341例AIDS合并肺結(jié)核患者痰液兩種方法培養(yǎng)及其藥敏分析

陳海強(qiáng) 唐柳生

341例AIDS合并肺結(jié)核患者痰液兩種方法培養(yǎng)及其藥敏分析

陳海強(qiáng) 唐柳生

目的 探討AIDS(艾滋病)合并肺結(jié)核患者痰液兩種方法培養(yǎng)及其耐藥情況。方法 采集患者痰液分別采用BacT/ALERT3D系統(tǒng)和羅氏法進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)及藥物敏感性測定。結(jié)果 341例AIDS合并肺結(jié)核患者痰液兩種方法檢測,共129例培養(yǎng)陽性,總陽性率39.81%,3D法培養(yǎng)污染率為2.6%,羅氏法培養(yǎng)污染率為2.3%。129株菌株藥敏測定結(jié)果有40株出現(xiàn)耐藥,耐藥率為31.01%。結(jié)論 3D法在AIDS合并肺結(jié)核患者痰液培養(yǎng)方面較羅氏法陽性率高,兩種方法相互結(jié)合更能提高培養(yǎng)效率。AIDS合并肺結(jié)核患者痰液結(jié)核菌培養(yǎng)和藥敏實驗可為臨床診斷和指導(dǎo)用藥提供重要依據(jù)。

AIDS合并肺結(jié)核；結(jié)核分枝桿菌；3D法；羅氏法；痰液

艾滋病和結(jié)核病是目前世界范圍內(nèi)流行最為嚴(yán)重的兩種傳染病,二者相互影響,相互因果促進(jìn)病態(tài)的進(jìn)展和惡化［1］。由于艾滋病患者免疫功能低下,很容易引起各種器官發(fā)生結(jié)核病變,以肺結(jié)核最為常見。本文通過采集341例AIDS(艾滋病)合并肺結(jié)核患者痰液分別采用BacT/ALERT3D系統(tǒng)和羅氏法進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)及藥物敏感性測定。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 341例標(biāo)本均來自2012年2～11月到廣西壯族自治區(qū)龍?zhí)夺t(yī)院就診的AIDS合并肺結(jié)核患者的痰液,其中男244例,女97例,年齡為8～95歲。

1.2 儀器 法國生物梅里埃公司提供的BacT/ALERT@ 3D(以下簡稱3D)微生物檢測系統(tǒng)。3D培養(yǎng)基由法國生物梅里埃公司提供；羅氏培養(yǎng)基和pH 6.8的磷酸鹽緩沖液、消化液等相關(guān)試劑均為本室按《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗規(guī)程》配制。

1.3 AIDS的診斷標(biāo)準(zhǔn) 艾滋病的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國疾病控制中心1993年修訂的艾滋病的診斷標(biāo)準(zhǔn)及中國《HIV/AIDS的診斷標(biāo)準(zhǔn)和防止原則》［2］。

1.4 方法 先用消化液將痰液標(biāo)本進(jìn)行消化15 min后加緩沖液中和,3000 r/min離心取沉淀分別接種于1瓶3D培養(yǎng)基(接種量為0.5 ml)和1支羅氏培養(yǎng)基(接種量為0.2 ml)。3D培養(yǎng)基用3D系統(tǒng)培養(yǎng),按說明書操作,陽性立即轉(zhuǎn)種到羅氏培養(yǎng)基,陰性42 d發(fā)陰性報告；羅氏培養(yǎng)基置于37℃的孵育箱進(jìn)行培養(yǎng),陽性用含各種藥羅氏培養(yǎng)基管進(jìn)行藥敏試驗,陰性56 d發(fā)報告。藥敏采用絕對濃度間接法,28 d看結(jié)果,含藥培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)＞20個判定為耐藥,質(zhì)控菌株為H37RV。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用Excel2003和SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 341例AIDS合并肺結(jié)核患者痰液兩種方法培養(yǎng)共有129例陽性,除污染例數(shù)外,陽性率為39.81%(129/324),其中3D培養(yǎng)陽性106例,占陽性比例的55.50%(106/191),羅氏培養(yǎng)陽性85例,占陽性比例的44.46%；兩種方法均陽性85例,有33例羅氏培養(yǎng)陰性3D培養(yǎng)陽性,有11例3D培養(yǎng)陰性羅氏培養(yǎng)陽性。3D法陽性率與羅氏法比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.89,P＜0.01),見表1。

表1 兩種方法培養(yǎng)情況

2.2 污染率方面,經(jīng)萋納氏抗酸染色確定,3D法培養(yǎng)污染例數(shù)9例,污染率為2.6%,羅氏法培養(yǎng)污染例數(shù)8例,污染率為2.3%,二者比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.06,P＞0.05)。見表2。

表2 兩種方法污染情況比較(n,%)

