茶多酚對維持性血液透析患者氧化應(yīng)激及微炎癥狀態(tài)的影響

劉學(xué)義，柴紅，杜占彩，張靖，袁莉

（1.唐山市工人醫(yī)院腎內(nèi)科，河北唐山063000；2.唐山市工人醫(yī)院內(nèi)分泌科，河北唐山063000；3.唐山市工人醫(yī)院供應(yīng)室，河北唐山063000；4.唐山市工人醫(yī)院腎病科，河北唐山063000；5.唐山市工人醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河北唐山063000）

茶多酚對維持性血液透析患者氧化應(yīng)激及微炎癥狀態(tài)的影響

劉學(xué)義1，柴紅2，杜占彩3，張靖4，袁莉5

（1.唐山市工人醫(yī)院腎內(nèi)科，河北唐山063000；2.唐山市工人醫(yī)院內(nèi)分泌科，河北唐山063000；3.唐山市工人醫(yī)院供應(yīng)室，河北唐山063000；4.唐山市工人醫(yī)院腎病科，河北唐山063000；5.唐山市工人醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河北唐山063000）

目的探討茶多酚對維持性血液透析(maintenance hemodialysis，MHD）患者氧化應(yīng)激和微炎癥狀態(tài)的影響及可能機制。方法60例MHD患者，隨機分為常規(guī)組及茶多酚組；選擇30個健康者作為正常對照組。3個月后檢測常規(guī)組及茶多酚組丙二醛(malondialdehyde，MDA）、晚期氧化蛋白產(chǎn)物(advanced oxidation protein products，AOPP）、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD）、腫瘤壞死因子-α(turnor necrosis factor-α，TNF-α）、C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP）、白介素-6(interleukin-6，IL-6）及核因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB）。結(jié)果治療前，常規(guī)組及茶多酚組與對照組相比MDA、AOPP升高(P＜0.01），SOD下降(P＜0.01）；治療后，茶多酚組與常規(guī)組相比，MDA、AOPP下降(P＜0.01），SOD升高(P＜0.01）。治療后，常規(guī)組及茶多酚組與對照組相比，NF-κB、TNF-α、CRP、IL-6、氧化指標均有所升高，存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01）；茶多酚組與常規(guī)組相比，氧化指標均有所下降，存在統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.01）。結(jié)論茶多酚可以改善MHD患者的氧化應(yīng)激和微炎癥狀態(tài)。

血液透析；茶多酚；微炎癥；氧化應(yīng)激；核因子-κB

維持性血液透析是當前治療血液病的一種常規(guī)療法。據(jù)報道進行維持性血液透析的患者機體處于一個較高的氧化應(yīng)激狀態(tài)和微炎癥的水平，通過不同的機制引起一系列的并發(fā)癥，如心血管疾病、營養(yǎng)不良、紅細胞生成素抵抗及淀粉樣變等，嚴重影響維持性血液透析患者生活質(zhì)量和存活時間［1-2］。減輕氧化應(yīng)激和改善微炎癥狀態(tài)，可以提高患者生活質(zhì)量及存活時間［3］。茶多酚是多種多羥基類化合物的總稱，是一種天然的生物活性物質(zhì)。近年來國內(nèi)外研究人員發(fā)現(xiàn)綠茶多酚具有廣泛的生物活性，包括抗炎、抗氧化、腫瘤、改善血管內(nèi)皮細胞等作用，并進行了廣泛深入的研究［4］；但未見報道茶多酚應(yīng)用于MHD老年患者研究氧化應(yīng)激及微炎癥狀態(tài)，本文就此進行了探討。

