TIMP-1HAPCⅢ在糖尿病腎病血瘀證中的表達(dá)

韓冉++++++路遙

[摘要] 目的 分析纖維化指標(biāo)在糖尿病腎?。―N）血瘀證與非血瘀證間表達(dá)水平的差異，驗(yàn)證“血瘀證是導(dǎo)致DN腎纖維化的主要病機(jī)”的中醫(yī)理論。 方法 依照中醫(yī)辨證將本院60例以DN患者分為血瘀證組（A組）與非血瘀證組（B組），另設(shè)健康對照組（C組），檢測各組的纖維化相關(guān)指標(biāo)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果 A、B組的血清Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、透明質(zhì)酸（HA）、人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TIMP-1）含量與健康對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），A、B組的TIMP-1含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。 結(jié)論 DN血瘀證組的纖維化程度重，與中醫(yī)理論認(rèn)為“血瘀是導(dǎo)致DN腎纖維化的主要病機(jī)”相符。

[關(guān)鍵詞] 糖尿病腎??；腎纖維化；血瘀證；人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1

[中圖分類號] R587.2[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1674-4721（2014）06（c）-0092-03

Expression of TIMP-1、HA、PCⅢ in blood stasis syndrome of diabetic nephropathy

HAN Ran LU Yao▲

Department of Laboratory,Oriental Hospital of Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100078,China

[Abstract] Objective To analyze the difference of expression level of fibrosis indexes between blood stasis syndrome and none-blood stasis syndrome in diabetic nephropathy (DN) to verify the theory of traditional Chinese medicine (TCM) that "blood stasis is the main pathogenesis of renal fibrosis in DN ". Methods According to syndrome differentiation of TCM,60 patients with DN in our hospital were divided into the blood stasis syndrome group (the group A) and the none-blood stasis syndrome group (the group B),another healthy control group (the group C) was set up,fibrosis related indicators of all samples were tested,and the data was analyzed. Results All DN patients′ serum HA,PCⅢ,TIMP-1 were higher than those the healthy control group (P<0.01),The difference of TIMP-1 level between between the blood stasis syndrome and the blood stasis syndrome group was significant (P<0.01). Conclusion The degree of fibrosis was heavy inblood stasis syndrome group of DN,it matches with the theory that "blood stasis is the main pathogenesis of renal fibrosis in DN" .

[Key words] Diabetic nephropathy;Renal fibrosis;Blood stasis syndrome;Tissue inhibitors to metalloproteinase-1

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病最主要的并發(fā)癥之一，是糖尿病的主要致死原因，統(tǒng)計(jì)表明DN在終末期腎衰竭患者中占首位，約為36%[1]。DN的主要病理基礎(chǔ)為腎臟的纖維化改變，腎纖維化包括腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化，幾乎是所有腎臟疾病進(jìn)展至終末期腎衰竭的共同通路，有研究證明[2]，DN的纖維化在各種慢性腎臟疾病中最為顯著。

纖維化屬于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的病理學(xué)概念，中醫(yī)理論將其歸納為“絡(luò)脈癥瘕”“血瘀”“積聚”，歸屬于中醫(yī)“絡(luò)病”的范疇，更有學(xué)者提出血瘀證貫穿DN始末的理論[3]。近年對于DN證型的研究表明，血瘀證在DN各期的出現(xiàn)率均為最高[4]，因此許多學(xué)者認(rèn)為，血瘀是導(dǎo)致器官纖維化的重要病因病機(jī)[5-7]。