2.3 對129例陽性菌株進(jìn)行菌種鑒定和8種藥物(異煙肼、鏈霉素、乙胺丁醇、利福平、對氨基水楊酸、氧氟沙星、卡那霉素、卷曲霉素)敏感試驗,耐藥率為31.01%,9株為牛結(jié)核分枝桿菌,未出現(xiàn)耐藥菌株,109株為結(jié)核分枝桿菌,29例耐藥(其中有20株同時耐INH和RFP,即耐多藥占比18.3%,有10株耐2種藥以上,占比9.2%),11株為非結(jié)核分枝桿菌,其中有2株對8種藥物全部耐藥,有11株耐3種藥以上。

3 討論

本組資料顯示,3D培養(yǎng)陽性106例,陽性率為31.08%,羅氏培養(yǎng)陽性85例,陽性率為24.92%,兩種方法均陽性85例,有33例羅氏培養(yǎng)陰性3D培養(yǎng)陽性,二者比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01),二者污染率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),因此,3D法明顯優(yōu)于羅氏法,盡管3D法培養(yǎng)具備更利于細(xì)菌生長的營養(yǎng)及高敏感的檢測系統(tǒng),但有11例3D培養(yǎng)陰性羅氏培養(yǎng)陽性,這可能與某些菌株生長特性有關(guān)。不少學(xué)者報道［3］,3D法培養(yǎng)結(jié)核桿菌無論是初分離、藥敏試驗還是菌型鑒定所需時間以及陽性分離率均優(yōu)于傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)法,這是由于分枝桿菌在生長過程中會產(chǎn)生二氧化碳, 3D系統(tǒng)利用此原理通過比色計傳感器和反射光連續(xù)自動監(jiān)測培養(yǎng)瓶底的二氧化碳變色指示劑的顏色變化來顯示培養(yǎng)瓶內(nèi)是否有菌生長,靈敏度相當(dāng)高,而改良羅氏培養(yǎng)基法,只有在大量分枝桿菌生長形成肉眼可見的菌落才可判斷,少量肉眼無法判斷的菌落有可能被忽視；另外3D培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基,當(dāng)中添加有酪蛋白、小牛血清主觸酶以及油酸等生長因子,營養(yǎng)非常豐富,并且營養(yǎng)成份全方位與分枝桿菌接觸,更利于分枝桿菌生長,而改良羅氏培養(yǎng)基主要成份為谷氨酸鈉或天門冬素、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、丙三醇、雞蛋、孔雀綠和水份等,營養(yǎng)成份不及3D培養(yǎng)基,并且營養(yǎng)成份與分枝桿菌單面接觸,分枝桿菌對營養(yǎng)的吸收不如3D培養(yǎng)基。此結(jié)論在本文報道中得以驗證。

污染率方面,3D法培養(yǎng)污染率為2.6%,羅氏法培養(yǎng)污染率為2.3%,造成污染的原因之一可能是跟標(biāo)本的性質(zhì)有關(guān),由于標(biāo)本所含的雜菌量較大或標(biāo)本凝固無法打碎,在15 min之內(nèi)還無法將雜菌殺死；其次是由于實驗室污染菌造成,因此,應(yīng)加強(qiáng)實驗過程中的無菌操作。

INH是治療結(jié)核病首先的化學(xué)藥物之一,它可以被MTB內(nèi)過氧化氫酶-過氧化物酶激活,作用于enovl-ACP還原酶,抑制細(xì)胞壁分枝菌酸的生物合成,造成細(xì)胞壁的損壞,使得MTB對外界氧化和侵襲的抵抗屏障受到破壞,從而達(dá)到殺滅結(jié)核分枝桿菌的作用,但多年來INH耐藥率一直居高不下,顯著影響抗結(jié)核藥物的療效,本文結(jié)果顯示11株為非結(jié)核分枝桿菌,其中有2株對8種藥物全部耐藥,有11株耐3種藥以上,耐藥率為100%。上述結(jié)果表明AIDS合并肺結(jié)核與其他結(jié)核病一樣,均可獲得細(xì)菌學(xué)的診斷依據(jù),存在著耐藥方面的問題,廣泛耐藥結(jié)核造成嚴(yán)重的公共衛(wèi)生威脅,尤其在艾滋病毒患病率高的人群中和在衛(wèi)生保健資源少的地方。AIDS合并肺結(jié)核病例可以通過痰液結(jié)核菌培養(yǎng)和藥敏實驗結(jié)果來診斷和指導(dǎo)臨床用藥。

［1］ 李拯民.結(jié)核菌和HIV雙重感染.結(jié)核病與肺部腫瘤,2002, 2(2):130.

［2］ 莊玉輝,王國志,翟秉祥.結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗規(guī)程.北京:中國防癆協(xié)會,1995:31.

［3］ 吳龍章.BacT/ALERT 3D全自動培養(yǎng)儀在細(xì)菌鑒定和藥敏試驗的臨床應(yīng)用.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2002,4(25):243-244.

537006 廣西玉林市結(jié)核病防治所(陳海強(qiáng))；廣西壯族自治區(qū)龍?zhí)夺t(yī)院中心實驗室(唐柳生)

唐柳生 E-mail：tls175@163.com