人參與北五味子配伍前后的抗氧化及促智作用

孫靖輝 李 賀 賈 皓 孫紅霞 張成義 陳建光 王春梅

(北華大學(xué)藥學(xué)院，吉林 吉林 132013)

人參是五加科植物人參的根莖，是我國傳統(tǒng)的中藥材，有“百草之王”的美譽(yù)，具有廣泛的藥理學(xué)作用，主要活性成分是人參皂苷〔1〕。北五味子系木蘭科植物五味子的成熟果實(shí)，其活性成分主要包括揮發(fā)油、多糖和木脂素等〔2〕?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明人參和北五味子均具有提高免疫力、抗氧化、抗衰老等作用〔3～5〕，且二者為常用的傳統(tǒng)中藥配伍〔6〕。本實(shí)驗通過觀察人參水提液、北五味子水提液和北五味子人參共煎劑對D-半乳糖衰老模型小鼠腦內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和膽堿酯酶(AchE)的影響及Morris水迷宮和避暗實(shí)驗中行為學(xué)的作用，探討并比較了北五味子和人參配伍前后的抗氧化與促智作用。

1 材料與器材

1.1動物 昆明小鼠，體重(20±2)g，雌雄各半，長春高新醫(yī)學(xué)動物實(shí)驗研究中心提供，合格證：SCXK(吉)2012-2013。

1.2藥物與試劑 人參(4年參)購自吉林撫松；北五味子購自吉林長春； D-半乳糖由北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供；SOD、MDA和AchE試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.3實(shí)驗儀器 Morris水迷宮(MT-200)、小鼠避暗儀(BA-200)由成都泰盟科技有限公司制造；酶標(biāo)儀(Multiskan FC)由賽默飛世爾公司制造。

1.4方法

1.4.1藥物的制備 人參水提液的制備：人參粉碎后過六號篩，水浸泡0.5 h，100℃水煎2 h，4 000 r/min離心取上清液，再次加水100℃水煎2 h，離心取上清液，合并兩次上清液，定容為30 mg生藥/ml的人參水溶液。

北五味子水提液的制備：北五味子粉碎后過五號篩，水浸泡0.5 h，提取方法同上。

人參與北五味子共煎劑的制備：人參粉碎后過六號篩，北五味子粉碎后過五號篩，二者干粉1∶1合并后水浸泡0.5 h，提取方法同上。

1.4.2Morris水迷宮試驗 昆明種小鼠經(jīng)水迷宮檢測去掉先天愚型和超聰明型等不符合條件的小鼠，將篩選出的符合實(shí)驗要求的60 只小鼠進(jìn)行稱重排序，采用隨機(jī)數(shù)字表法將其平均分為5組，即空白組、模型組、人參組、北五味子組和人參+北五味子(G+S)組，自由飲食飲水。

模型制造：將D-半乳糖用生理鹽水配制成15 mg/ml的注射液，給予模型組、人參組、北五味子組和G+S組頸背部皮下注射，1次/d，給藥劑量為1.5 mg/10 g；空白組同法給予等劑量生理鹽水。以上給藥周期均為6 w。

從第7周開始，進(jìn)行口服灌胃給藥，人參組給予人參水提液，北五味子組給予北五味子水提液，G+S組給予人參北五味子共煎劑，灌胃劑量為7 mg/10 g，1次/d；空白組和模型組均給予同等劑量的蒸餾水灌胃，連續(xù)給藥15 d。給藥結(jié)束后，進(jìn)行時間為90 s的定位航行試驗和空間探索試驗。試驗結(jié)束后，小鼠斷頭處死，取腦后冰浴勻漿、離心，取上清液進(jìn)行MDA含量、SOD和AchE活性測定。

1.4.3避暗試驗 昆明種小鼠經(jīng)避暗檢測去掉先天愚型和超聰明型等不符合條件的小鼠，將篩選出的符合實(shí)驗要求的60 只小鼠進(jìn)行稱重排序，分組、造模和給藥方法同上。末次給藥后進(jìn)行避暗測試，記錄小鼠學(xué)習(xí)階段的錯誤次數(shù)，第2天進(jìn)行記憶能力試驗，測試記憶階段的避暗潛伏期和錯誤次數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1Morris 水迷宮 與模型組相比較，人參組、北五味子組和G+S組均能夠明顯縮短D-半乳糖衰老模型小鼠在Morris水迷宮定位航行試驗中的潛伏期和搜索路程；空間探索試驗結(jié)果也表明人參組、北五味子組和G+S組的穿越平臺次數(shù)和跨越目標(biāo)象限時間占總游泳時間百分比較模型組有顯著的提升。在人參組、北五味子組和G+S組的三者組間比較結(jié)果來看，G+S組在定位航行試驗中的潛伏期和搜索路程要明顯的優(yōu)于人參組和北五味子組，而空間探索實(shí)驗則三組間無明顯差別。見表1。

