JNK和STAT3蛋白在宮頸病變組織中的表達(dá)及臨床意義

陳 瀅 程艷香

宮頸癌(cervical cancer,CC)是最常見的婦科惡性腫瘤之一，在全球婦女惡性腫瘤中居第二位。全球每年約有20萬婦女死于此病，其中5.3萬發(fā)生在中國。早發(fā)現(xiàn)、早治療可使CC患者的生存率明顯提高。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun n-terminal kinase，JNK)信號通路在細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、應(yīng)激反應(yīng)以及多種人類疾病的發(fā)生與發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)與腫瘤血管生成、免疫抑制及腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)，并通過多途徑影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究采用免疫組化SABC法,檢測了CC組織和宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN)組織中JNK和、STAT3蛋白的表達(dá)情況，旨在闡明CC與宮頸癌前病變的發(fā)病機(jī)制奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，同時(shí)為臨床預(yù)測子宮頸癌前病變的發(fā)展提供客觀依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選擇廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院婦產(chǎn)科和武漢大學(xué)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科2005年1月-2008年12月確診的105例CIN患者，年齡22～65歲，中位年齡38歲，其中CINⅠ38例、CINⅡ33例、CIN Ⅲ34例；CC患者66例，年齡21～76歲，≤35歲11例，>35歲55例，中位年齡47歲，病理類型鱗狀細(xì)胞癌56例、腺癌8例、腺鱗癌2例。組織學(xué)分化：低分化23例、中分化33例、高分化10例。按2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期19例、Ⅱ期31例、Ⅲ期13例、Ⅳ期3例。手術(shù)或影像學(xué)檢查證實(shí)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例。上述患者術(shù)前均未行放療、化療或激素治療，且留取病變組織經(jīng)病理專家確診。同時(shí)選取10例正常宮頸組織作為對照(NCE)。

1.2 JNK、STAT3蛋白表達(dá)的檢測

采用免疫組織化學(xué)鏈霉素抗生物素蛋白—生物素—過氧化物酶(SABC)法。實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒要求進(jìn)行(試劑盒購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司)：切片染色后經(jīng)梯度乙醇脫水干燥，二甲苯透明，中性樹脂封固，顯微鏡下觀察，以細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞膜上出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性標(biāo)志。JNK蛋白表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核，STAT3蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜(細(xì)胞核少見)。根據(jù)文獻(xiàn)[1]以半定量方法判定染色結(jié)果，每張切片光鏡下(400×)觀察10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，共計(jì)1 000個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)<5%為0分、5%～25%為1分、26%～50%為2分、>50%為3分；細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核或細(xì)胞膜無色為0分、淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。上述兩項(xiàng)分值的乘積1～3分判為陽性，<1分判為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)關(guān)系的分析采用Spearman相關(guān)分析法，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種組織中JNK、STAT3蛋白表達(dá)情況

JNK、STAT3蛋白在NCE、CIN及CC組織中陽性表達(dá)率均呈逐漸增高趨勢，兩兩比較均有顯著差異，見表1。

表1 3種組織中JNK、STAT3蛋白陽性表達(dá)率比較(例，%)

注：與NCE組織相比，* 為P<0.05；#為P<0.001；與CIN組織相比，△為P<0.001。

2.2 JNK、STAT3蛋白表達(dá)與CC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

JNK、STAT3蛋白表達(dá)與CC患者年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)(P>0.05)，但與腫瘤組織學(xué)分化有關(guān)(P<0.005，χ2值分別為12.08、12.61)，見表2。

表2 JNK、STAT3蛋白表達(dá)與宮頸癌CC臨床病理特征參數(shù)的關(guān)系(例，%)

3 討論

3.1 JNK蛋白在宮頸癌前病變、CC組織中的表達(dá)及臨床意義

JNK家族是1990年被發(fā)現(xiàn)的促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)超家族成員之一，屬于進(jìn)化上保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。大量實(shí)驗(yàn)顯示，JNK 信號通路在細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、應(yīng)激反應(yīng)及多種人類疾病的發(fā)生與發(fā)展中起至關(guān)重要的作用。

有學(xué)者[2]研究顯示，JNK1在胃癌組織中的高表達(dá)率為45.16%、低表達(dá)率為54.84%。JNK2在胃癌組織中的高表達(dá)率為46.77%、低表達(dá)率為53.23%。高、中分化胃癌組織中的JNK1、JNK2表達(dá)水平顯著高于低分化胃癌組織，且兩者均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與患者年齡、性別、腫塊大小及PTNM分期無關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，CIN和CC組織中JNK蛋白陽性表達(dá)率均顯著高于NCE組織，提示JNK異常表達(dá)可能參與了子宮頸癌前病變、CC的發(fā)生及發(fā)展，并支持CIN與CC為同一疾病的連續(xù)病變的學(xué)說。本研究還顯示，CC組織中JNK蛋白表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分級有關(guān)(在分化差的CC組織中的陽性表達(dá)率明顯高于分化好的組織)，而與患者年齡、臨床分期、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，提示JNK蛋白過表達(dá)可能與CC預(yù)后不良有關(guān)。因此，JNK有可能成為判斷CC預(yù)后的一個(gè)重要參考指標(biāo)。

3.2 STAT3蛋白在宮頸癌前病變、CC組織中的表達(dá)及臨床意義

STAT3是Shuai等[3]于1993年在研究γ-干擾素誘導(dǎo)的細(xì)胞基因表達(dá)中首次發(fā)現(xiàn)的重要信號分子。研究發(fā)現(xiàn)，人類多種腫瘤中可檢測到STAT表達(dá)，如頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、多發(fā)性骨髓瘤、白血病等[4-9]。Yang等[10]應(yīng)用免疫組化方法對56例CIN患者病變組織中STAT3和Ki-67蛋白的表達(dá)進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)p-STAT3染色主要位于核內(nèi)，在CIN Ⅲ組織中陽性表達(dá)率為76.92%、在CINⅠ/Ⅱ中陽性表達(dá)率為13.33%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，表明p-SATA3異常表達(dá)與CIN分級和細(xì)胞增殖有關(guān)，并可能作為評價(jià)CC預(yù)后的一個(gè)新指標(biāo)。Yang等[11]進(jìn)一步分析了STAT3和Ki-67表達(dá)與CIN的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)高級別CIN和CC組織中STAT3的表達(dá)水平明顯高于正常宮頸組織和CINⅠ組織。

本研究結(jié)果顯示，STAT3蛋白在NCE、CIN及CC組織中的陽性表達(dá)率呈逐漸增高趨勢，兩兩比較均有顯著差異。提示STAT3蛋白異常表達(dá)在宮頸病變發(fā)生與進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。本研究還顯示，STAT3蛋白表達(dá)與CC組織學(xué)分級有關(guān)，但與患者年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征無關(guān)。因此，STAT3蛋白異常表達(dá)有可能作為判斷CC預(yù)后不良的一個(gè)客觀指標(biāo)。

綜上所述，JNK、STAT3蛋白在CIN及CC組織中的表達(dá)增強(qiáng)，與CC發(fā)生、發(fā)展及分化有關(guān)；檢測兩者表達(dá)可作為判斷CC患者預(yù)后不良的一項(xiàng)客觀指標(biāo)及指導(dǎo)個(gè)體化治療的依據(jù)。

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