DC-CIK生物免疫治療聯(lián)合放療在肝癌治療中的臨床效果

朱珍英 竺順斌 陳 剛 鮑 晉 張 秦 孫春華

我國是肝癌的高發(fā)國家，且原發(fā)性肝癌起病隱匿，確診時多已發(fā)展到晚期階段，手術(shù)治療較為困難[1]。臨床上多采用肝動脈栓塞化療、放療等治療肝癌，但研究發(fā)現(xiàn)，肝癌細(xì)胞對射線具有一定的抵抗性，部分患者的放療效果不理想[2]。隨著免疫學(xué)分子和細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，樹突狀細(xì)胞-細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(dendritic cell-cytokine-induced killers，DC-CIK)生物免疫治療成為了腫瘤治療的重要輔助手段[3]。本研究選取78例患者作為研究對象，觀察DC-CIK生物免疫治療聯(lián)合放療治療不同類型肝癌的臨床療效。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年2月到2014年2月我院收治的78例患者作為研究對象，其中男性54例，女性24例，年齡46～74歲，平均(61.8±11.4)歲；78例患者中52 例有肝硬化,9例合并有門靜脈高壓，其他患者無合并癥狀。將患者隨機分為2組，對照組39例，其中男性28例，女性11例，年齡49～72歲，平均(60.8±10.9)歲，其中26例患者合并肝硬化,5例合并有門靜脈高壓；觀察組39例，其中男性26例，女性13例，年齡46～74歲，平均(62.6±11.3)歲，其中26例患者合并肝硬化,4例合并有門靜脈高壓。2組患者的性別、年齡和病情無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 病例納入標(biāo)準(zhǔn)

78例患者均符合以下標(biāo)準(zhǔn)：①患者的臨床分期為Ⅲ期或Ⅳ期，為晚期肝癌；患者預(yù)計生存期≥3個月。②患者存在手術(shù)禁忌證或患者及家屬不愿接受手術(shù)，患者接受放射治療前未接受化療手術(shù)等其他治療方法。③患者無嚴(yán)重的血液系統(tǒng)疾病，骨髓造血功能無異常。④所有患者在知情的前提下自愿參與本次研究，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)原則。

1.3 治療方法

1.3.1 放療 2組患者均接受放射治療，采用電子直線加速器進行全肝移動照射，放射劑量為30～50 Gy，每周為一療程。

1.3.2 DC-CIK生物免疫治療 觀察組在放療的基礎(chǔ)上聯(lián)合DC-CIK生物免疫治療。DC-CIK生物免疫治療方法如下：①自體DC-CIK細(xì)胞的制備。CD細(xì)胞培養(yǎng)：抽取患者的外周血，使用血細(xì)胞分離機分離單核細(xì)胞，使用Ficoll 淋巴細(xì)胞分離液進一步分離淋巴細(xì)胞。洗滌分離的細(xì)胞，使用BIN無血清培養(yǎng)基制備細(xì)胞懸液，置于5%的CO2孵育箱孵育2 h。將細(xì)胞懸液移除后加入500 U/L的IL-4和1 000 U/mL的GM-CSF，繼續(xù)培養(yǎng)2～3 d后換液1次，第6天加入500 U/mL的TNF-α。CIK 細(xì)胞培養(yǎng)：分離淋巴細(xì)胞后加入1 000 U/mL的重組人IFN-γ和含有10%AB型人血清的PMI-1640培養(yǎng)液，孵育24 h后更換成含100 ng/mL小鼠抗人CD3單克隆抗體、1 000 U/mL的 IL-1 和IL-2 的RPMI-1640完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)2 d后換含IL-2的完全培養(yǎng)液隔日換液維持培養(yǎng)。將培養(yǎng)到第7天的DC和CIK細(xì)胞按1∶5混合，制備DC-CIK細(xì)胞懸液。②DC-CIK細(xì)胞回輸：靜脈回輸5×109個/L的DC-CIK 細(xì)胞，每4次為1個療程，患者根據(jù)病情進行3～8個療程的治療。

1.4 觀察指標(biāo)

比較2種方法的臨床治療效果，觀察患者治療前后的免疫功能和生活質(zhì)量，觀察2組患者的不良反應(yīng)的發(fā)生情況。①患者的臨床治療效果評價：按照RECIST 實體瘤近期療效評價標(biāo)準(zhǔn)[4]評價腫瘤的治療效果，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩(wěn)定(SD)和疾病進展(PD)，總有效率=(CR+PR+SD)/總病例數(shù)。同時，每半年對患者進行一次電話隨訪，持續(xù)3年，記錄患者的生存期。②患者的免疫功能評價：治療前后分別抽取患者的外周血并提取單核細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀分析患者T細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及NK細(xì)胞變化，評價患者的免疫功能的變化。③患者的生活質(zhì)量評價：患者生活質(zhì)量評價采用KPS[5]評分，比較患者治療前后的生活質(zhì)量的變化。④患者不良反應(yīng)的發(fā)生：觀察患者有無出現(xiàn)肝腎功能的損害等嚴(yán)重并發(fā)癥，其他并發(fā)癥包括惡心嘔吐、發(fā)熱和乏力等。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 2種方法的臨床治療效果評價

