重組人血管內(nèi)皮抑素對非小細胞肺癌淋巴管生成的抑制及對循環(huán)腫瘤細胞的影響

尚立群 趙皆 王偉 肖旺 李軍 李學昌 宋偉安 劉軍強 文鋒 岳彩迎

非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）約占肺癌發(fā)病率的80%，多通過淋巴、血液及腫瘤浸潤等方式進行局部侵犯和遠處轉(zhuǎn)移。研究[1]表明，淋巴轉(zhuǎn)移在腫瘤的早期轉(zhuǎn)移中比血行轉(zhuǎn)移更為重要，如何阻斷腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移是控制肺癌進展的重要課題。肺癌循環(huán)腫瘤細胞（circulating tumor cell, CTC）的研究[2-7]發(fā)現(xiàn)檢測肺癌CTC有助于早期診斷及判斷患者預后，與臨床分期有關，在治療期間定期檢測并監(jiān)測CTC的變化，可為評價治療方案的敏感性提供依據(jù)，有利于開展個體化的治療。通過CTC檢測來早期發(fā)現(xiàn)和診斷腫瘤已成為腫瘤研究的一個趨勢[8]。重組人血管內(nèi)皮抑素是由我國自主研發(fā)的抗癌新藥，為內(nèi)源性血管生成抑制劑，能夠選擇性抑制血管內(nèi)皮細胞的增殖與遷移，達到抑制腫瘤形成新生血管、切斷腫瘤細胞的營養(yǎng)供給途徑、誘導腫瘤細胞凋亡和抑制腫瘤增殖或轉(zhuǎn)移的目的[9,10]。重組人血管內(nèi)皮抑素對腫瘤血管生成的抑制作用已有較多研究與報道，但其對腫瘤淋巴管的生成是否存在類似的抑制作用，相關的臨床及基礎實驗報道仍很少見。為此，我們設計并進行了相關研究，以期探討重組人血管內(nèi)皮抑素對NSCLC淋巴管生成及淋巴轉(zhuǎn)移的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 A549肺癌細胞株 購于北京協(xié)和基礎實驗室細胞庫，細胞培養(yǎng)在海軍總醫(yī)院中心實驗室，采用含10%胎牛血清的DMEM/F12（1:1）培養(yǎng)基培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)環(huán)境為5%CO2，37.5oC恒溫培養(yǎng)箱。

1.1.2 BALB/C裸鼠 5周齡，雌雄各半，體重均為22 g-25 g，購于軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心，裸鼠飼養(yǎng)在解放軍304醫(yī)院SPF級動物實驗室，在環(huán)境控制條件下飼養(yǎng)，溫度（22±1）oC，12 h光亮/黑暗環(huán)境，6:00-18:00為光亮周期，18:00-6:00為黑暗周期，并于實驗室自由飲食。動物實驗獲得海軍總醫(yī)院倫理委員會批準。