血清學(xué)纖維化指標(biāo)已廣泛運(yùn)用于肝纖維化的診斷，運(yùn)用其診斷腎臟的纖維化從取材和價格等方面考量優(yōu)于腎組織活檢，且亦可用于早期診斷，因此也被臨床應(yīng)用于腎纖維化的診斷。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2008年8月~2009年3月于本院就診的60例DN患者依照中醫(yī)辨證為血瘀證組（A組）與非血瘀證組（B組），每組各30例，并將來自本院體檢中心的健康人群30例設(shè)為健康對照組。血瘀證組（A組）：男17例，女13例，年齡30～70 歲，平均（56.13±8.25）歲，中醫(yī)辨證為血瘀證。非血瘀證組（B組）：男16例，女14例，年齡30～70歲，平均（53.23±8.41）歲，中醫(yī)辨證為非血瘀證。健康對照組均為健康體檢者，男15例，女15例，年齡25～50 歲，平均40.6歲，均無肝、腎、心、肺病史，且血、尿常規(guī)檢查和肝腎功能、血脂、肝炎病毒血清標(biāo)志物等檢查正常。

1.2 研究方法

1.2.1診斷及納入標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行DN的診斷：有明確糖尿病病史，病程常在6年以上；6個月內(nèi)兩次或兩次以上尿微量白蛋白>30 mg/24 h；臨床可診斷的Ⅲ、Ⅳ期患者。排除自身免疫性疾病者其他原因引起的腎病或尿微量白蛋白上升患者；DN已發(fā)展至腎衰竭期的患者；肝功能損害、慢性呼吸系統(tǒng)疾病、妊娠及哺乳期婦女；無法或不愿合作者。

血瘀證證候診斷參照《糖尿病（消渴?。┲嗅t(yī)診治薈萃》[8]制訂：定位刺痛，夜間加重；口唇舌暗或紫暗、瘀斑、舌下脈怒張；肌膚甲錯等，有其中一項(xiàng)可診斷。

1.2.2儀器與方法

1.2.2.1樣本的采集與預(yù)處理空腹采集靜脈血，將樣本離心后分離血清，待測血清于-40℃冰凍保存。

1.2.2.2檢測程序使用Olympus AU640全自動生化分析儀、Olympus原廠生化試劑進(jìn)行肝、腎功能檢測；使用美國TPI公司生產(chǎn)的血清透明質(zhì)酸（HA）、Ⅲ型前膠原（PCⅢ）ELISA試劑盒檢測HA、PCⅢ；使用美國RD公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒檢測人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TIMP-1），所有操作按照試劑說明書進(jìn)行。

endprint

1.3統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)使用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料兩組間比較采用成組設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分率（%）表示，采用確切概率法或χ2檢驗(yàn)，所有的統(tǒng)計(jì)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組血清Cr、BUN含量的比較

A、B組的Cr、BUN與健康對照組比較，明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；A、B組的Cr、BUN比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

表1 3組血清Cr、BUN含量的比較（x±s）

與健康對照組比較，*P<0.01；與B組比較，#P>0.05

2.2 3組血清HA、PCⅢ、TIMP-1含量的比較

A、B組的HA、PCⅢ、TIMP-1含量均高于健康對照組（P<0.01），A、B組的HA、PCⅢ含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而A、B組的TIMP-1比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表2）。

