野生藍(lán)靛果忍冬組培苗繼代增殖和生根培養(yǎng)的研究

李金英，趙春莉，譚 莎，段加紅

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130118;2.吉林森林工業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司，吉林 長(zhǎng)春 130021)

藍(lán)靛果忍冬(LoniceraedulisTurcz.)為忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬屬(Lonicera)的落葉小灌木，是繼越橘(Vacciniumuliginosum)、黑穗醋栗(Ribesnigrum)、樹莓(Rubusspp.)等之后的又一新興小漿果樹種，在國(guó)際上享有“第三代水果”的美譽(yù)。藍(lán)靛果忍冬果實(shí)含有豐富的花青素、維生素、礦質(zhì)元素和氨基酸等物質(zhì)，具有抗疲勞、穩(wěn)定血壓、清熱解毒、改善肝臟的解毒功能和抗腫瘤、促進(jìn)身體良好發(fā)育等功效?？甚r食，亦可加工成果酒、飲料、果糕和果醬等產(chǎn)品，具有極高的營(yíng)養(yǎng)與保健價(jià)值。此外，藍(lán)靛果忍冬具有很高的觀賞價(jià)值，可作為觀賞樹種，經(jīng)濟(jì)價(jià)值很大[1～6]。

我國(guó)擁有豐富的野生藍(lán)靛果忍冬資源，但分布不均衡，生產(chǎn)力低下，而且人類對(duì)其進(jìn)行無(wú)計(jì)劃掠奪式的采摘，致使野生資源遭到嚴(yán)重破壞，自然修復(fù)能力降低，蘊(yùn)藏量和可采量銳減，供需矛盾日趨加劇。植物組織培養(yǎng)技術(shù)是野生植物資源種質(zhì)保存和擴(kuò)繁的重要途徑，因此，有必要建立優(yōu)化藍(lán)靛果忍冬繼代增殖和生根培養(yǎng)體系，為其快速繁殖提供一條有效途徑。我國(guó)對(duì)于藍(lán)靛果亞組植物的組織培養(yǎng)研究?jī)H有少數(shù)相關(guān)報(bào)道[7～9]，但研究得并不十分全面。作者以藍(lán)靛果忍冬組培苗為材料進(jìn)行繼代增殖和生根培養(yǎng)研究，旨在篩選出適宜的增殖和生根培養(yǎng)基配方，從而為藍(lán)靛果忍冬的種質(zhì)保存和規(guī)?；嘤齼?yōu)質(zhì)組培苗木提供借鑒，并為今后進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

以吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)園林生物技術(shù)組培室現(xiàn)有的野生藍(lán)靛果忍冬組培苗為試材。

1.2 試驗(yàn)方法

在培養(yǎng)基中添加瓊脂10 g·L-1、蔗糖30 g·L-1,高壓蒸汽滅菌前pH值調(diào)至5.8。培養(yǎng)室內(nèi)溫度均為(25±1)℃，光照周期12 h·d-1，光照強(qiáng)度2 000～3 000 Lx[10]。

1.2.1增殖培養(yǎng)

增殖培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，將初代培養(yǎng)誘導(dǎo)的無(wú)菌叢生芽苗接種于添加不同種類和質(zhì)量濃度激素的增殖培養(yǎng)基上，每種處理接種10瓶，每瓶接種2個(gè)無(wú)菌芽苗。30 d左右統(tǒng)計(jì)其增殖系數(shù)。增殖系數(shù)=增殖后的芽數(shù)/接種芽的數(shù)量。

1.2.2生根培養(yǎng)

將繼代增殖培養(yǎng)獲得的健壯無(wú)根苗切成2 cm左右的莖段，接種在不同處理組合的生根培養(yǎng)基上，每個(gè)處理10瓶，每瓶接種4株。20 d后觀測(cè)生根率。 生根率=(生根株數(shù)/接種株數(shù))×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同細(xì)胞分裂素對(duì)增殖的影響

不同激素組合對(duì)藍(lán)靛果忍冬組培苗繼代增殖培養(yǎng)的影響見表1。

表1 不同激素組合對(duì)藍(lán)靛果忍冬組培苗繼代增殖培養(yǎng)的影響

從表1中可以看出，不同細(xì)胞分裂素(ZT、KT、BA)對(duì)芽增殖的效果不同，但增殖系數(shù)均未達(dá)到3，且苗生長(zhǎng)較細(xì)弱。

在6個(gè)處理的培養(yǎng)基上，增殖系數(shù)最低為1.5，處理6添加IBA的增殖效果明顯高于處理4添加NAA的處理，其平均增殖系數(shù)達(dá)到了3.5。

