母牛分枝桿菌菌苗聯(lián)合化療對肺結(jié)核患兒的療效及免疫功能的影響

張春曉，吳隼，張崇，郭慶合

（1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院結(jié)核內(nèi)三科，河南新鄉(xiāng)453100；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科，河南新鄉(xiāng)453100；3.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453100；4.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453100）

母牛分枝桿菌菌苗聯(lián)合化療對肺結(jié)核患兒的療效及免疫功能的影響

張春曉1，吳隼2，張崇3，郭慶合4

（1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院結(jié)核內(nèi)三科，河南新鄉(xiāng)453100；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科，河南新鄉(xiāng)453100；3.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453100；4.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453100）

目的探討母牛分枝桿菌菌苗聯(lián)合化療對肺結(jié)核患兒的療效以及對患兒免疫功能的影響。方法選取2010年12月至2013年12月在新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院、衛(wèi)輝市人民醫(yī)院和衛(wèi)輝市第三人民醫(yī)院等三家醫(yī)院接受治療的89例肺結(jié)核患者，隨機分為對照組和觀察組。對照組予常規(guī)抗結(jié)核化療，觀察組在化療基礎(chǔ)上聯(lián)合母牛分枝桿菌菌苗治療。2組患兒于治療前、后抽取外周靜脈血，采用流式檢測外周血CD4+、CD8+、CD16+CD56+細胞比例以及CD4+/CD8+比值，采用ELISA法檢測外周血血清TNF-α和IL-10的水平。取2組患兒每人3份痰標本(夜間痰、清晨痰和即時痰）進行涂片統(tǒng)計2組患兒治療后結(jié)核菌陰轉(zhuǎn)率。結(jié)果治療前，2組患兒各項指標差異比較不具統(tǒng)計學(xué)意義。治療后，觀察組組外周血CD4+T淋巴細胞、CD16+CD56+細胞比例以及CD4+/ CD8+比值顯著高于治療前和對照組治療后(P＜0.05），2組患兒CD8+T淋巴細胞細胞比例均較治療前顯著下降(P＜0.05），組間差異不具統(tǒng)計學(xué)意義；治療后，觀察組外周血血清TNF-α和IL-10的水平較治療前下降且明顯高于對照組(P＜0.05）。療程結(jié)束后，對照組40例患兒涂片呈陰性，陰轉(zhuǎn)率為90.9%，觀察組45例患兒涂片呈陰性，陰轉(zhuǎn)率為100%，2組患兒陰轉(zhuǎn)率差異比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。結(jié)論母牛分枝桿菌菌苗聯(lián)合化療對肺結(jié)核患兒具有顯著療效，能夠顯著改善患兒免疫功能。

母牛分枝桿菌菌苗；化療；肺結(jié)核；免疫功能

結(jié)核病是嚴最危害公眾健康的全球性公共衛(wèi)生問題，近年來，全球結(jié)核病疫情呈現(xiàn)上升趨勢，每年大約超過800萬例新增結(jié)核病，其中兒童約有130萬結(jié)核病新增病例，每年約40萬～50萬患兒死亡［1-3］。我國是全球第二大結(jié)核病高發(fā)國家，其發(fā)病率和病死率始終居我國傳染病之首，隨著發(fā)病率的升高，兒童結(jié)核病也出現(xiàn)增加趨勢，據(jù)不完全統(tǒng)計，我國0～14歲小兒的平均感染率為9.6%［4］。結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病，可侵及許多臟器，以肺部結(jié)核感染最為常見，人體感染結(jié)核菌后不一定發(fā)病，當?shù)挚沽档突蚣毎閷?dǎo)的變態(tài)反應(yīng)增高時，才可能引起臨床發(fā)?。?-7］。研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核病患者外周血淋巴細胞亞群比例失調(diào)，證實了結(jié)核病患者存在T淋巴細胞免疫功能降低［8］。本研究選取在新鄉(xiāng)市三家醫(yī)院接受肺結(jié)核治療的患兒作為研究對象，探討母牛分枝桿菌菌苗聯(lián)合化療對肺結(jié)核患兒的療效以及對患兒免疫功能的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年12月～2013年12月本市新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院、衛(wèi)輝市人民醫(yī)院和衛(wèi)輝市第三人民醫(yī)院等三家醫(yī)院收治的4～14歲肺結(jié)核病患兒共89例，其中新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院收治13例，男9例，女4例；平均年齡（8.0± 4.4）歲，其中4～7歲2例，8～11歲6例，12～14歲5例；衛(wèi)輝市人民醫(yī)院收治10例，其中男6例，女4例；平均年齡（8.7±4.7）歲；4～7歲1例，8～11歲4例，12～14歲5例；衛(wèi)輝市第三人民醫(yī)院收治21例，其中男13例，女8例；平均年齡（8.2±3.9）歲；4～7歲1例，8～11歲8例，12～14歲12例；經(jīng)胃液、痰結(jié)核菌檢查、PPD試驗、血清結(jié)核抗體檢查確診為肺結(jié)核，所有病例均符合中華醫(yī)學(xué)會兒科分會呼吸學(xué)組制定的兒童肺結(jié)核臨床診斷標準。所有患者均簽署知情同意書并受醫(yī)院倫理委員會監(jiān)督進行。所有患兒隨機分為對照組和觀察組，對照組44例，其中男28例，女16例，平均年齡（8.3±4.6）歲，其中4～7歲4例，8～11歲18例，12～14歲22例；觀察組45例，其中男28例，女17例，平均年齡（8.2±3.9）歲，4～7歲5例，8～11歲20例，12～14歲20例。2組患兒在性別、年齡等差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。所有患兒均無其他臨床并發(fā)癥。

