CK7、CK18、CK5/6及P63在不同類型肺癌組織中的表達(dá)分析

朱棟麟 沈榮明 劉曉強(qiáng) 崔建勇 楊勇 朱一蒙

·論著·

CK7、CK18、CK5/6及P63在不同類型肺癌組織中的表達(dá)分析

朱棟麟 沈榮明 劉曉強(qiáng) 崔建勇 楊勇 朱一蒙

目的 探討CK7、CK18、CK5/6及P63在各類型肺癌組織中的表達(dá)情況。 方法 對(duì)104例肺癌手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行免疫組化分析, 聯(lián)合檢測(cè)CK7、CK18、CK5/6及P63的表達(dá), 同時(shí)分析它們?cè)诓煌愋头伟┲械谋磉_(dá)情況。 結(jié)果 CK7在腺癌、腺鱗癌及大細(xì)胞癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為91.07%、85.71%及50.00%, 在鱗癌和小細(xì)胞癌中無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。CK18在腺癌、腺鱗癌、小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為96.43%、85.71%、100%及100%, 在鱗癌中無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。CK5/6在鱗癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為100%, 在腺癌、腺鱗癌、小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。P63在鱗癌和腺鱗癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100%及14.29%, 在腺癌、小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。 結(jié)論 CK7及CK18可用于肺腺癌診斷, CK5/6及P63可用于肺鱗癌診斷。同時(shí), CK18還可用于肺小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌的診斷。

肺癌；免疫組化；CK7；CK18；CK5/6；P63

近年來(lái)肺癌的發(fā)病率逐年增長(zhǎng), 已成為我國(guó)首位惡性腫瘤死亡原因［1］。其組織學(xué)分類類型眾多, 常見(jiàn)的有腺癌、鱗癌、腺鱗癌、小細(xì)胞癌、大細(xì)胞癌等。目前越來(lái)越多的研究顯示某些新興的靶向治療方案及聯(lián)合治療方案與肺癌組織學(xué)類型密切相關(guān), 因而準(zhǔn)確的分型對(duì)肺癌患者的治療及預(yù)后有重要價(jià)值。高分化及中分化的鱗癌及腺癌不難診斷, 然而對(duì)于分化較差的標(biāo)本, 以及纖維支氣管鏡活檢組織等擠壓明顯的標(biāo)本, 僅依靠HE染色判別類型已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。本文收集肺癌手術(shù)標(biāo)本104例, 對(duì)其進(jìn)行CK7、CK18、CK5/6及P63的聯(lián)合檢測(cè), 旨在探討它們?cè)诓煌愋头伟┙M織中的表達(dá)特點(diǎn),旨在為診斷與治療提供幫助。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 標(biāo)本來(lái)源于2008年1月~2012年12月在蘇州市立醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理確診的肺癌患者, 共104例,其中男性70例, 女性34例, 年齡從44~84歲, 平均年齡為63.2歲。其中腺癌56例, 鱗癌22例, 腺鱗癌14例, 小細(xì)胞癌8例, 大細(xì)胞癌4例。所有手術(shù)標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定, 常規(guī)取材、包埋、切片和HE染色。所選患者術(shù)前均未行放療、化療等治療。

1. 2 免疫組織化學(xué)染色 CK7、CK18、CK5/6及P63抗體及二抗均來(lái)源于廣州深達(dá)公司, 組織切片經(jīng)常規(guī)脫蠟、水化、高壓抗原修復(fù)3 min, 3%H2O2封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶, 使用iVision 免疫組化染色試劑盒, 用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1. 3 結(jié)果判定 CK7、CK18、CK5/6陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜, P63定位于細(xì)胞核。判讀結(jié)果綜合染色強(qiáng)度及染色范圍, 染色強(qiáng)度判讀標(biāo)準(zhǔn)為：不著色為陰性, 黃色至褐色為陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞范圍判讀標(biāo)準(zhǔn)為：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為陰性, 陽(yáng)性細(xì)胞≤30%為灶性陽(yáng)性, ＞30%為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2. 1 CK7在肺癌組織中的表達(dá)情況 在104例肺癌組織中檢測(cè)CK7的表達(dá), 結(jié)果如表1所示, CK7在肺腺癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為91.07% (51/56), 局灶陽(yáng)性率為5.36% (3/56)；在肺鱗癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為0, 局灶陽(yáng)性率為27.27% (6/22)；在肺腺鱗癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為85.71% (12/14), 局灶陽(yáng)性率為14.29% (2/14) ；在肺大細(xì)胞癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為50% (2/4), 局灶陽(yáng)性率為50% (2/4)；而在肺小細(xì)胞癌中未檢測(cè)到陽(yáng)性表達(dá)。