表2 3組血清HA、PCⅢ、TIMP-1含量的比較（x±s）

與健康對照組比較，*P<0.01；與B組比較，#P<0.01

3 討論

DN是終末期腎衰竭的主要原因之一，其主要病理特征為腎纖維化，腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化是DN的主要病理表現(xiàn)。腎小球硬化表現(xiàn)為腎小球基底膜增厚和細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）增多，以ECM的顯著增生為重要標(biāo)志。腎小管間質(zhì)纖維化的主要病理改變?yōu)槌衫w維細(xì)胞及ECM增生，最終形成腎纖維化?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是一類分解細(xì)胞外基質(zhì)組分的鋅蛋白酶，在有機(jī)體生長發(fā)育中的細(xì)胞外基質(zhì)逆轉(zhuǎn)與重塑以及疾病的病理損害中起極為重要的作用。所有MMPs都受到天然抑制劑金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of matrix metalloproteinases，TIMPs）所抑制，TIMPs特異性抑制MMPs的活性。TIMPs與MMPs是調(diào)控ECM降解的重要酶系，正常情況下，MMPs和TIMPs相互作用，使ECM處于動態(tài)平衡中，MMPs活性增強(qiáng)或TIMPs活性降低都會破壞ECM的動態(tài)平衡，其中MMP-9是Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的主要降解酶系，在腎纖維化發(fā)生過程中有重要作用，參與了腎纖維化的產(chǎn)生。TIMP-1是體內(nèi)MMP-9較特異的抑制物，TIMP-1通過抑制MMP-9的活性，達(dá)到降低其對膠原分解的作用，促進(jìn)腎纖維化的形成[9]。有研究表明，多種腎臟疾病患者血清的TIMP-1濃度升高[10]，故此指標(biāo)在腎纖維化的診斷中具有重要價值。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為腎纖維化可歸入“癥瘕”“積聚”病變，屬中醫(yī)“絡(luò)病”范疇。中醫(yī)學(xué)中有“久病必瘀”“病久瘀甚”的傳統(tǒng)理論，臟器纖維化的臨床癥狀也與中醫(yī)學(xué)的血瘀證癥狀相似，故將其歸屬于“血瘀”范疇，認(rèn)為血瘀亦可能是導(dǎo)致器官纖維化的重要病機(jī)。已有臨床和實(shí)驗(yàn)研究顯示，從“腎絡(luò)瘀阻”論治DN取得了較好的療效，形成了獨(dú)特的理論體系[11]。近年來不少研究顯示，活血化瘀藥物使DN實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚑IMP-1等實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的表達(dá)水平明顯降低，說明活血化瘀藥物對DN纖維化的治療有效[12-13]。

本研究結(jié)果顯示，血瘀證與非血瘀證的血清PCⅢ、HA含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明在非血瘀證DN患者中也出現(xiàn)了相同程度的細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。本組結(jié)果與張史昭等[14]的結(jié)果略有不同，其結(jié)果顯示，血瘀與非血瘀證的層粘連蛋白（LN）、Ⅳ-C差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩者研究結(jié)果間的差異可能與血瘀證的診斷標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)。另外，在病例選擇上兩者所選擇的病例差異較大，張史昭等選擇了腎衰竭期的患者，而本研究選擇了臨床可診斷的早期DN病例。基于中醫(yī)“病久瘀甚”的理論，本研究所選病例血瘀的程度可能較輕，因此在血瘀證與非血瘀證兩組間的HA、PCⅢ含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），兩組的TIMP-1含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），血瘀證組的TIMP-1表達(dá)水平明顯增高，且臨床上排除了肝、肺、胰等臟器的纖維化病變，因此，血瘀證組患者的血清TIMP-1 濃度升高由腎臟病變所致。血瘀證組患者的血清TIMP-1 濃度升高，提示血瘀證組的患者可能預(yù)后不良，病變進(jìn)程快，與中醫(yī)認(rèn)為“血瘀證是導(dǎo)致器官纖維化的重要病因病機(jī)”這一理論相符，為此理論提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究中的健康對照組與DN患者間的血清纖維化指標(biāo)含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示血清的纖維化指標(biāo)可以作為輔助診斷指標(biāo)用于早期DN患者。

綜上所述，血清纖維化指標(biāo)可以反映DN患者腎臟纖維化的程度；DN患者纖維化指標(biāo)——TIMP-1在血瘀證組的高表達(dá)，驗(yàn)證了血瘀可能是腎纖維化的主要病機(jī)，提示血瘀的程度對腎纖維化的程度有一定的代表性；而臨床辨證為無血瘀證的非血瘀證組，纖維化指標(biāo)血清HA、PCⅢ含量升高，與中醫(yī)理論“血瘀貫穿DN的始末”相符。本組研究在排除了肝、肺、胰等臟器纖維化病變的前提下，對早期DN患者血清TIMP-1的研究亦表明，臨床可以使用血清TIMP-1作為DN患者腎組織纖維化的輔助診斷指標(biāo)，適用于腎活檢禁忌證的患者。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Klahr S，Morrissey J，Hruska K，et al.New approaches to delay the progression of chronic renal failure[J].Kidney Int Suppl，2002，（80）：23-26.