1.1.3 藥物與試劑 重組人血管內(nèi)皮抑素，由山東先聲麥得津生物制藥有限公司提供；順鉑由山東齊魯制藥有限公司提供；DMEM/F12（1:1）培養(yǎng)基，胎牛血清，胰蛋白酶及細胞培養(yǎng)耗材均購自北京圣希康生物科技有限公司；鼠抗血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）-C、VEGF-D和VEGF受體（VEGFR）-3單克隆抗體試劑盒購于美國Santa Cruz公司；鼠抗anti-podoplanin Protein/gp36試劑盒，PV-6000通用型免疫組化檢測試劑盒和DAB染色試劑盒購于上?？泼羯锟萍加邢薰荆籑iltenyi抗CD45免疫磁珠、LS柱、強磁場磁性細胞分離架/器購于德國美天旎公司；枸椽酸抗凝血管（ACD）、淋巴細胞分離液、細胞核熒光染料4,6-聯(lián)瞇-2-苯基吲哚（DAPI）、anti-Napsin A（1:100）和anti-ヰF-1（1:100）熒光抗體購于美國Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 荷瘤裸鼠動物模型的建立與分組 于裸鼠右側(cè)腋窩經(jīng)皮下注射濃度為1×107/mL的A549人肺癌細胞0.2 mL，建立裸鼠異種移植荷瘤模型[11]。注射腫瘤細胞3周后，選取56只建模成功的荷瘤裸鼠，腫瘤平均直徑為（7±0.4）mm。56只成瘤裸鼠隨機分為8個小組（n=7），各組間裸鼠平均體重，腫瘤直徑無統(tǒng)計學差異，同組雌雄裸鼠分開飼養(yǎng)?？瞻讓φ战M，給予尾靜脈注射生理鹽水0.2 mL，每天1次；順鉑組，給予尾靜脈注射順鉑20 μg，隔天1次；重組人血管內(nèi)皮抑素1，給予尾靜脈注射重組人血管內(nèi)皮抑素2 mg/kg，每天1次；重組人血管內(nèi)皮抑素2，給予尾靜脈注射重組人血管內(nèi)皮抑素4 mg/kg，每天1次；重組人血管內(nèi)皮抑素3，給予尾靜脈注射重組人血管內(nèi)皮抑素6 mg/kg，每天1次；重組人血管內(nèi)皮抑素1+順鉑，給予尾靜脈注射重組人血管內(nèi)皮抑素2 mg/kg，每天1次，加順鉑20 μg，隔天1次；重組人血管內(nèi)皮抑素2+順鉑，給予尾靜脈注射重組人血管內(nèi)皮抑素4 mg/kg，每天1次，加順鉑20 μg，隔天1次；重組人血管內(nèi)皮抑素3+順鉑，給予尾靜脈注射重組人血管內(nèi)皮抑素6 mg/kg，加順鉑20 μg，隔天1次。所有荷瘤裸鼠均連續(xù)給藥2周。

1.2.2 荷瘤裸鼠的處置 給藥結(jié)束后觀察1周，給予水合氯醛麻醉，采用摘眼取血，每只約1 mL，為滿足實驗用血量每組7只動物血合并為一組共7 mL，附加實驗重復上述實驗使采血達到7組，所采血液置于枸櫞酸抗凝管中保存；取血后處死全部裸鼠并進行完整的解剖，包括腫瘤和淋巴結(jié)解剖，以從病理學方面評估轉(zhuǎn)移的存在。病理切片由海軍總醫(yī)院病理科制作，并對腫瘤組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)進行HE染色。免疫組織化學染色診斷北京中杉金橋生物科技有限公司完成，采用免疫酶標法對腫瘤組織進行染色，檢測腫瘤組織中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達水平和微淋巴管密度，分別采用抗VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的單克隆抗體和抗鼠podoplanin蛋白抗體作為一抗，PV-6000（辣根酶標記羊抗兔/小鼠IgG多聚體）作為二抗，DAB（二氨基聯(lián)苯胺）溶液作為顯色劑，染色成功后組織切片中有VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達的部位和微淋巴管內(nèi)皮細胞呈棕黃色。