2. 2 CK18在肺癌組織中的表達(dá)情況 CK18在各類型肺癌中的表達(dá)結(jié)果如表2所示, 其在肺腺癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為96.43% (54/56), 局灶陽(yáng)性率為3.57% (2/56)；在肺鱗癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為0, 局灶陽(yáng)性率為81.82% (18/22)；在肺腺鱗癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為85.71% (12/14), 局灶陽(yáng)性率為14.29% (2/14) ；在肺小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中表達(dá)陽(yáng)性率均為100% (8/8, 4/4)。

2. 3 CK5/6在肺癌組織中的表達(dá)情況 CK5/6在各類型肺癌中的表達(dá)結(jié)果如表3所示, 其在肺腺癌組織中僅有局灶陽(yáng)性表達(dá)8.93% (5/56)；而在肺鱗癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為100%；在肺腺鱗癌組織中為局灶陽(yáng)性表達(dá)85.71% (12/14) ；在肺小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中均無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。

2. 4 P63在肺癌組織中的表達(dá)情況 P63在各類型肺癌中的表達(dá)結(jié)果如表4所示, 其在肺腺癌組織中僅有局灶陽(yáng)性表達(dá)21.43% (12/56)；而在肺鱗癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為100%；在肺腺鱗癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為14.29% (2/14), 局灶陽(yáng)性率為57.14% (8/14) ；在肺小細(xì)胞癌中有灶性表達(dá)25% (2/8), 在大細(xì)胞癌中無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。

表1 CK7在各類型肺癌中的表達(dá)情況

表2 CK18在各類型肺癌中的表達(dá)情況

表3 CK5/6在各類型肺癌中的表達(dá)情況

表4 P63在各類型肺癌中的表達(dá)情況

3 討論

肺癌的個(gè)體化治療將成為臨床肺癌治療的主流趨勢(shì), 毫無(wú)疑問(wèn), 對(duì)肺癌的準(zhǔn)確分型是這一方案得以施行的前提。以往人們重點(diǎn)關(guān)注肺小細(xì)胞癌與非小細(xì)胞癌的區(qū)分, 然而大量研究發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞中的組織學(xué)分類也至關(guān)重要。如臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)針對(duì)EGFR的靶向藥物吉非替尼及埃羅替尼等僅對(duì)肺腺癌患者療效明顯。故而探討分子標(biāo)志物在不同類型肺癌中的表達(dá), 充分發(fā)揮其指導(dǎo)診斷及治療的作用, 值得深入研究。

細(xì)胞角蛋白(cytokeratin, CK)主要分布于上皮細(xì)胞, 是細(xì)胞的主要骨架蛋白。它們具有極高的保守性和組織分化特異性, 與上皮細(xì)胞的類型、增殖、分化密切相關(guān), 因而被用作腫瘤標(biāo)志物［2,3］。P63在正常肺組織中表達(dá)于支氣管儲(chǔ)備細(xì)胞,而不表達(dá)于上皮細(xì)胞, Wang BY等［4］研究了30例肺鱗癌組織, 發(fā)現(xiàn)其均表達(dá)P63, 少數(shù)肺腺癌和細(xì)支氣管肺泡癌也有表達(dá)。也有研究認(rèn)為P63僅表達(dá)于鱗癌, 在其他類型肺癌中基本不表達(dá)。

越來(lái)越多的研究表明多個(gè)抗體的聯(lián)合檢測(cè)在肺癌組織學(xué)分類中的實(shí)用價(jià)值大于單個(gè)指標(biāo)的運(yùn)用［5］。有研究在12株肺癌細(xì)胞株中檢測(cè)了CK5/6、CK14、CK17及CK18等分子標(biāo)志物的mRNA水平, 并在95例非小細(xì)胞肺癌患者組織標(biāo)本中檢測(cè)了其蛋白表達(dá), 發(fā)現(xiàn)CK5/6、CK14、CK17在鱗癌中表達(dá)較高, 且其高表達(dá)與低分化相關(guān), CK7、CK18則高表達(dá)于腺癌細(xì)胞［6］。張同海等人聯(lián)合檢測(cè)了TTF1、CK5/6、P63和napsinA在肺鱗癌及腺癌中的表達(dá), 認(rèn)為P63和CK5/6共同陽(yáng)性表達(dá)與TTF1和napsinA共同陰性表達(dá)更支持肺鱗癌, 而非肺腺癌, 反之亦然［7］。楊艷等研究表明, 在肺腺癌中, CK7的靈敏度和特異度分別為98.6%和61.5%, CK18則分別為 98.6%和37.5%［8］。