2組患者RECIST 實體瘤近期療效評價結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異(Z=11.82,P<0.05)，觀察組患者的治療總有效率為80.05%，明顯高于對照組的56.41%(χ2=6.02,P<0.05)；2組患者的生存隨訪結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異(Z=15.32,P<0.05)，觀察組患者平均生存期為(23.8±7.4)個月，治療組為(14.9±3.3)個月，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=6.88,P<0.05)。見表1。

表1 2種方法的臨床治療效果評價(例，%)

2.2 患者治療前后的免疫功能和生活質(zhì)量情況

經(jīng)過治療后，2組患者的KPS評分較治療前明顯好轉(zhuǎn)(P<0.05)，觀察組患者治療后的免疫功能較治療前明顯好轉(zhuǎn)，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。治療后觀察組患者的免疫功能和KPS評分明顯高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 患者治療前后的免疫功能和生活質(zhì)量

注：*為與對照組比較，P<0.05；#為與治療前比較，P<0.05。

2.3 2組患者的不良反應(yīng)的發(fā)生情況

2組患者均未發(fā)生嚴(yán)重的肝腎功能損害，部分患者出現(xiàn)較輕微的不良反應(yīng)：觀察組5例(12.82%)患者出現(xiàn)不良反應(yīng)，其中惡心嘔吐1例，發(fā)熱3例，乏力1例；對照組4例(10.26%)患者出現(xiàn)不良反應(yīng)，其中發(fā)熱1例，乏力3例。2組患者的不良反應(yīng)發(fā)生率無統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=0.00，P>0.05)。

3 討論

研究表明，放療可以有效減少肝癌的腫瘤面積，改善患者預(yù)后，但由于肝癌細(xì)胞對放射線具有一定的抵抗作用，單純放療在肝癌治療中的效果并不理想[6]。隨著免疫學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，DC-CIK生物免疫治療作為腫瘤的一種新型的腫瘤輔助治療的手段，受到了廣泛的關(guān)注。

本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組患者的腫瘤控制效果、生存期和生活質(zhì)量均明顯高于對照組，DC-CIK生物免疫治療聯(lián)合放療在肝癌的治療中療效較為顯著。這一結(jié)果與鐘國成等[7]的結(jié)果較為一致。此外，經(jīng)過治療后，觀察組患者血中的CD3+和CD16+CD56+的T淋巴細(xì)胞明顯增加，CD4+/CD8+升高，患者的機體免疫功能較治療前明顯好轉(zhuǎn)。這一結(jié)果與DC-CIK生物免疫治療的機制密切相關(guān)。DC細(xì)胞與CIK細(xì)胞共同培養(yǎng)可活化2個細(xì)胞群體，使IL-2和IFN-γ的表達和分泌明顯升高。DC細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子可促進CIK細(xì)胞成熟，從而獲得腫瘤殺傷活性更強的DC-CIK細(xì)胞。當(dāng)DC-CIK細(xì)胞回輸?shù)交颊唧w內(nèi)后， CD3+CD56+的T細(xì)胞以MHC非限制機制殺傷殺滅體內(nèi)肝癌細(xì)胞，而部分CD3+CD8+的T細(xì)胞和CD3+CD4+的T細(xì)胞則能特異性清除體內(nèi)腫瘤細(xì)胞。同時成熟的DC細(xì)胞通過誘導(dǎo)T細(xì)胞的分化和活化NK細(xì)胞，可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，增強患者的免疫力[8]。研究中，2組患者的不良反應(yīng)發(fā)生率無明顯差異，患者均未發(fā)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)。觀察組不良反應(yīng)以發(fā)熱為主，經(jīng)過對癥治療后均明顯減輕。故聯(lián)合治療并不會明顯增加患者的不良反應(yīng)，較為安全。綜上所述,DC-CIK生物免疫治療聯(lián)合放療治療肝癌的臨床療效較為顯著，患者不良反應(yīng)發(fā)生率較低，值得推廣應(yīng)用。

[1] 湯釗猷.提高肝癌療效的我見〔J〕.中華肝膽外科雜志,2010,16(8):561-562.

[2] 劉紅丹.三維適形放療在治療原發(fā)性肝癌中的研究進展〔J〕.實用癌癥雜志,2013,28(1):103-104.

[3] 王廣偉,顧元龍,劉敏豐,等.負(fù)載自身腫瘤裂解物的樹突狀細(xì)胞聯(lián)合殺傷細(xì)胞對肝癌患者術(shù)后免疫功能的影響〔J〕.中華普通外科雜志,2012,27(4):337-338.

[4] Jang GS,Kim MJ,Ha H,et al.Comparison of RECIST version 1.0 and 1.1 in assessment of tumor response by computed tomography in advanced gastric cancer〔J〕.Chin J Cancer Res,2013,25(6):689-694.

[5] 鄭 琳,郭晨陽,黎海亮,等.肝動脈化療栓塞聯(lián)合索拉非尼治療原發(fā)性肝癌〔J〕.中華消化外科雜志,2013,12(3):236-237.

[6] 張江洲.肝癌放療的應(yīng)用進展〔J〕.實用癌癥雜志,2013,28(2):215-217.

[7] 鐘國成,張小玉,孫 薏,等.抗原致敏DC聯(lián)合CIK在原發(fā)性肝癌治療中的應(yīng)用〔J〕.中國腫瘤臨床,2009,36(24):1404-1408.

[8] 孟冉冉,張躍偉,趙廣生,等.樹突狀細(xì)胞腫瘤疫苗抗腫瘤研究進展〔J〕.中華腫瘤防治雜志,2012,19(20):1597-1600.