1 資料與方法

1.1 研究對象與分組 選擇唐山市工人醫(yī)院血液透析中心進行血液透析患者60例，按隨機數(shù)字表，將患者分成茶多酚組與常規(guī)組；另選本院體檢健康的老年志愿者30例為正常對照組。常規(guī)組15例男性，15例女性，平均年齡（66.7±7.2）歲；茶多酚組15例男性，15例女性，平均年齡（65.4±6.4）歲；正常對照組，男15例，女性15例，平均年齡（65.8±7.4）歲。組間性別、年齡無顯著性差異，本實驗由當?shù)貍惱韰f(xié)會批準，并全程跟蹤，所有患者均知情同意。納入標準：①曾進行3個月以上的持續(xù)性透析；②精神神經(jīng)無障礙，聽力正常，錐體束征呈陰性。排除標準：①伴各種程度的感染、肝炎、肝病以及腫瘤、自身免疫系統(tǒng)紊亂；②近20 d內(nèi)有抗炎藥、降血脂藥、維生素類藥；③神經(jīng)系統(tǒng)病變，如帕金森、癲癇等。2組患者給予透析方案具體如下：維持性碳酸氫鹽血液透析采用濃度為1.5mmol/L的鈣離子進行透析治療，透析液流速500mL/min，血流速250mL/min，3次/周，4 h/次，對于有高血壓病的患者，予以常規(guī)降壓治療，采用鈣離子通道拮抗劑或ACEI類降壓藥；患有貧血患者，予以常規(guī)補血補鐵治療，常采?。鸿F劑靜脈靜點。茶多酚組予以患者茶多酚片劑，0.9 g口服，3次/d；常規(guī)組則予以安慰劑2片口服，每天3次。

1.2 研究方法

1.2.1 標本收集：2組患者經(jīng)治療3個月后，晨取空腹靜脈血樣5mL，離心處理，取出血漿上清液，加入0.2%EDTA抗凝，-70℃保存。取靜脈血5mL，加入細胞分離液對單核細胞進行分離，核蛋白提取參照說明書，于-70℃冷凍保存。

1.2.2 檢測氧化應(yīng)激指標：MDA、SOD、AOPP；炎癥反應(yīng)指標：CRP、IL-6及NF-κB活性等。

1.2.3 檢測方法：對于MDA檢測采用硫代巴比妥酸反應(yīng)（TBA）法；SOD檢測采用化學(xué)比色法；CRP采用免疫比濁法本院化驗室測定。

AOPP采用紫外分光光度法：400μL PBS、20μL碘化鉀，及40μL冰醋酸混合物作為空白對照；以400μL氯胺T（0～100 μmol/L）、20μL碘化鉀及40μL冰醋酸混合物作為標準對照。400μL血漿PBS稀釋液（1：5）、20μL碘化鉀，及40μL冰醋酸混合物測340 nm吸光度（A）值，AOPP的濃度以氯胺T含量（μmol/L）表示。

NF-κB、IL-6的測定均采用酶聯(lián)免疫法（ELISA），試劑盒購自美國RD公司。NF-κB活性的測定：按試劑盒說明書提取細胞核蛋白，用BAC-100蛋白質(zhì)定量測定試劑盒測定蛋白濃度，取5μg核蛋白抽提物稀釋至20μL，滴于96孔板中（加NF-κB寡核苷酸雙鏈探針），在20℃中振蕩1 h，洗滌3次，再加入經(jīng)稀釋至濃度為1：1000的NF-κB p65單抗中，20℃下進行反應(yīng)，1 h后洗滌。洗滌后加入四甲基聯(lián)苯胺底物液進行顯色反應(yīng)，反應(yīng)時間為10min，后加終止液。于全自動酶標儀測取活性的相對值。IL-6測定與此類似。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 14.0統(tǒng)計軟件處理，正態(tài)計量數(shù)據(jù)用“±s”表示，正態(tài)資料組間比較采用t檢驗，以P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對照組、常規(guī)組及茶多酚組氧化應(yīng)激指標的比較 治療前，常規(guī)組及茶多酚組與對照組相比MDA、AOPP升高（P＜0.01），SOD下降（P＜0.01）；治療后，茶多酚組與常規(guī)組相比，MDA、AOPP下降（P＜0.01），SOD升高（P＜0.01，見表1）。

表1 茶多酚組與常規(guī)組氧化應(yīng)激指標的比較Tab.1 Comparison of Oxidative stress indices

2.2 對照組、常規(guī)組及茶多酚組微炎癥狀態(tài)的比較 治療后，常規(guī)組及茶多酚組與對照組相比，氧化指標均有所升高，存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.01）；茶多酚組與常規(guī)組相比，氧化指標均有所下降，存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.01，見表2）。