本研究結(jié)果表明, 在所觀察的56例肺腺癌中, CK7與CK18表達(dá)陽(yáng)性的病例分別為51例及54例, 靈敏度為91.07%及96.43%, 而CK7或CK18表達(dá)陽(yáng)性者共56例, 靈敏度為100%。而兩者在22例肺鱗癌中均為陰性表達(dá), 表明CK7與CK18聯(lián)合運(yùn)用對(duì)肺腺癌診斷意義明確, 與文獻(xiàn)報(bào)道相符。同時(shí)14例腺鱗癌中的腺癌成份均可檢測(cè)到CK7及CK18的表達(dá)。而CK7在大細(xì)胞癌中部分表達(dá), 在小細(xì)胞癌中不表達(dá)。但CK18在小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中均為陽(yáng)性表達(dá),提示小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌與低分化腺癌的鑒別仍需要其它分子標(biāo)志物的加入。

在對(duì)CK5/6及P63的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn), 二者在22例肺鱗癌組織中均為陽(yáng)性表達(dá), 陽(yáng)性率100%, 在56例肺腺癌中均為陰性表達(dá), 提示CK5/6與P63聯(lián)用可準(zhǔn)確鑒別肺鱗癌與腺癌,與文獻(xiàn)報(bào)道相符［9-11］。P63在腺鱗癌中部分表達(dá)陽(yáng)性, CK5/6在85.71%的腺鱗癌中局灶表達(dá)陽(yáng)性。在8例小細(xì)胞癌和4例大細(xì)胞癌中CK5/6表達(dá)均為陰性；P63在大細(xì)胞癌中無(wú)陽(yáng)性表達(dá), 在小細(xì)胞癌中有25%呈局灶陽(yáng)性表達(dá)。結(jié)合CK7的檢測(cè)結(jié)果, 可發(fā)現(xiàn)在小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中, 上皮標(biāo)志物表達(dá)水平較低, 與其分化較差相符合。

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Analysis of the expression of CK7, CK18, CK5/6 and P63 in various types of lung cancer tissues

ZHU Dong-lin, SHEN Rong-ming, LIU Xiao-qiang, et al.
Department of Thoracic Surgery, Suzhou Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Suzhou 215000, China

Objective To evaluate the expression of CK7, CK18, CK5/6 and P63 in various types of lung cancer. Methods The expression of CK7, CK18, CK5/6 and P63 proteins in 104 specimens of lung cancer were detected by immunohistochemistry. And the expression of CK7, CK18, CK5/6 and P63 in different types of lung cancer tissues were also analyzed. Results The positive expression of CK7 in adenocarcinoma, adenosquamous carcinoma and large cell carcinoma were 91.07%, 85.71% and 50.00% respectively. And there was no positive expression in squamous cell carcinoma and small cell carcinoma. The positive expression of CK18 in adenocarcinoma, adenosquamous carcinoma, small cell carcinoma and large cell carcinoma were 96.43%, 85.71%, 100 % and 100% respectively. And there was no positive expression in squamous cell carcinoma. The positive expression of CK5/6 in squamous cell carcinoma was 100%. And there was no positive expression in adenocarcinoma, adenosquamous carcinoma, small cell carcinoma and large cell carcinoma. The positive expression of P63 in squamous cell carcinoma and adenosquamous carcinoma were 100% and 14.29%. There was no positive expression in adenocarcinoma, small cell carcinoma and large cell carcinoma. Conclusion CK7and CK18 can be used in diagnosis of lung adenocarcinoma. CK5/6 and P63 can be used in diagnosis of lung squamous cell carcinoma. Meanwhile, CK18 can be used in the diagnosis of lung small cell carcinoma and large cell carcinoma.

Lung cancer; Immunohistochemistry; CK7; CK18; CK5/6; P63

215000 南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院/蘇州市立醫(yī)院東區(qū)胸外科