[2]梁繼鐵.慢性腎臟疾病血清PCⅢ、HA、LN 檢測及其臨床意義[J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，27（4）：502-503.

[3]呂仁和.糖尿病及其并發(fā)癥中西醫(yī)診治學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997.

[4]朱勐，吳神，王怡.糖尿病腎病中醫(yī)證型及其相關(guān)因素的多元分析[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，21（1）：18-20.

[5]牛建昭，姜術(shù)霞.多臟器纖維化的絡(luò)病機(jī)制探討[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，27（6）：4-6.

[6]趙海，宴子友.淺議腎間質(zhì)纖維化的病因病機(jī)[J].山西中醫(yī)，2006，22（2）：62-63.

[7]戴芹，王怡.中醫(yī)對腎纖維化的研究概況[J].江蘇中醫(yī)藥，2005，26（11）：77-78.

[8]晏子友，皮持衡.中藥抗腎纖維化研究概況[J].江西中醫(yī)藥，2000，31（4）：55.

[9]Yoshiji H，Kuriyamas S，Miyamoto Y，et al.Tissue inhibitor of metal loproteinases-1 promotes liver fibrosis development in a transgenic mouse model[J].Hepatology，2000，32（6）：1248-1254.

[10]Akiyama K，Shikata K，Sugimoto H，et al.Changes in serum concentrations of matrix metalloproteinases,tissue inhibitor of metalloproteinases and type Ⅳ collagen in patients with various types of glomerulonephritis[J].Res Commun Mol Pathol Pharmacol，1997，95（2）：115-128.

[11]許成群，王元，孫永亮.糖尿病腎病“腎絡(luò)瘀阻”理論及其應(yīng)用[J].中醫(yī)研究，2013，26（4）：3-6.

[12]余紅，石明雋，肖瑛，等.丹芪合劑對糖尿病腎病大鼠腎臟組織TIMP-1，TIMP-2表達(dá)的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2012，23（3）：667-669.

[13]胡波，李鋒，王燕午，等.丹參對糖尿病腎病大鼠MMP-2,TIMP-1,TGF-β1和Ⅳ-C表達(dá)的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19（12）：3020-3022.

[14]張史昭，潘達(dá)亮，于偉，等.腎絡(luò)瘀阻與腎纖維化關(guān)系的臨床研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2003，4（8）：458-459.

（收稿日期：2014-04-14本文編輯：許俊琴）

endprint

1.3統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)使用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料兩組間比較采用成組設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分率（%）表示，采用確切概率法或χ2檢驗(yàn)，所有的統(tǒng)計(jì)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組血清Cr、BUN含量的比較

A、B組的Cr、BUN與健康對照組比較，明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；A、B組的Cr、BUN比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

表1 3組血清Cr、BUN含量的比較（x±s）

與健康對照組比較，*P<0.01；與B組比較，#P>0.05

2.2 3組血清HA、PCⅢ、TIMP-1含量的比較

A、B組的HA、PCⅢ、TIMP-1含量均高于健康對照組（P<0.01），A、B組的HA、PCⅢ含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而A、B組的TIMP-1比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表2）。