1.2.3 CTC檢測 在海軍總醫(yī)院中心實驗室完成。采用免疫磁珠負性富集法篩選出外周血循環(huán)腫瘤細胞[12,13]，anti-NapsinA和anti-TTF-1熒光抗染色確定CTC[14]，鏡下觀察CTC形態(tài)，計數(shù)各組CTC數(shù)量。CTC檢測設備：激光共聚焦采用日本Olympus FV 10i；負性富集采用德國Miltenyi Midi MaCS分選器。簡單的步驟如下：①免疫磁珠負性富集外周血CTCs，用緩沖液（137 mmol/L NaCl; 2.7 mmol/L KCl; 10 mmol/L Na2HPO4; 2 mmol/L EDTA; 0.5%BSA, pH 7.4）將血樣轉(zhuǎn)移至50 mL離心管，并定容至50 mL；450 g離心5 min，棄上清；②加入紅細胞裂解液（155 mmol/L NH4Cl；10 mmol/L KHCO3；0.1 mmol/L EDTA）至50 mL，室溫勻速孵育8 min，450 g離心5 min，棄上清；③重復紅細胞裂解步驟，充分裂解殘余的紅細胞；④加入緩沖液至50 mL，細胞重懸后顯微鏡下計數(shù)；⑤再次450 g離心5 min，棄上清；⑥按107個細胞加入20 μL anti-CD45磁珠的比例，將細胞與磁珠混勻，并在4oC避光孵育15 min；⑦加入10 mL緩沖液，450 g離心，棄上清；⑧按照每107個細胞加入500 μL緩沖液的比例，重懸細胞；⑨細胞懸液加入已用緩沖液潤洗的LS分離柱，在強磁場的作用下收集流出的細胞，滴在載玻片上，室溫放置至細胞干燥；⑩加入2%多聚甲醛固定40 min，PBS洗滌3次，室溫干燥后進行細胞免疫熒光染色。細胞免疫熒光染色：①細胞滴片以PBS洗滌5 min，加入0.1%的TritonX-100-PBS孵育5 min；②PBS洗滌3次，每次3 min，以2%的BSA-PBS室溫封閉30 min；③加入anti-Napsin A（1:100）和anti-TTF-1（1:100）熒光抗體室溫孵育1 h；④0.2%BSA-PBS洗滌3次，每次3 min；⑤細胞滴片在暗處晾干，加入7 μL的DAPI mounting medium封片，蓋玻片固定，顯微鏡下觀察并計數(shù)。染色和洗滌均在暗室中操作。

1.3 效果評定 組織切片免疫組織化學染色采用免疫酶標法，VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3蛋白免疫組織化染色陽性表達定位于腫瘤細胞及巨噬細胞的胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒，VEGFR-3還可見于細胞間質(zhì)脈管內(nèi)皮細胞。每例切片至少計數(shù)10個400倍視野，陽性細胞數(shù)＜1%記為0分，1%-25%為1分，26%-50%為2分，51%-75%為3分。按染色強度計分，淡棕褐色記1分，棕褐色記2分，深棕褐色記3分。以兩者相加所得總分進行判定，得分≤2分記為表達陰性，＞2分記為表達陽性；由不相同的5位技術人員分別計算1次每組的表達陽性率，各組5次計算結(jié)果的平均值即為該組的表達陽性率。評估腫瘤組織中淋巴管生成的重要指標是組織中的微淋巴管密度，podoplanin蛋白是一種表達于脈管系統(tǒng)內(nèi)皮細胞內(nèi)的特異蛋白，對識別淋巴管內(nèi)皮細胞具有較高的特異性，在NSCLC 組織中，podoplanin蛋白是合適的淋巴管標記物，免疫組織化學染色能使表達有podoplanin蛋白的微淋巴管內(nèi)皮細胞著色[15,16]，再通過高倍鏡下進行微淋巴管計數(shù)，五個不同視野的平均值作為微淋巴管密度。免疫磁珠負性富集法篩選出外周血循環(huán)腫瘤細胞，免疫熒光染色確定CTC，鏡下觀察CTC形態(tài)，計數(shù)各組CTC數(shù)量，比較各組差異。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，統(tǒng)計方法采用方差分析（One-Way ANOVA），其中包括Levene方差齊性檢驗，變量之間的相關性分析采用Spearman相關系數(shù)和Kendall相關系數(shù)評價，相關系數(shù)大于0.5提示為存在正相關，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 腫瘤組織和淋巴結(jié)病理診斷 各組腫瘤組織和淋巴結(jié)制作成病理切片后進行HE染色，鏡下觀察腫瘤組織HE染色結(jié)果符合肺腺癌病理改變，淋巴結(jié)組織染色結(jié)果符合轉(zhuǎn)移癌組織病理改變（圖1）。