2.2 IBA不同質(zhì)量濃度對(duì)增殖狀況的影響

不同質(zhì)量濃度IBA對(duì)藍(lán)靛果忍冬組培苗繼代增殖培養(yǎng)的影響見表2。

表2 不同質(zhì)量濃度IBA對(duì)藍(lán)靛果忍冬組培苗繼代增殖培養(yǎng)的影響

從表2中可以看出，增殖情況是處理②>③>①,而處理④、⑤苗生長(zhǎng)緩慢，增殖倍數(shù)較低。添加IBA0.2 mg·L-1的處理②中，組培苗長(zhǎng)勢(shì)最好(見圖1)，增殖系數(shù)最高，為5.5。

2.3 不同處理對(duì)藍(lán)靛果忍冬組培苗生根培養(yǎng)的影響

不同處理組合對(duì)藍(lán)靛果忍冬組培苗生根的影響見表3。

表3 不同處理組合對(duì)藍(lán)靛果忍冬組培苗生根的影響

圖1 添加不同質(zhì)量濃度IBA培養(yǎng)基的藍(lán)靛果忍冬組培苗生長(zhǎng)情況

圖2 藍(lán)靛果忍冬組培苗生根狀況

從表3中的1～3處理可以看出，在添加激素IBA0.5 mg·L-1的情況下，無(wú)機(jī)鹽質(zhì)量濃度降低有利于生根，但并不是質(zhì)量濃度越低越好。試管苗接種在MS培養(yǎng)基上，雖然生根率為85%，但是幼苗莖基部在初期培養(yǎng)中有膨大現(xiàn)象；接種在1/4MS培養(yǎng)基上，生根率最低，為75%；接種在1/2MS培養(yǎng)基上，莖基部不膨大，且生根率達(dá)到了90%，生根效果最好。在添加不同種類生長(zhǎng)素的處理中(處理4～6)，使用NAA時(shí)，試管苗基部與根連接處易生成大量的愈傷組織，并且根系脆弱、較易斷；使用IBA時(shí)，未見愈傷組織形成，并且生根率較高，可達(dá)100%，而且根粗壯，生根狀態(tài)良好；使用IAA時(shí)，雖然生根率較高，達(dá)90%，但苗長(zhǎng)勢(shì)較弱?？傮w而言，生根培養(yǎng)的適宜培養(yǎng)基為1/2MS+IBA1.0 mg·L-1,苗木生根及生長(zhǎng)狀況見圖2。

3 結(jié)論與討論

野生藍(lán)靛果忍冬組培苗繼代增殖和生根培養(yǎng)的研究結(jié)果表明：藍(lán)靛果忍冬適宜的繼代增殖培養(yǎng)基配方為MS+BA2.0 mg·L-1+IBA0.2 mg·L-1+GA30.3 mg·L-1，增殖系數(shù)為5.5?；九囵B(yǎng)基中大量元素含量降低能促進(jìn)不定根的產(chǎn)生，以1/2MS為最佳；生根培養(yǎng)過(guò)程中，IBA具有較好的根誘導(dǎo)作用，產(chǎn)生的根粗壯、數(shù)量多，適合煉苗移栽。最適宜的生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+IBA1.0 mg·L-1，生根率可達(dá)100%。

植物組織培養(yǎng)技術(shù)是傳統(tǒng)營(yíng)養(yǎng)繁殖方法的擴(kuò)展，具有繁殖速度快、繁殖系數(shù)大的優(yōu)點(diǎn)。越來(lái)越多的試驗(yàn)已經(jīng)證明Skoog等[11]提出的“激素平衡”理論的正確性，生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素對(duì)組培苗芽的誘導(dǎo)和生長(zhǎng)發(fā)育均起著重要作用。張啟昌等[3]對(duì)藍(lán)靛果忍冬繼代培養(yǎng)的研究結(jié)果顯示，IBA含量對(duì)其影響達(dá)到顯著水平，且最佳繼代增殖培養(yǎng)基為6-BA0.5 mg·L-1+IBA0.3 mg·L-1+KT1.5 mg·L-1。李桂君等[12～13]在俄羅斯耐寒藍(lán)靛果忍冬組培苗生根試驗(yàn)中，對(duì)MS、1/2MS培養(yǎng)基進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，1/2MS比MS培養(yǎng)基生根效果要好，這與本試驗(yàn)的研究結(jié)果一致。MS無(wú)機(jī)鹽含量比較高，可能對(duì)誘導(dǎo)生根產(chǎn)生抑制作用。在藍(lán)靛果增殖培養(yǎng)中，單一激素處理明顯不如不同激素組合處理的效果好?？梢?，在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基的選擇，營(yíng)養(yǎng)元素、激素的添加都需要綜合考慮，并需通過(guò)試驗(yàn)探索進(jìn)行選擇和添加。

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