1.2 治療方法 對照組患兒給予單純化療：異煙肼［10 mg/（kg·d）］、利福平［10 mg/（kg·d）］，呲嗪酰胺［25 mg/（kg·d）］。觀察組患兒在對照組基礎(chǔ)上給予母牛分枝桿菌菌苗聯(lián)合治療：劑量22.5μg/次，與化療同時使用，深部肌肉注射，每周1次。2個月為1個療程，2組患兒均治療2個療程。2組患兒均予以全程督導(dǎo)管理，并跟蹤隨訪24個月。本實驗獲得患者知情同意，且經(jīng)過本院倫理委員會批準。

1.3 檢測指標 分別抽取治療前后2組患兒外周靜脈血4mL，分為2份，一份全血用于流式檢測外周血CD4+T淋巴細胞、CD8+T、CD16+CD56+細胞比例以及CD4+/CD8+比值；另一份離心取上清采用ELISA法檢測血清TNF-α和IL-10的水平，操作嚴格按照ELISA試劑盒說明書進行。取治療后患兒3份痰標本（夜間痰、清晨痰和即時痰）進行涂片檢查，痰標本應(yīng)以膿樣、干酪樣或膿性粘液樣性質(zhì)的痰液為合格標本，痰量應(yīng)為3～5mL。

1.4 統(tǒng)計方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，正態(tài)計量數(shù)據(jù)用“±s”表示，正態(tài)資料組間比較采用t檢驗，樣本率的比較采用卡方檢驗分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患兒治療前后外周血淋巴細胞亞群變化 結(jié)果如圖1所示，治療前，2組患兒外周血淋巴細胞亞群比例和NK細胞比例比較無統(tǒng)計學(xué)意義。治療后，觀察組外周血CD4+T淋巴細胞、CD16+CD56+細胞比例以及CD4+/CD8+比值顯著高于治療前和對照組治療后（P＜0.05）。而2組患兒CD8+T淋巴細胞比例均較治療前顯著下降，其中觀察組下降更為顯著（P＜0.05，見圖1）。

圖1 治療前后2組患兒外周血淋巴細胞亞群比較Fig.1 Comparison of peripheral blood lymphocyte subsets in children of two groups before and after treatment

2.2 2組患兒治療前后外周血血清TNF-α和IL-10水平變化 結(jié)果如圖2所示，治療前，2組患兒外周血血清TNF-α和IL-10水平差異比較不具統(tǒng)計學(xué)意義。治療后，2組患兒外周血血清TNF-α和IL-10的水平較治療前均顯著下降（P＜0.05），且觀察組顯著低于對照組（P＜0.05）。

圖2 治療前后2組患兒血清TNF-α和IL-10水平比較Fig.2 Comparison of serum TNF-αand IL-10 levels in children of two groups before and after treatment

2.3 2組患兒治療后結(jié)核菌轉(zhuǎn)陰率比較 結(jié)果如表1所示，經(jīng)過治療后，痰涂片結(jié)果顯示，對照組40例患兒涂片呈陰性，陰轉(zhuǎn)率為90.9%，觀察組45例患兒涂片呈陰性，轉(zhuǎn)陰率為100%，2組患兒陰轉(zhuǎn)率差異比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 治療后2組患兒結(jié)核菌陰轉(zhuǎn)情況比較Tab.1 Comparison of tuberculosis overcast in two groups after treatment

3 討論

結(jié)核病是嚴重危害人類健康的慢性傳染病，是我國重點控制的重大疾病之一，我國兒童結(jié)核病相當嚴峻，感染率及患病率仍高，機體免疫狀態(tài)是決定結(jié)核病發(fā)生、發(fā)展的一個重要影響因素。結(jié)核免疫以T淋巴細胞介導(dǎo)的細胞免疫為主，同時體液免疫的也發(fā)揮一定的作用［9-10］。國內(nèi)外研究顯示：肺結(jié)核患者體內(nèi)細胞免疫功能異常，CD4+T淋巴細胞減少，CD8+T淋巴細胞增多，CD4+/CD8+比例下降甚至倒置［11］。Jeong YH等［12］研究結(jié)果顯示，肺結(jié)核患者在經(jīng)過抗結(jié)核治療后，體內(nèi)CD4+T淋巴細胞都有不同程度的提高，CD4+/CD8+比例也隨之升高，本研究中，2組患兒在經(jīng)過2個療程的治療后，CD4+T淋巴細胞比例、CD16+CD56+細胞比例和CD4+/CD8+比值都表現(xiàn)出不同程度的上升，另外，CD8+比例也較治療前有顯著下降。結(jié)果提示，經(jīng)過系統(tǒng)的抗結(jié)核治療后，患兒體內(nèi)細胞免疫功能得到顯著改善。