表2 對照組、常規(guī)組及茶多酚組微炎癥狀體的比較Tab.2 Comparison of Inflammatory factor

3 討論

微炎癥指的是由免疫機制調(diào)節(jié)異常而引起的體內(nèi)炎性蛋白、炎癥因子升高，導(dǎo)致出現(xiàn)非感染性炎癥的一種表現(xiàn)［1］。這種微炎癥狀態(tài)可造成終末期腎病患者動脈硬化及血管鈣化，導(dǎo)致營養(yǎng)不良，加重貧血，從而介導(dǎo)體內(nèi)產(chǎn)生級聯(lián)炎性反應(yīng)，導(dǎo)致多器官、多組織損傷，患者死亡率大大增加［6］。調(diào)節(jié)微炎癥水平能夠有效提高透析患者生存質(zhì)量。目前研究顯示CRF患者微炎癥狀態(tài)與氧化應(yīng)激反應(yīng)關(guān)系密切［1］。

氧化應(yīng)激是CRF患者心血管、神經(jīng)系統(tǒng)等并發(fā)癥的重要致病因素之一，是影響CRF患者預(yù)后的重要影響因素［7］。氧化應(yīng)激存在于各種腎臟疾病的始末，在腎臟疾病進展及其并發(fā)癥發(fā)病中的作用十分重要，隨著腎功能的減退逐漸加重。腎臟中很多細胞都可以產(chǎn)生氧自由基，包括腎小球系膜細胞、腎間質(zhì)細胞、腎小管上皮細胞等，都可以成為氧自由基的來源。血液中的補體系統(tǒng)被氧化因子活化，產(chǎn)生白介素-1、白介素-6以及TNF-α等免疫因子，而白細胞介素在慢性腎功能衰竭微炎癥狀態(tài)中以IL-6升高最為顯著［8］。Handelmandeng發(fā)現(xiàn)，CRF患者血漿中CRP水平和氧化應(yīng)激的替代標志物AOPP水平存在相關(guān)性；同樣和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物硫代巴比妥酸反應(yīng)底物水平呈正相關(guān)［9］。研究認為，氧化應(yīng)激是微炎癥狀態(tài)的重要機制之一，抗氧化藥物可以減輕CRF微炎癥狀態(tài)［1］。

茶多酚是茶葉中的主要活性成分，有很強的生物活性。它是30多種酚類化合物的復(fù)合體，其中兒茶素類占茶多酚總量的60%～90%。茶多酚的酚羥基是天然的供氫體，體內(nèi)體外均具有很強的抗氧化和清除自由基的作用［4］。研究顯示茶多酚可以預(yù)防和治療多種腎病：可以減輕慢性腎炎的臨床癥狀，可以通過對TNF-α的抑制延緩糖尿病腎病進展，可以增加血肌酐清除率，可以抑制慢性腎功能不全的脂質(zhì)過氧化等［10］；但未見報道茶多酚是否能改善維持血液透析患者的微炎癥狀態(tài)及氧化應(yīng)激反應(yīng)。本研究通過給予老年維持性透析患者口服茶多酚進行了茶多酚對氧化應(yīng)激及微炎癥狀態(tài)影響的研究。結(jié)果顯示，茶多酚降低了MDA和AOPP而升高了SOD活性，使茶多酚組CRP及IL-6等下降，改善了維持性血液透析老年患者的微炎癥狀態(tài)。另外文獻報道茶多酚可以抑制核因子-κB，而核因子-κB是一種氧化應(yīng)激敏感的轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)控制免疫及促炎癥反應(yīng)分子的基因的表達，在炎癥反應(yīng)中起中樞作用，抑制核因子-κB可以阻止炎癥的病理反應(yīng)［11］。茶多酚抗氧化并改善微炎癥狀態(tài)，可能與其拮抗了單核細胞及中性粒細胞的激活，減弱了補體系統(tǒng)的活化，減少了炎性細胞因子的產(chǎn)生有關(guān)。

目前抗氧化劑或改善微炎癥狀態(tài)的藥物，作用較單一，而要使其它各方面也都得到改善，可能需要多種藥物協(xié)同作用；而茶多酚同時具有的效能，在抗氧化及改善微炎癥狀態(tài)的同時可以獲得諸多收益，在維持性血液透析老年患者的治療中值得推廣。

［1］ Morena M，Delbosc S，Dupuy AM，et al.Overproduction of reactive oxygen species in end-stage renal disease patients：a potential component of hemodialysis-associated inflammation［J］.Hemodial Int，2005，9(1）：37-46.