表2 3組血清HA、PCⅢ、TIMP-1含量的比較（x±s）

與健康對照組比較，*P<0.01；與B組比較，#P<0.01

3 討論

DN是終末期腎衰竭的主要原因之一，其主要病理特征為腎纖維化，腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化是DN的主要病理表現(xiàn)。腎小球硬化表現(xiàn)為腎小球基底膜增厚和細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）增多，以ECM的顯著增生為重要標(biāo)志。腎小管間質(zhì)纖維化的主要病理改變?yōu)槌衫w維細(xì)胞及ECM增生，最終形成腎纖維化。基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是一類分解細(xì)胞外基質(zhì)組分的鋅蛋白酶，在有機(jī)體生長發(fā)育中的細(xì)胞外基質(zhì)逆轉(zhuǎn)與重塑以及疾病的病理損害中起極為重要的作用。所有MMPs都受到天然抑制劑金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of matrix metalloproteinases，TIMPs）所抑制，TIMPs特異性抑制MMPs的活性。TIMPs與MMPs是調(diào)控ECM降解的重要酶系，正常情況下，MMPs和TIMPs相互作用，使ECM處于動態(tài)平衡中，MMPs活性增強(qiáng)或TIMPs活性降低都會破壞ECM的動態(tài)平衡，其中MMP-9是Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的主要降解酶系，在腎纖維化發(fā)生過程中有重要作用，參與了腎纖維化的產(chǎn)生。TIMP-1是體內(nèi)MMP-9較特異的抑制物，TIMP-1通過抑制MMP-9的活性，達(dá)到降低其對膠原分解的作用，促進(jìn)腎纖維化的形成[9]。有研究表明，多種腎臟疾病患者血清的TIMP-1濃度升高[10]，故此指標(biāo)在腎纖維化的診斷中具有重要價值。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為腎纖維化可歸入“癥瘕”“積聚”病變，屬中醫(yī)“絡(luò)病”范疇。中醫(yī)學(xué)中有“久病必瘀”“病久瘀甚”的傳統(tǒng)理論，臟器纖維化的臨床癥狀也與中醫(yī)學(xué)的血瘀證癥狀相似，故將其歸屬于“血瘀”范疇，認(rèn)為血瘀亦可能是導(dǎo)致器官纖維化的重要病機(jī)。已有臨床和實(shí)驗(yàn)研究顯示，從“腎絡(luò)瘀阻”論治DN取得了較好的療效，形成了獨(dú)特的理論體系[11]。近年來不少研究顯示，活血化瘀藥物使DN實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚑IMP-1等實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的表達(dá)水平明顯降低，說明活血化瘀藥物對DN纖維化的治療有效[12-13]。

本研究結(jié)果顯示，血瘀證與非血瘀證的血清PCⅢ、HA含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明在非血瘀證DN患者中也出現(xiàn)了相同程度的細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。本組結(jié)果與張史昭等[14]的結(jié)果略有不同，其結(jié)果顯示，血瘀與非血瘀證的層粘連蛋白（LN）、Ⅳ-C差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩者研究結(jié)果間的差異可能與血瘀證的診斷標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)。另外，在病例選擇上兩者所選擇的病例差異較大，張史昭等選擇了腎衰竭期的患者，而本研究選擇了臨床可診斷的早期DN病例?；谥嗅t(yī)“病久瘀甚”的理論，本研究所選病例血瘀的程度可能較輕，因此在血瘀證與非血瘀證兩組間的HA、PCⅢ含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），兩組的TIMP-1含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），血瘀證組的TIMP-1表達(dá)水平明顯增高，且臨床上排除了肝、肺、胰等臟器的纖維化病變，因此，血瘀證組患者的血清TIMP-1 濃度升高由腎臟病變所致。血瘀證組患者的血清TIMP-1 濃度升高，提示血瘀證組的患者可能預(yù)后不良，病變進(jìn)程快，與中醫(yī)認(rèn)為“血瘀證是導(dǎo)致器官纖維化的重要病因病機(jī)”這一理論相符，為此理論提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究中的健康對照組與DN患者間的血清纖維化指標(biāo)含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示血清的纖維化指標(biāo)可以作為輔助診斷指標(biāo)用于早期DN患者。

