20(s)-原人參二醇、人參皂苷Rh2及人參皂苷Rg3抗腫瘤作用的對比

張 虹 付雯雯 徐華麗 于曉風 曲紹春 睢大筼

(吉林大學藥學院藥理教研室，吉林 長春 130021)

惡性腫瘤是一種嚴重危害人類健康甚至生命的疾病。研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg3能抑制腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移，誘導癌細胞凋亡，增強抗癌藥物的藥效，亦對免疫功能有調(diào)節(jié)作用，已開發(fā)成國家一類抗癌新藥“參一膠囊”〔1～5〕。本文將Rg33位上的末端葡萄糖水解得到Rh2，再把Rh23位上的最后一個葡萄糖水解得到Ppd〔6〕，Ppd作為人參二醇組皂苷化學水解及人腸道菌代謝的終產(chǎn)物，可能比Rg3和Rh2具有更強的抗癌活性。本實驗室發(fā)現(xiàn)，Rh2的體外抑瘤作用明顯優(yōu)于Rg3，由于Rg3口服在體內(nèi)表現(xiàn)出良好的抗癌活性〔7〕，提示其可能通過體內(nèi)代謝為Rh2發(fā)揮抗癌作用。因此，Rh2進一步轉(zhuǎn)化成Ppd后抗癌活性是否會明顯增強成為研究重點。本文通過三種小鼠體內(nèi)移植性腫瘤模型，對Ppd、Rh2及Rg3的抗腫瘤作用進行對比研究。

1 材料和方法

1.1動物 昆明種小鼠，5～6周齡，體重18～22 g，雌雄各半(由長春高新醫(yī)學實驗動中心提供，合格證號：10-5113)；C57BL/6純系小鼠，5～6周齡，體重18～22 g，雌雄各半(中國醫(yī)學科學院實驗動物繁育場提供，合格證號：SCXK11-00-0006)。

1.2實驗藥品和試劑 20(s)-原人參二醇Ppd及人參皂苷Rh2原料粉，(海南亞洲制藥有限公司提供，批號 20120906)；參一膠囊(人參皂苷Rg3)吉林亞泰制藥有限公司生產(chǎn)，批號 20120228；羧甲基纖維素鈉，上?；瘜W試劑公司提供，批號 20120606；注射用環(huán)磷酰胺(CTX，規(guī)格：200 mg/支) 上海華聯(lián)制藥有限公司提供，批號20120205。將Ppd、Rh2及Rg3在研缽內(nèi)以1%羧甲基纖維素鈉配成0.5%的母液，然后倍比稀釋成不同濃度的混懸液。CTX以無菌生理鹽水稀釋，配成0.1%溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。小鼠肝癌H22、小鼠Lewis肺癌及小鼠黑色素瘤B16均由吉林省腫瘤研究所提供，經(jīng)本實驗室傳代保存。

1.3荷瘤動物模型的建立〔8〕取腹腔內(nèi)傳代7 d的肝癌H22小鼠，脫臼處死，在無菌條件下抽取腹腔內(nèi)瘤細胞，以生理鹽水洗滌3次，1000 r/min離心5 min，棄上清液，用無菌生理鹽水調(diào)整瘤細胞濃度為1×107/ml，接種于昆明種小鼠左側(cè)腹股溝皮下，每只鼠接種0.2 ml；取傳代Lewis肺癌和黑色素瘤B16腫瘤生長良好的小鼠，在無菌條件下剝離瘤組織塊，在玻璃研磨器內(nèi)研磨成腫瘤勻漿，按瘤重(g)：生理鹽水(ml)=1∶2的比例制備瘤液，接種于C57BL/6小鼠左腹股溝皮下，每只小鼠接種0.2 ml。

1.4體內(nèi)抑瘤試驗 接種24 h后將小鼠隨機分成11組，對照組給予0.5%羧甲基纖維素鈉；陽性藥組給予 CTX 30 mg/kg；治療組分別給予Ppd、Rh2及Rg3(均為25、50、100 mg/kg)。陽性藥組隔日腹腔注射給藥，其余各組均每日灌胃給藥1次，給藥容積為20 ml/kg，連續(xù)10 d，每天記錄體重，于停藥后24 h頸椎脫臼處死荷瘤小鼠，剝離腫瘤組織，稱重，按公式計算腫瘤抑制率(IR)：IR (%)=(1-實驗組平均瘤重/對照平均瘤組)×100%。

2 結(jié) 果

2.1對小鼠肝癌H22的生長抑制作用 各藥物組小鼠藥后體重均明顯增加，而陽性藥CTX組小鼠體重稍有降低，且小鼠死亡率高。Ppd、Rh2、Rg3、CTX對肝癌H22的抑瘤率。見表1。

2.2對小鼠Lewis肺癌的生長抑制作用 各藥物組小鼠藥后體重均增加，而陽性藥CTX組小鼠體重明顯降低，且小鼠死亡率較高。Ppd、Rh2、Rg3、CTX對Lewis肺癌的抑瘤率。見表2。

2.3對小鼠黑色素瘤B16的生長抑制作用 各藥物組小鼠藥后體重均增加，而陽性藥CTX組小鼠體重略有降低，且小鼠死亡率較高。Ppd、Rh2、Rg3、CTX對Lewis肺癌的抑瘤率。見表3。

表1 Ppd、Rh2及Rg3對H22肝癌荷瘤小鼠的腫瘤抑制作用±s，n=10)

表2 Ppd、Rh2及Rg3對Lewis肺癌荷瘤小鼠的腫瘤抑制作用±s，n=10)

表3 Ppd、Rh2及Rg3對黑色素瘤B16荷瘤小鼠的腫瘤抑制作用±s，n=10)

3 討 論

從人參中提取分離出來的多個單體均具有抗腫瘤活性，針對抗腫瘤作用研究最多的為二醇組人參皂苷20(s)-人參皂苷Rg3和Rh2。以往研究表明，Rg3和Rh2對體內(nèi)外肝癌、肺癌、黑色素瘤均有生長抑制作用〔9～11〕，且存在一定的量效關(guān)系，而Ppd是否具有比其代謝前體Rg3和Rh2更強的抗腫瘤活性成為我們研究的重點。本研究結(jié)果表明，Ppd、Rh2及Rg3在25、50、100 mg/kg劑量下，對肝癌H22、Lewis肺癌及黑色素瘤B16均有一定的抑瘤作用，以Ppd在50或100 mg/kg劑量下的抑瘤作用效果最明顯，Rh2與Rg3的抑瘤作用不如Ppd。比較給藥前后各組小鼠體重，陽性藥環(huán)磷酰胺組可使小鼠藥后體重明顯降低，而Ppd、Rh2及Rg3在25、50、100 mg/kg劑量下未使小鼠藥后體重降低，說明三種單體對小鼠無明顯的毒副作用。

綜上所述，Ppd對肝癌H22、Lewis肺癌及黑色素瘤B16均有明顯的抑制作用，其作用效果優(yōu)于Rh2與Rg3，可進一步開發(fā)為抗腫瘤新藥。

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