2.2 VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達和微淋巴管密度 對腫瘤組織進行免疫組織化學染色診斷，染色成功后組織切片中有VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達的部位和微淋巴管內(nèi)皮細胞呈棕黃色（圖2-圖5）。計算出各組腫瘤組織VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達陽性率和微淋巴管密度，詳見表1。重組人血管內(nèi)皮抑素1、重組人血管內(nèi)皮抑素2、重組人血管內(nèi)皮抑素3及重組人血管內(nèi)皮抑素1+順鉑、重組人血管內(nèi)皮抑素2+順鉑、重組人血管內(nèi)皮抑素3+順鉑各個組的VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達陽性率和微淋巴管密度均明顯低于空白對照組與順鉑組（P＜0.05）；3個重組人血管內(nèi)皮抑素組與3個重組人血管內(nèi)皮抑素+順鉑組中，較高濃度重組人血管內(nèi)皮抑素組的VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達陽性率和微淋巴管密度低于較低濃度組（P＜0.05）；3個重組人血管內(nèi)皮抑素組與3個重組人血管內(nèi)皮抑素+順鉑組中，相同重組人血管內(nèi)皮抑素濃度的對應兩組間VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達陽性率和微淋巴管密度無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。各組微淋巴管密度和VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達陽性率之間存在正相關，Spearman相關系數(shù)和Kendall相關系數(shù)均大于0.5。

2.3 外周血CTC檢測 免疫磁珠負性富集法篩選出外周血循環(huán)腫瘤細胞，采用免疫熒光染色，共聚焦顯微鏡下觀察CTC形態(tài)（圖6），計數(shù)CTC數(shù)目，8組中的7個組外周血中檢測出了CTC，詳見表1。重組人血管內(nèi)皮抑素1組、重組人血管內(nèi)皮抑素2組、重組人血管內(nèi)皮抑素3組及重組人血管內(nèi)皮抑素1+順鉑、重組人血管內(nèi)皮抑素2+順鉑、重組人血管內(nèi)皮抑素3+順鉑和順鉑組的CTC數(shù)目明顯低于空白對照組（P＜0.01），3個重組人血管內(nèi)皮抑素組與3個重組人血管內(nèi)皮抑素+順鉑組中，較高濃度重組人血管內(nèi)皮抑素組的CTC數(shù)目低于較低濃度組（P＜0.01），重組人血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑各組的CTC數(shù)目明顯低于單獨使用順鉑或重組人血管內(nèi)皮抑素（P＜0.01）。

3 討論

圖1 腫瘤組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)HE染色圖片（×100）。A：腫瘤組織HE染色圖片；B：轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)HE染色圖片。鏡下所見腫瘤組織HE染色結(jié)果符合肺腺癌病理改變，淋巴結(jié)組織HE染色結(jié)果符合轉(zhuǎn)移癌組織病理改變，病理診斷為肺腺癌和肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Fig 1 HE staining picture of tumor tissue and metastatic lymph nodes (×100). A: HE staining picture of tumor tissue; B: HE staining picture of metastatic lymph nodes. Endoscopic findings HE staining result of tumor tissue pathological changes in accordance with the pathological changes of lung adenocarcinoma, HE staining results of lymph node tissue were in line with metastatic cancer tissue pathological changes, pathological diagnosis were lung adenocarcinoma and lung cancer lymph node metastasis.

圖2 各組腫瘤組織經(jīng)免疫組化處理微淋巴管著色后的圖片（×400）。A：對照組；B：順鉑組；C：重組人血管內(nèi)皮抑素1組；D：重組人血管內(nèi)皮抑素2組；E：重組人血管內(nèi)皮抑素3組；F：重組人血管內(nèi)皮抑素1組+順鉑組；G：重組人血管內(nèi)皮抑素2組+順鉑組；H：重組人血管內(nèi)皮抑素3組+順鉑組。Fig 2 Coloring microlymphatic vessel pictures of tumor tissue by IHC in each group (×400). A: Control group; B: Cisplatin group; C: Endostar 1; D:Endostar 2; E: Endostar 3; F: Endostar 1+Cisplatin; G: Endostar 2+Cisplatin; H: Endostar 3+Cisplatin. IHC: immunohistochmeistry.