綜上所述，血清纖維化指標(biāo)可以反映DN患者腎臟纖維化的程度；DN患者纖維化指標(biāo)——TIMP-1在血瘀證組的高表達(dá)，驗(yàn)證了血瘀可能是腎纖維化的主要病機(jī)，提示血瘀的程度對腎纖維化的程度有一定的代表性；而臨床辨證為無血瘀證的非血瘀證組，纖維化指標(biāo)血清HA、PCⅢ含量升高，與中醫(yī)理論“血瘀貫穿DN的始末”相符。本組研究在排除了肝、肺、胰等臟器纖維化病變的前提下，對早期DN患者血清TIMP-1的研究亦表明，臨床可以使用血清TIMP-1作為DN患者腎組織纖維化的輔助診斷指標(biāo)，適用于腎活檢禁忌證的患者。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Klahr S，Morrissey J，Hruska K，et al.New approaches to delay the progression of chronic renal failure[J].Kidney Int Suppl，2002，（80）：23-26.

[2]梁繼鐵.慢性腎臟疾病血清PCⅢ、HA、LN 檢測及其臨床意義[J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，27（4）：502-503.

[3]呂仁和.糖尿病及其并發(fā)癥中西醫(yī)診治學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997.

[4]朱勐，吳神，王怡.糖尿病腎病中醫(yī)證型及其相關(guān)因素的多元分析[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，21（1）：18-20.

[5]牛建昭，姜術(shù)霞.多臟器纖維化的絡(luò)病機(jī)制探討[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，27（6）：4-6.

[6]趙海，宴子友.淺議腎間質(zhì)纖維化的病因病機(jī)[J].山西中醫(yī)，2006，22（2）：62-63.

[7]戴芹，王怡.中醫(yī)對腎纖維化的研究概況[J].江蘇中醫(yī)藥，2005，26（11）：77-78.

[8]晏子友，皮持衡.中藥抗腎纖維化研究概況[J].江西中醫(yī)藥，2000，31（4）：55.

[9]Yoshiji H，Kuriyamas S，Miyamoto Y，et al.Tissue inhibitor of metal loproteinases-1 promotes liver fibrosis development in a transgenic mouse model[J].Hepatology，2000，32（6）：1248-1254.

[10]Akiyama K，Shikata K，Sugimoto H，et al.Changes in serum concentrations of matrix metalloproteinases,tissue inhibitor of metalloproteinases and type Ⅳ collagen in patients with various types of glomerulonephritis[J].Res Commun Mol Pathol Pharmacol，1997，95（2）：115-128.

[11]許成群，王元，孫永亮.糖尿病腎病“腎絡(luò)瘀阻”理論及其應(yīng)用[J].中醫(yī)研究，2013，26（4）：3-6.

[12]余紅，石明雋，肖瑛，等.丹芪合劑對糖尿病腎病大鼠腎臟組織TIMP-1，TIMP-2表達(dá)的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2012，23（3）：667-669.

[13]胡波，李鋒，王燕午，等.丹參對糖尿病腎病大鼠MMP-2,TIMP-1,TGF-β1和Ⅳ-C表達(dá)的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19（12）：3020-3022.

[14]張史昭，潘達(dá)亮，于偉，等.腎絡(luò)瘀阻與腎纖維化關(guān)系的臨床研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2003，4（8）：458-459.

（收稿日期：2014-04-14本文編輯：許俊琴）

endprint

1.3統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)使用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料兩組間比較采用成組設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分率（%）表示，采用確切概率法或χ2檢驗(yàn)，所有的統(tǒng)計(jì)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組血清Cr、BUN含量的比較

A、B組的Cr、BUN與健康對照組比較，明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；A、B組的Cr、BUN比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

表1 3組血清Cr、BUN含量的比較（x±s）

與健康對照組比較，*P<0.01；與B組比較，#P>0.05

2.2 3組血清HA、PCⅢ、TIMP-1含量的比較

A、B組的HA、PCⅢ、TIMP-1含量均高于健康對照組（P<0.01），A、B組的HA、PCⅢ含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而A、B組的TIMP-1比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表2）。

