RECK與葡萄胎惡變的相關(guān)性分析

黃 佳 潘 玫

葡萄胎是種良性疾病，但10%～20%可以發(fā)生惡變，成為侵蝕性葡萄胎或絨癌[1]。雖然妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤對化療敏感，治療效果較好，但現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)耐藥以及復發(fā)的患者治療效果較差，這也是現(xiàn)今治療妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤的難點。RECK(reversion-inducing cysteine rich protein with Kazal motifs,RECK)，即伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆轉(zhuǎn)誘導蛋白，被認為是新發(fā)現(xiàn)的1種抑癌基因，廣泛存在于正常組織中，而在腫瘤組織中的表達低。我們通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測RECK mRNA的表達情況，探討RECK在葡萄胎惡變中所起的作用，以期望找到葡萄胎惡變的敏感標記物。

1 資料與方法

1.1 標本來源

標本來自江西省婦幼保健院2003年1月-2008年1月因葡萄胎住院首次清宮標本48例，患者年齡20～43歲，其中通過隨診過程中確診為惡性葡萄胎24例、未惡變葡萄胎24例。收集同期在本院門診行人工流產(chǎn)術(shù)的健康婦女早孕絨毛組織標本20例，年齡20～40歲。

1.2 實驗步聚

惡變的葡萄胎組織，未惡變的葡萄胎組織及正常早孕絨毛組織均在液氮中保存。取0.5 g 組織，應用TAKARA 公司的RT-PCR 試劑盒。25 μl 體系：H2O 16.5 μl；10× buffer 2.5 μl；MgCl23 μl；dNTP 0.5 μl；引物(+) 0.5 μl；引物(-) 0.5 μl；Taq 酶 0.5 μl；cDNA 1 μl。反應條件：94 ℃,30 s;57 ℃,30 s;72 ℃,30 s。共30個循環(huán)。引物設(shè)計見參考文獻[1]及國際互聯(lián)網(wǎng)cDNA 文庫。RECK 基因(477 bp)： 上游引物：5'-CCTCAGTGAGCACAGTTCAGA-3'，下游引物：5'-GCAGCACACACACTGCTGTA-3'，管家基因GAPDH(346 bp)用于內(nèi)對照。2%瓊脂糖凝膠電泳后，采用生物圖像分析儀檢測密度。將目的基因的亮度值與同一標本的管家基因GAPDH 的亮度值作比，求出其相對表達量。比較惡變的葡萄胎組織，未惡變的葡萄組織及正常早孕絨毛組織目的基因相對表達量有無區(qū)別。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

RECK mRNA 在惡變葡萄胎組織中的表達水平(0.326±0.031)明顯低于未惡變葡萄胎組織中的表達水平(0.436±0.053)和正常早孕絨毛組織中的表達水平(0.453±0.025)(P<0.01)，而在未惡變葡萄胎組織和正常絨毛組織中RCEK mRNA的表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討論

在正常妊娠早期，滋養(yǎng)細胞侵襲母體的特征與惡性腫瘤細胞非常類似，但有一個自限性。而變成腫瘤的滋養(yǎng)細胞卻在母體內(nèi)不斷造成破壞,甚至導致母體死亡。研究表明,RECK的抑癌作用主要是通過抑制腫瘤血管生成，并且與抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)家族密切相關(guān)[2]。RECK在早孕胎盤的表達最低，足月妊娠時表達最高，這與妊娠過程中滋養(yǎng)細胞侵蝕能力正好相反，說明RECK可能起了抑制滋養(yǎng)細胞侵蝕能力的作用。此外還有研究表明RECK過表達,可明顯減少早孕絨毛外滋養(yǎng)細胞侵襲能力[3]。我們先前的研究也表明在葡萄胎中RECK與MMP的表達呈負相關(guān)[4]。但是僅依靠定性的方式只能提示差異，只能說明葡萄胎惡變的可能。因此本研究開始定量測定RECKmRNA的表達水平，發(fā)現(xiàn)在惡性葡萄胎組織中的表達水平明顯低于未惡變葡萄胎組織，與我們先前的研究相一致。所以我們推測在葡萄胎的惡變過程中，RECK表達減少起到了一定的作用。當然我們還需要更多的樣本數(shù)量以及更精確的定量方法，以便找出1個定量參考范圍應用于臨床診斷。

[1] 豐有吉，沈 鏗，馬 丁，等.婦產(chǎn)科學(供八年制及七年制臨床醫(yī)學等專業(yè)用)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社,2005：351-355.

[2] 郭君紅,鄒 麗.調(diào)控RECK 基因表達對早孕絨毛外滋養(yǎng)細胞MMP-2 活化及細胞侵襲力的影響〔J〕.華中科技大學學報(醫(yī)學版),2007,36(4):495-499.

[3] Oh J,Takahashi R,Kondo S,et al.The membrane-anchored MMP inhibitor RECK is a key regulator of extracellular matrix integrity and angiogenesis〔J〕.Cell，2001,107(6):789-800.

[4] 黃 佳，潘 玫.RECK、MMP-2在葡萄胎組織中的表達及其意義〔J〕.南昌大學學報(醫(yī)學版)，2010,50(5)：20-22.