圖3 各組腫瘤組織經(jīng)免疫組織化學染色VEGF-C著色后圖片（×200）。A：對照組；B：順鉑組；C：重組人血管內(nèi)皮抑素1組；D：重組人血管內(nèi)皮抑素2組；E：重組人血管內(nèi)皮抑素3組；F：重組人血管內(nèi)皮抑素1組+順鉑組；G：重組人血管內(nèi)皮抑素2組+順鉑組；H：重組人血管內(nèi)皮抑素3組+順鉑組。Fig 3 Coloring VEGF-C pictures of tumor tissue by IHC staining in each group (×200). A: Control group; B: Cisplatin group; C: Endostar 1; D: Endostar 2;E: Endostar 3; F: Endostar 1+Cisplatin; G: Endostar 2+Cisplatin; H: Endostar 3+Cisplatin. VEGF: vascular endothelial growth factor.

圖4 各組腫瘤組織經(jīng)免疫組織化學染色VEGF-D著色后圖片（×200）。A：對照組；B：順鉑組；C：重組人血管內(nèi)皮抑素1組；D：重組人血管內(nèi)皮抑素2組；E：重組人血管內(nèi)皮抑素3組；F：重組人血管內(nèi)皮抑素1組+順鉑組；G：重組人血管內(nèi)皮抑素2組+順鉑組；H：重組人血管內(nèi)皮抑素3組+順鉑組。Fig 4 Coloring VEGF-D pictures of tumor tissue by IHC staining in each group (×200). A: Control group; B: Cisplatin group; C: Endostar 1; D: Endostar 2;E: Endostar 3; F: Endostar 1+Cisplatin; G: Endostar 2+Cisplatin; H: Endostar 3+Cisplatin.

肺癌是發(fā)病率和死亡率增長最快，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一，多數(shù)肺癌患者死于轉(zhuǎn)移，淋巴轉(zhuǎn)移是腫瘤轉(zhuǎn)移的主要途徑之一，部分腫瘤患者在發(fā)現(xiàn)原發(fā)病灶的同時，已經(jīng)出現(xiàn)了多處的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[17]。早期的觀點普遍認為腫瘤通過周圍已有的淋巴管轉(zhuǎn)移，隨著研究的深入發(fā)現(xiàn)，腫瘤可以誘導淋巴管生成從而促進轉(zhuǎn)移[18,19]。研究[20-22]顯示，VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3與腫瘤淋巴結(jié)生成和轉(zhuǎn)移的關系極為密切，VEGF-C、VEGF-D是淋巴管生成有力的誘導劑，可通過結(jié)合并激活特異性表達于淋巴管內(nèi)皮的VEGFR-3，介導和啟動受體的酪氨酸激酶VEGF-C、VEGF-D/VEGFR-3信號通道，誘導內(nèi)皮細胞增殖、遷移和特異性淋巴內(nèi)皮細胞生長，促進腫瘤淋巴管的生成和淋巴管擴張，增加入侵癌細胞與淋巴管的接觸面積，促進腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移。迄今為止，有關血管內(nèi)皮抑素對腫瘤淋巴管生成抑制作用的動物實驗及臨床研究并不多見。腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移途徑與血行轉(zhuǎn)移同等重要，因此研究阻斷腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移途徑的方法同樣意義重大。

圖5 各組腫瘤組織經(jīng)免疫組織化學染色VEGFR-3著色后圖片（×200）。A：對照組；B：順鉑組；C：重組人血管內(nèi)皮抑素1組；D：重組人血管內(nèi)皮抑素2組；E：重組人血管內(nèi)皮抑素3組；F：重組人血管內(nèi)皮抑素1組+順鉑組；G：重組人血管內(nèi)皮抑素2組+順鉑組；H：重組人血管內(nèi)皮抑素3組+順鉑組。Fig 5 Coloring VEGFR-3 pictures of tumor tissue by IHC staining in each group (×200). A: Control group; B: Cisplatin group; C: Endostar1; D: Endostar 2; E: Endostar 3; F: Endostar 1+Cisplatin; G: Endostar 2+Cisplatin; H: Endostar 3+Cisplatin.