表2 3組血清HA、PCⅢ、TIMP-1含量的比較（x±s）

與健康對照組比較，*P<0.01；與B組比較，#P<0.01

3 討論

DN是終末期腎衰竭的主要原因之一，其主要病理特征為腎纖維化，腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化是DN的主要病理表現(xiàn)。腎小球硬化表現(xiàn)為腎小球基底膜增厚和細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）增多，以ECM的顯著增生為重要標(biāo)志。腎小管間質(zhì)纖維化的主要病理改變?yōu)槌衫w維細(xì)胞及ECM增生，最終形成腎纖維化?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是一類分解細(xì)胞外基質(zhì)組分的鋅蛋白酶，在有機(jī)體生長發(fā)育中的細(xì)胞外基質(zhì)逆轉(zhuǎn)與重塑以及疾病的病理損害中起極為重要的作用。所有MMPs都受到天然抑制劑金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of matrix metalloproteinases，TIMPs）所抑制，TIMPs特異性抑制MMPs的活性。TIMPs與MMPs是調(diào)控ECM降解的重要酶系，正常情況下，MMPs和TIMPs相互作用，使ECM處于動態(tài)平衡中，MMPs活性增強(qiáng)或TIMPs活性降低都會破壞ECM的動態(tài)平衡，其中MMP-9是Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的主要降解酶系，在腎纖維化發(fā)生過程中有重要作用，參與了腎纖維化的產(chǎn)生。TIMP-1是體內(nèi)MMP-9較特異的抑制物，TIMP-1通過抑制MMP-9的活性，達(dá)到降低其對膠原分解的作用，促進(jìn)腎纖維化的形成[9]。有研究表明，多種腎臟疾病患者血清的TIMP-1濃度升高[10]，故此指標(biāo)在腎纖維化的診斷中具有重要價值。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為腎纖維化可歸入“癥瘕”“積聚”病變，屬中醫(yī)“絡(luò)病”范疇。中醫(yī)學(xué)中有“久病必瘀”“病久瘀甚”的傳統(tǒng)理論，臟器纖維化的臨床癥狀也與中醫(yī)學(xué)的血瘀證癥狀相似，故將其歸屬于“血瘀”范疇，認(rèn)為血瘀亦可能是導(dǎo)致器官纖維化的重要病機(jī)。已有臨床和實(shí)驗(yàn)研究顯示，從“腎絡(luò)瘀阻”論治DN取得了較好的療效，形成了獨(dú)特的理論體系[11]。近年來不少研究顯示，活血化瘀藥物使DN實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚑IMP-1等實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的表達(dá)水平明顯降低，說明活血化瘀藥物對DN纖維化的治療有效[12-13]。

本研究結(jié)果顯示，血瘀證與非血瘀證的血清PCⅢ、HA含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明在非血瘀證DN患者中也出現(xiàn)了相同程度的細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。本組結(jié)果與張史昭等[14]的結(jié)果略有不同，其結(jié)果顯示，血瘀與非血瘀證的層粘連蛋白（LN）、Ⅳ-C差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩者研究結(jié)果間的差異可能與血瘀證的診斷標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)。另外，在病例選擇上兩者所選擇的病例差異較大，張史昭等選擇了腎衰竭期的患者，而本研究選擇了臨床可診斷的早期DN病例?；谥嗅t(yī)“病久瘀甚”的理論，本研究所選病例血瘀的程度可能較輕，因此在血瘀證與非血瘀證兩組間的HA、PCⅢ含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），兩組的TIMP-1含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），血瘀證組的TIMP-1表達(dá)水平明顯增高，且臨床上排除了肝、肺、胰等臟器的纖維化病變，因此，血瘀證組患者的血清TIMP-1 濃度升高由腎臟病變所致。血瘀證組患者的血清TIMP-1 濃度升高，提示血瘀證組的患者可能預(yù)后不良，病變進(jìn)程快，與中醫(yī)認(rèn)為“血瘀證是導(dǎo)致器官纖維化的重要病因病機(jī)”這一理論相符，為此理論提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究中的健康對照組與DN患者間的血清纖維化指標(biāo)含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示血清的纖維化指標(biāo)可以作為輔助診斷指標(biāo)用于早期DN患者。