［2］樊瑞芬，王銀龍，高麗萍，等.抗氧化治療對維持性血液透析患者微炎癥及氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，35(18）：3648-49.

［3］焦占峰，白光輝.維持性血液透析患者微炎癥狀態(tài)研究的意義及進展［J］.中國血液凈化，2010，99(12）：675-677.

［4］楊敏.茶多酚治療慢性腎功能不全中抗自由基作用的研究［J］.中華腎臟病雜志，1994，10(5）：278-279.

［6］Owen WF，Lowrie EG.C-reactive protein as an outcome predictor for maintenance hemodialysis patients［J］.Kidney Int，1998，54(2）：627-36.

［7］Parfrey PS，F(xiàn)oley RN，et al.Outcome and risk factors for left ventricular disorders in chronic uraemia［J］.Nephrol Dial Transplant，1996，11(7）：1277-85.

［8］于敏，王嬌，史耀勛，等.慢性腎衰竭微炎癥狀態(tài)發(fā)生機制的研究進展［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2010，20(10）：1498-1500.

［9］Handelman GJ，Walter MF，Adhikarla R，etc.Elevated plasma F2-isoprostanes in patients on long-term hemodialysis［J］.Kidney Int，2001，59(5）：1960-1966.

［10］胡秀芳，張高亮，楊賢強.茶多酚對腎病的作用及其機理［J］.茶葉科學(xué)，2002，22(2）：98-104.

［11］Yang F，Oz Hs，Barve S，et al.The green tea polyphenol(-）-epigallocatechin-3-gallate blocks nuclear factor-kappa B activation by inhibiting Ikappa B kinase activity in the intestinal epithelial cell line IEC-6［J］.Mol Pharmacol，2001，60(3）：528-533.

（編校：譚玲，秦曉英）

Effect of tea polyphenols on oxidative stress and m icro inflammatory condition in maintenance hemodialysis patients

LIU Xue-yi1，CHAIHong2，DU Zhan-cai3，ZHANG Jing4，YUAN Li5

（1.Department of Renal，Tangshan Workers Hospital，Tangshan 063000，China；2.Department of Endocrine，Tangshan Workers Hospital，Tangshan 063000，China；3.Department of Supply Room，Tangshan Workers Hospital，Tangshan 063000，China；4.Department of Renal，Tangshan Workers hospital，Tangshan 063000，China；5.Department of Medicine-Neurology，Tangshan Workers Hospital，Tangshan 063000，China）

ObjectiveTo investigate the influence and the possiblemechanism of tea polyphenols on maintenance hemodialysis（MHD）patients’oxidative stress and micro inflammatory condition.Methods60 cases of MHD patients were random ly divided into routine group and tea polyphenols group.30 healthy subjectswere chosen as normal control group.After 3 months，MDA，AOPP，SOD，TNF-α，CRP，IL-6 and NF-κB of routine group and tea polyphenols group were detected.ResultsBefore treatment，compared with normal control group，MDA and AOPP of routine group and tea polyphenols group increased（P＜0.01），SOD decreased（P＜0.01）；after treatment，compared with routine group，MDA and AOPP of tea polyphenols group decreased（P＜0.01），SOD increased（P＜0.01）.After treatment，compared with normal control group，NF-κB，TNF-α，CRP，IL-6 and oxidative index of routine group and tea polyphenols group increased，and the differencewas statistically significant（P＜0.01）；compared with routine group，oxidative index of tea polyphenols group decreased，and the difference was statistically significant（P＜0.01）.ConclusionTea polyphenol can improve MHD patients’oxidative stress and micro inflammatory state.

hemodialysis；tea polyphenol；micro inflammation；oxidative stress；nuclear factor-κB

R692.3

A

1005-1678(2014）07-0087-03

河北省唐山市科技攻關(guān)項目（121302022a）

劉學(xué)義，男，本科，主治醫(yī)師，研究方向：慢性腎功能衰竭治療，E-mail：drlxy1973@126.com。