圖6 共聚焦顯微鏡下循環(huán)腫瘤細胞圖片，圖中標尺代表10 μm，×1,000。A：循環(huán)腫瘤細胞經(jīng)細胞核熒光染料DAPI染色的圖片；B：循環(huán)腫瘤細胞經(jīng)anti-NapsinA熒光抗體染色的圖片；C：循環(huán)腫瘤細胞經(jīng)anti-TTF-1熒光抗體染色的圖片；D：圖6A、B、C整合而成的圖片。Fig 6 Confocal microscopy images of circulating tumor cells, the scale bar represents 10 μm, ×1,000. A was an image of circulating tumor cells dyed by a nucleus fluorescent dye called DAPI; B was an image of circulating tumor cells dyed by anti-NapsinA fluorescent antibody; C was an image of circulating tumor cells dyed by anti-TTF-1 fluorescent antibody; D was an image of circulating tumor cells integrated from Fig 6A-C.

本實驗創(chuàng)新點即在于研究重組人血管內(nèi)皮抑素對肺癌動物模型新生淋巴管的抑制作用，可以為血管生成抑制因子如重組人血管內(nèi)皮抑素能否抑制腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移提供實驗依據(jù)。綜合實驗中各組VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達陽性率和微淋巴管密度檢測結(jié)果的差異，以及微淋巴管密度與VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達陽性率的相關性，可以認為重組人血管內(nèi)皮抑素確實具有抑制腫瘤淋巴管生成的作用，通過抑制腫瘤組織中VEGF-C、VEGF-D的表達，減少組織中VEGFR-3的激活，抑制VEGF-C、VEGF-D/VEGFR-3信號通道，達到抑制腫瘤淋巴管生成和淋巴轉(zhuǎn)移的目的。

Sleeman等[1]認為，腫瘤發(fā)生早期進入血管的少量腫瘤細胞會因為血液中的血流動力學壓力等因素而大部分被破壞，而淋巴管中淋巴液流動相對緩慢，侵入淋巴道的腫瘤細胞則可以繼續(xù)增殖，先造成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，并在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)內(nèi)分化增殖，最終大量的腫瘤細胞通過胸導管進入血液循環(huán)達到全身組織器官而形成遠處轉(zhuǎn)移。實驗中各組外周血循環(huán)腫瘤細胞檢測結(jié)果，提示重組人血管內(nèi)皮抑素與順鉑均能減少循環(huán)腫瘤細胞數(shù)目，但作用機制不同，重組人血管內(nèi)皮抑素通過抑制腫瘤血管與淋巴管生成，減少腫瘤細胞進入血液循環(huán)，作用大小與給藥濃度呈正相關；順鉑則是通過殺死進入血液循環(huán)的腫瘤細胞，從而減少循環(huán)腫瘤細胞。重組人血管內(nèi)皮抑素與順鉑聯(lián)合使用相比單獨使用重組人血管內(nèi)皮抑素或順鉑能更有效的減少循環(huán)腫瘤細胞數(shù)目。采用重組人血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑，能夠更好地抑制腫瘤通過血液和淋巴道轉(zhuǎn)移，降低腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移的風險。

表1 各組腫瘤組織中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達陽性率，腫瘤組織微淋巴管密度以及循環(huán)腫瘤細胞數(shù)目Tab 1 Positive expression rate of VEGF-C, VEGF-D, VEGFR-3, microlymphatic vessel density of tumor tissues and CTC number in each group

綜上所述，重組人血管內(nèi)皮抑素抑制NSCLC裸鼠模型淋巴生成的基礎研究，證實了重組人血管內(nèi)皮抑素可通過抑制肺癌組織中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達來抑制新生淋巴管形成，抑制肺癌的淋巴轉(zhuǎn)移；同時可以減少腫瘤細胞經(jīng)淋巴管進入血液循環(huán)，與順鉑聯(lián)合使用可更有效降低肺癌遠處轉(zhuǎn)移和復發(fā)的風險。重組人血管內(nèi)皮抑素抑制NSCLC裸鼠模型淋巴生成的基礎研究，不僅對NSCLC患者的治療具有指導作用，也為易發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的其他惡性腫瘤提供了新的用藥選擇。希望通過進一步的基礎與臨床研究，讓更多的惡性腫瘤患者獲益。