綜上所述，血清纖維化指標(biāo)可以反映DN患者腎臟纖維化的程度；DN患者纖維化指標(biāo)——TIMP-1在血瘀證組的高表達(dá)，驗(yàn)證了血瘀可能是腎纖維化的主要病機(jī)，提示血瘀的程度對腎纖維化的程度有一定的代表性；而臨床辨證為無血瘀證的非血瘀證組，纖維化指標(biāo)血清HA、PCⅢ含量升高，與中醫(yī)理論“血瘀貫穿DN的始末”相符。本組研究在排除了肝、肺、胰等臟器纖維化病變的前提下，對早期DN患者血清TIMP-1的研究亦表明，臨床可以使用血清TIMP-1作為DN患者腎組織纖維化的輔助診斷指標(biāo)，適用于腎活檢禁忌證的患者。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Klahr S，Morrissey J，Hruska K，et al.New approaches to delay the progression of chronic renal failure[J].Kidney Int Suppl，2002，（80）：23-26.

[2]梁繼鐵.慢性腎臟疾病血清PCⅢ、HA、LN 檢測及其臨床意義[J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，27（4）：502-503.

[3]呂仁和.糖尿病及其并發(fā)癥中西醫(yī)診治學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997.

[4]朱勐，吳神，王怡.糖尿病腎病中醫(yī)證型及其相關(guān)因素的多元分析[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，21（1）：18-20.

[5]牛建昭，姜術(shù)霞.多臟器纖維化的絡(luò)病機(jī)制探討[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，27（6）：4-6.

[6]趙海，宴子友.淺議腎間質(zhì)纖維化的病因病機(jī)[J].山西中醫(yī)，2006，22（2）：62-63.

[7]戴芹，王怡.中醫(yī)對腎纖維化的研究概況[J].江蘇中醫(yī)藥，2005，26（11）：77-78.

[8]晏子友，皮持衡.中藥抗腎纖維化研究概況[J].江西中醫(yī)藥，2000，31（4）：55.

[9]Yoshiji H，Kuriyamas S，Miyamoto Y，et al.Tissue inhibitor of metal loproteinases-1 promotes liver fibrosis development in a transgenic mouse model[J].Hepatology，2000，32（6）：1248-1254.

[10]Akiyama K，Shikata K，Sugimoto H，et al.Changes in serum concentrations of matrix metalloproteinases,tissue inhibitor of metalloproteinases and type Ⅳ collagen in patients with various types of glomerulonephritis[J].Res Commun Mol Pathol Pharmacol，1997，95（2）：115-128.

[11]許成群，王元，孫永亮.糖尿病腎病“腎絡(luò)瘀阻”理論及其應(yīng)用[J].中醫(yī)研究，2013，26（4）：3-6.

[12]余紅，石明雋，肖瑛，等.丹芪合劑對糖尿病腎病大鼠腎臟組織TIMP-1，TIMP-2表達(dá)的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2012，23（3）：667-669.

[13]胡波，李鋒，王燕午，等.丹參對糖尿病腎病大鼠MMP-2,TIMP-1,TGF-β1和Ⅳ-C表達(dá)的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19（12）：3020-3022.

[14]張史昭，潘達(dá)亮，于偉，等.腎絡(luò)瘀阻與腎纖維化關(guān)系的臨床研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2003，4（8）：458-459.

（收稿日期：2014-04-14本文編輯：許俊琴）

endprint