外吸收（見圖2），其色譜峰結(jié)果見表1。保留時間在2.8 min處的峰為甲醇峰［13］。

圖2 4μg／mL的三乙酰更昔洛韋色譜圖Fig.2 The chromatogram of triacetyl-ganciclovir of4μg／mL

表1 三乙酰更昔洛韋色譜峰結(jié)果Tab.1 The results of chromatogram of triacetyl-ganciclovir

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別取濃度為1、2、4、20、40μg／mL的三乙酰更昔洛韋標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL進(jìn)樣，在255 nm測定其紫外吸收面積，以紫外吸收面積為縱坐標(biāo)，以三乙酰更昔洛韋溶液濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行一元線性回歸，得到回歸方程：

ΔA＝1156C（μg／mL）－262，相關(guān)系數(shù)r為0.9999，定量限為1μg／m L（見圖3）。在該實(shí)驗(yàn)條件下，三乙酰更昔洛韋溶液濃度在1～40μg／mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 Standard curve

2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取濃度為4μg／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，連續(xù)進(jìn)樣5次，以峰面積計算精密度，RSD為0.6%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取對照品適量，按1.2.2項(xiàng)下的方法平行制備6份供試品溶液，按1.2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，計算樣品含量平均值為（99.6±0.2）%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 母液樣品的測定 取過濾稀釋后的三乙酰更昔洛韋母液20μL進(jìn)樣5次，在255 nm測定其紫外吸收面積平均值為（26557.0±1.3）%mV·s，按照所得一元線性回歸方程計算出母液中三乙酰更昔洛韋濃度為23.2μg／mL，換算后原母液中三乙酰更昔洛韋濃度為23.2 kg／m3。企業(yè)可依據(jù)此數(shù)據(jù)判斷是否需要從母液中回收三乙酰更昔洛韋。

3 討論

本研究建立的HPLC測定三乙酰更昔洛韋含量的方法簡單、靈敏、準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)表明，三乙酰更昔洛韋在實(shí)驗(yàn)條件下，具有良好的紫外吸收特性，其濃度與紫外吸收面積線性范圍良好，此方法能夠滿足企業(yè)對三乙酰更昔洛韋的定量測定。企業(yè)可以依據(jù)實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)，綜合考慮各種生產(chǎn)要素帶來的成本和回收母液中三乙酰更昔洛韋的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益，決定是否有必要對其進(jìn)行回收利用。

由于母液樣品中含有不溶性固體，為了避免將色譜柱堵塞，配置母液供試品時需要先過濾。濾渣需要用少量0.4%氫氧化鈉溶液進(jìn)行洗滌，將洗滌液和濾液合并后再進(jìn)行供試品溶液的制備，以避免由于過濾可能帶來的三乙酰更昔洛韋的損失。此外，由于生產(chǎn)過程的不穩(wěn)定性，企業(yè)可以根據(jù)三乙酰更昔洛韋的投料量、更昔洛韋產(chǎn)量、母液體積等參數(shù)以及企業(yè)自身積累的工作經(jīng)驗(yàn)預(yù)先考慮母液中三乙酰更昔洛韋的濃度大小，以免稀釋1000倍后的濃度超出本方法確定的線性范圍。

［1］張李峰，田金徽，移康，等.更昔洛韋對防治腎移植后巨細(xì)胞病毒感染預(yù)防性治療的系統(tǒng)評價［J］.復(fù)旦學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2010，37（2）：131-139.

［2］李健和，朱運(yùn)貴，曹俊華，等.更昔洛韋分散片在健康人體中的生物等效性研究［J］.中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測，2009，6（1）：17-20.

［3］靖百謙，歐揚(yáng).巨細(xì)胞病毒性肺炎抗病毒首選更昔洛韋［J］.中國社區(qū)醫(yī)師，2012，35：10.

［4］朱忠華，朱世龍，朱世仁，等.更昔洛韋的合成研究［J］.廣東化工，2010，37（4）：113-114.

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［9］羅曉燕.抗病毒藥阿昔洛韋的合成改進(jìn)［J］.化學(xué)試劑，2001，23（3）：184-185.

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［11］陳超君.更昔洛韋原料合成、結(jié)構(gòu)確證及質(zhì)量的研究［D］.武漢：華中科技大學(xué)學(xué)位論文.2003.

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（編校：王儼儼）

Quantitative analysis of triacetyl-ganciclovir by HPLC

HAO Liu-ping，WEIZhuan，XUE Na，HUANGWen-jie，MA Li-feng

（Department of Pharmaceutical Engineering，Hebei Chemical and Pharmaceutical College，Shijiazhuang 050026，China）

ObjectiveTo establish a HPLCmethod for determination of triacetyl-ganciclovir and provide the basis for enterprises to decidewehther the triacetyl-ganciclovir should be recycled or not.MethodsTriacetyl-ganciclovir was diluted with mobile phase for high performance liquid chromatography（HPLC）analysis.The chromatography was performed on a COSMOSIL 5C18-PAQ Packed Column（4.6 mm×250 mm，5μm）with methanol-water（10∶90）as themobile phase.The eluentwas detected at255 nm with 25℃of column temperature.ResultsThe regression equation wasΔA＝1156C（μg／mL）-262（r＝0.9999），linear range was 1-40μg／mL，and the LOQ was 1μg／mL with good precision（RSD＝0.6%）and repeatability（RSD＝0.2%）.The concentration of triacetyl-ganciclovir was 23.2μg／mL in mother liquor.Conclusion The HPLC method for determination of triacetyl-ganciclovir is simple and accurate with high sensitivity and repeatability.

triacetyl-ganciclovir；quantitative analysis；high performance liquid chromatography

R917

A

1005－1678（2014）08－0183－03

河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院院級課題（YZ201214）

郝六平，碩士，講師，工程師，研究方向：發(fā)酵技術(shù)與藥物分離純化，E-mail：haoliuping＠126.com。