五味子多糖對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖和凋亡的作用

1.廣東醫(yī)學(xué)院 腫瘤研究所 廣東 東莞 523808;

2.吉林市中心醫(yī)院 吉林 吉林 132001

五味子多糖對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖和凋亡的作用

姜恩平1王卓2

1.廣東醫(yī)學(xué)院 腫瘤研究所 廣東 東莞 523808;

2.吉林市中心醫(yī)院 吉林 吉林 132001

目的：探討五味子多糖(Schisandra polysaccharide，SCP)對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖和凋亡的影響及其機(jī)制。方法將人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞分為對(duì)照組，SCP高劑量組、SCP中劑量組和SCP低劑量組，MTT法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡，免疫組化法檢測(cè)凋亡蛋白表達(dá)。結(jié)果與對(duì)照組比較，SCP高、中、低劑量組均能不同程度抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，使凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)降低，Bax表達(dá)增加，具有劑量依賴(lài)關(guān)系。結(jié)論五味子多糖能夠抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞凋亡，這可能與其影響凋亡蛋白的表達(dá)相關(guān)。

五味子多糖；結(jié)腸癌；凋亡

結(jié)腸癌是臨床中常見(jiàn)的惡性腫瘤，近年來(lái)其發(fā)病率有上升的趨勢(shì)，治療主要依賴(lài)于手術(shù)結(jié)合放化療。但是對(duì)于晚期結(jié)腸癌，由于無(wú)法手術(shù)或是傳統(tǒng)的化療藥物的副作用及日益明顯的腫瘤細(xì)胞耐藥等問(wèn)題，使其總有效率仍不盡人意。中藥治療結(jié)腸癌以其毒性低,有一定療效而日益引起人們的重視。五味子多糖(Schisandra polysaccharide，SCP)是傳統(tǒng)中藥五味子主要成分之一，具有抗衰老，增強(qiáng)免疫力，保肝等作用。近年研究表明，五味子多糖還具有一定的抗腫瘤作用[1-4]。本文旨在研究五味子多糖對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖和凋亡的影響并探討其機(jī)制。

1.資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

使用北京醫(yī)用離心機(jī)廠生產(chǎn)的低速離心機(jī)，其型號(hào)為L(zhǎng)D4-2A型；型號(hào)為AvantiTM68 centrifuge，BECKMAN型的低溫高速離心機(jī)；GIS-2008天能凝膠成像分析儀，上海天能科技有限公司。

1.2 藥物和試劑

使用我院自制的五味子多糖(SCP)，通過(guò)苯酚-硫酸檢測(cè)法測(cè)定其純度為86.59%；Annexin V-FITC凋亡試劑盒購(gòu)于碧云天生物試劑公司；免疫組化試劑盒購(gòu)于南京建成生物有限公司； Bcl-2、Bax抗體購(gòu)于武漢博士德生物公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組與給藥

結(jié)腸癌SW480細(xì)胞由中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所提供。將SW480細(xì)胞分為對(duì)照組、SCP低劑量組(10mg/ml)、SCP中劑量組(20mg/ml)和SCP高劑量組(40mg/ml)等四組。將細(xì)胞接種于96孔板，每組細(xì)胞5副孔，置于CO2培養(yǎng)箱37℃環(huán)境中培養(yǎng)，接種24h后加入不同濃度的SCP后繼續(xù)培養(yǎng)24h，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2.結(jié)果

2.1 SCP對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖的影響

MTT結(jié)果顯示，與對(duì)照組增殖率100%比較，SCP高、中、低劑量組作用24h后腫瘤細(xì)胞增殖率分別43.5%、58.2%、71.3%(P<0.01，P<0.01，P<0.01，)，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異意義，并具有一定的劑量依賴(lài)關(guān)系，表明SCP能抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖。

2.2 SCP對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞凋亡的影響

流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡，Annexin V-FITC和PI雙染法檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組的凋亡率3.9%比較，SCP高、中、低劑量的凋亡率分別為27.6%、21.9%和17.2%(P<0.01，P<0.01，P<0.01，)，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異意義，并具有一定的劑量依賴(lài)關(guān)系，表明SCP能促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的凋亡，并具有一定的劑量依賴(lài)關(guān)系。

2.3 SCP對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)的影響

免疫組化方法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)情況。顯微鏡下觀察，胞漿中有棕黃色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞。細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率=單位面積內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。結(jié)果顯示，與對(duì)照組(31.4%和10.8%)比較，SCP高、中、低劑量組能不同程度的降低腫瘤細(xì)胞Bcl-2蛋白的表達(dá)(12.4%、17.6%、21.5%)，增加Bax蛋白的表達(dá)(32.0%、25.8%、19.1%)，并且具有一定的劑量依賴(lài)關(guān)系。

3.討論

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞程序性死亡的一個(gè)重要表現(xiàn)，整個(gè)凋亡過(guò)程涉及多種凋亡因子的調(diào)控，包括了激活因子、凋亡促進(jìn)基因和抑癌基因等。在凋亡過(guò)程中伴隨著細(xì)胞質(zhì)和染色質(zhì)濃縮、細(xì)胞核崩解、細(xì)胞膜皺縮，最后形成凋亡小體。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，許多腫瘤不僅存在細(xì)胞增殖，同時(shí)也存在細(xì)胞凋亡受阻，二者的不平衡狀態(tài)是導(dǎo)致腫瘤惡性生長(zhǎng)的基礎(chǔ)[5]。研究表明很多抗腫瘤藥如環(huán)磷酰胺、順鉑等都可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，因此有人認(rèn)為其抗腫瘤作用機(jī)制主要是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，一些腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性強(qiáng)于正常的細(xì)胞，所以在設(shè)計(jì)抗腫瘤藥物時(shí)可以考慮選擇能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥物。研究表明一些從中藥中提取的活性成分能有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。SCP是從傳統(tǒng)中藥五味子提取得來(lái)的大分子化合物，具有一定的抗腫瘤作用。本研究結(jié)果顯示，不同劑量的SCP作用24小時(shí)后均能不同程度的抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，同時(shí)能夠降低Bcl-2蛋白的表達(dá)，增加Bax蛋白的表達(dá)，具有一定的劑量依賴(lài)關(guān)系，表明SCP能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡與其影響凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)密切相關(guān)。

綜上所述，SCP具有一定的抗結(jié)腸癌的作用，本研究為SCP將來(lái)成為治療結(jié)腸癌的臨床藥物提供了研究基礎(chǔ)，其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1]閆舒.五味子多糖的最新研究進(jìn)展[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2009，19(04)：366-368.

[2]韓學(xué)忠.五味子多糖提取純化、分級(jí)及應(yīng)用[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，33(16)：235-236.

[3]黃玲.五味子多糖對(duì)S180荷瘤小鼠抑瘤作用的研究[J].福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，13(03)：224-226.

[4]王艷杰.五味子多糖對(duì)H22、S180柚荷瘤小鼠抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥信息，2010，24(15)：264-265.

[5]陳莎莎，曹菲，高峰，等.大鼠源性重組天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3基因構(gòu)建及其對(duì)細(xì)胞的促凋亡效應(yīng)[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2009，89(43)：3074-3078.

姜恩平(1975-)，女，吉林省吉林市人，副教授，博士，廣東醫(yī)學(xué)院腫瘤研究所，主要從事腫瘤藥理及心血管藥理研究。

廣東醫(yī)學(xué)院博士基金資助課題(B2012063)

R285

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1009-6019(2014)12-0034-02