2.2避暗試驗 人參組、北五味子組和G+S組在學(xué)習(xí)階段的錯誤次數(shù)要明顯少于模型組，而且記憶測試階段的潛伏期和錯誤次數(shù)也要明顯的優(yōu)于模型組。人參組、北五味子組和G+S組的三組組間比較結(jié)果顯示，G+S組在學(xué)習(xí)階段的成績明顯優(yōu)于人參組和北五味子組，而記憶測試階段的成績?nèi)M間的比較結(jié)果并無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

2.3腦內(nèi)MDA含量、SOD和AchE活性 人參組、北五味子組和G+S組動物腦內(nèi)SOD活性均明顯高于模型組，而MDA含量與AchE活性明顯低于模型組。人參組、北五味子組和G+S組的三組組間比較結(jié)果顯示，G+S組動物腦內(nèi)SOD活性要高于人參組和北五味子組，而MDA含量要低于人參組和北五味子組，三組間AchE活性并無明顯差異，但G+S組較人參組和北五味子組有明顯的降低趨勢。見表3。

表1 各組對衰老模型小鼠Morris水迷宮中的實(shí)驗結(jié)果±s,n=12)

表2 各組對衰老模型小鼠避暗實(shí)驗學(xué)習(xí)和記憶能力的影響±s,n=12)

表3 各組對衰老模型小鼠腦內(nèi)MDA含量、SOD和AchE活性的影響±s,n=12)

3 討 論

在中藥復(fù)方的研究中，人參與北五味子是常見的傳統(tǒng)配伍。有研究表明，當(dāng)北五味子與人參配伍水煎后，北五味子中的酸性成分會使溶液的pH值下降而導(dǎo)致人參皂苷的糖鏈斷裂和轉(zhuǎn)化，人參皂苷可由分子量較大的皂苷轉(zhuǎn)化為分子量較小的次級皂苷或生物活性更強(qiáng)的稀有皂苷〔6〕。而根據(jù)人參皂苷的“前藥”理論和相關(guān)報道，這種次生皂苷無論是在體內(nèi)的吸收還是藥理活性的表現(xiàn)均要優(yōu)于其皂苷前體〔7〕。在黃鑫等〔8〕的研究中，將北五味子與人參按不同比例進(jìn)行配伍水煎，發(fā)現(xiàn)與單煎劑相比，北五味子中的主要有效成分五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素含量均有不同程度的增加。

D-半乳糖致衰老方法是目前最為常用的亞急性衰老動物模型，注射后所導(dǎo)致的糖代謝紊亂可引起全身各組織器官的功能衰退，其中學(xué)習(xí)記憶能力下降、SOD活性降低和MDA含量升高等與衰老動物的表現(xiàn)相一致〔9～11〕。本實(shí)驗的研究結(jié)果表明，與人參、北五味子的單煎水提液相比，人參北五味子共煎劑具有更加明顯的提高衰老模型動物抗脂質(zhì)過氧化和清除氧自由基的作用，同時AchE的活性測定結(jié)果顯示出人參北五味子共煎劑能顯著抑制腦內(nèi)AchE的活性，提高乙酰膽堿的作用，而增加老年動物的學(xué)習(xí)記憶能力，Morris水迷宮和避暗實(shí)驗也分別從不同角度證實(shí)了這一作用，值得注意的是，從行為學(xué)的實(shí)驗結(jié)果來看，人參北五味子共煎劑所產(chǎn)生出的促智作用主要體現(xiàn)在短期學(xué)習(xí)能力的提高，而對記憶能力的改善作用與人參和北五味子的單煎劑無明顯差別，這一現(xiàn)象也需要進(jìn)一步的實(shí)驗進(jìn)行探討。

4 參考文獻(xiàn)

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