國內(nèi)外研究證明，細胞因子參與結(jié)核病的應(yīng)答及免疫反應(yīng)過程。Mattos AM等［13］研究表明，結(jié)核病患者由于結(jié)核菌的感染，會激活體內(nèi)T細胞釋放腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-10（IL-10）等細胞因子。TNF-α由單核巨噬細胞和淋巴細胞所產(chǎn)生，能夠促進巨噬細胞活化，增強其吞噬作用；參與肉芽腫形成，從而在結(jié)核分枝桿菌感染中起保護作用，而過量的TNF-α則可致病情惡化，對機體產(chǎn)生損傷反應(yīng)［14-15］。IL-10作為抑制性細胞因子，其分泌過多則可能促進結(jié)核分枝桿菌感染慢性化和復(fù)發(fā)［16-17］。在本研究中，2組患兒經(jīng)過2個療程的治療后，外周血血清TNF-α和IL-10水平均顯著下降，說明本研究中2組治療方案對肺結(jié)核患兒免疫功能的影響與調(diào)節(jié)機體內(nèi)細胞因子有關(guān)。

母牛分枝桿菌菌苗是一類雙向免疫調(diào)節(jié)制劑，可作為聯(lián)合用藥，用于結(jié)核病化療的輔助治療［18-19］。Stanford等［20］學(xué)者進行了長期的系列研究，均證明母牛分枝桿菌菌苗能夠增強動物細胞免疫功能和抗結(jié)核菌感染功能，是迄今為止最好的結(jié)核病免疫調(diào)節(jié)劑，諸多文獻報道了母牛分枝桿菌菌苗在結(jié)核病方面的治療［21］。本研究中，采用母牛分枝桿菌菌苗聯(lián)合化療對肺結(jié)核患兒進行治療，與單純化療相比，聯(lián)合治療組患兒在免疫功能改善和細胞因子水平調(diào)節(jié)方面表現(xiàn)出更加顯著的療效，結(jié)核菌轉(zhuǎn)陰率也顯著高于對照組。

綜上所述，肺結(jié)核患者接受母牛分枝桿菌菌苗聯(lián)合化療方案治療后，其細胞免疫功能改善以及療效更加顯著。

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（編校：譚玲）

Effect of M ycobacterium vaccae vaccine combined w ith chemotherapy on immune function in treatment of children w ith pulmonary tuberculosis

ZHAN Chun-xiao1，WU Sun2，ZHANG Chong3，GUO Qing-he4

（1.Third Department of Tuberculosis Internal Medicine，F(xiàn)irst Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College，Xinxiang 453100，China；2.Department of Blood Internal Medicine，F(xiàn)irst Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College，Xinxiang 453100，China；3.College of Medicine，Xinxiang Medical University，Xinxiang 453100，China；4.Medical Inspection Institute，Xinxiang Medical University，Xinxiang 453100，China）

ObjectiveTo investigate the effect of Mycobacterium vaccae vaccine combined with chemotherapy on immune function in treatment of children with pulmonary tuberculosis.Methods89 caseswith pulmonary tuberculosis from December 2010 to December 2013 treated in three hospitals in xinxiang city were randomly divided into controlgroup and observation group.The controlgroup was given regular chemotherapy，the observation group was given chemotherapy combined with Mycobacterium vaccae vaccine therapy.CD4+，CD8+，CD8+/CD4+and CD16+CD56+in peripheral blood were evaluated by FCM before and after treatment.Serum TNF-αand IL-10 levels were detected by the method of ELISA.Taking 3 sputum samples（night sputum，morning sputum and sputum atmoment）of each patient to smear after treatment.ResultsBefore treatment，there was no significant difference of each index between two groups.After treatment，CD4+，CD4+/CD8+and CD16+CD56+in the observation group were significantly higher than that before treatment and the control group（P＜0.05）.The proportion of CD8+in two groups was significantly lower than before treatment（P＜0.05），the difference between groups was not statistically significant.Serum TNF-αand IL-10 levels decreased significantly in two groups than those before treatment and the control group（P＜0.05）.After treatment，the negative conversion rate in the control group was90.9%（n=40），while 100%（n=45）in the observation group.The difference between two groupswas statistically significant（P＜0.05）.ConclusionMycobacterium vaccae vaccine combined with chemotherapy has a significant effect on children with pulmonary tuberculosis.It could significantly improve the immune function of children.

Mycobacterium vaccae vaccine；chemotherapy；pulmonary tuberculosis；immune function

R521

A

1005-1678(2014）07-0129-03

河南省教育廳科學(xué)技術(shù)研究重點項目13A320863

張春曉，女，本科，主治醫(yī)師，研究方向：結(jié)核病學(xué)，E-mail：okzcxiao@126.com。