miR—126調(diào)控SKOV3卵巢癌細(xì)胞周期的實驗研究

羅建橋++++++鮑春曉++++++周建維

[摘要] 目的 探討miR-126對卵巢癌細(xì)胞株的細(xì)胞周期和形態(tài)的影響，評價miR-126靶向調(diào)控卵巢癌增殖侵襲的作用。 方法 體外培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3，通過慢病毒包裝miR-126并轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞系，將其分為三組：轉(zhuǎn)染miR-126表達(dá)組（SKOV3/LV3-has-miR-126組）、轉(zhuǎn)染陰性對照組（SKOV3/LV3NC組）和空白對照組（SKOV3組），觀察轉(zhuǎn)染miR-126后細(xì)胞形態(tài)變化，并用流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞的細(xì)胞周期，分析轉(zhuǎn)染miR-126后細(xì)胞形態(tài)與細(xì)胞周期的改變情況。 結(jié)果 轉(zhuǎn)染miR-126后卵巢癌細(xì)胞組短梭形細(xì)胞居多，片狀偽足減少，這均不有利于腫瘤細(xì)胞的遷移。同時SKOV3組、SKOV3/LV3NC組、SKOV3/LV3-has-miR-126組S期細(xì)胞平均比例分別為（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%，而G1細(xì)胞比例則分別為（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%，可見SKOV3組和SKOV3/LV3NC組細(xì)胞S期和G1期細(xì)胞比例相近（P > 0.05），而與其他兩組比較，SKOV3/LV3-has-miR-126組的細(xì)胞S期增殖指數(shù)較低，而停留在G1的細(xì)胞比例則較高，兩期比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 經(jīng)miR-126轉(zhuǎn)染后SKOV3卵巢癌細(xì)胞S期合成顯著抑制，而G1期細(xì)胞明顯增加，細(xì)胞偽足減少，提示轉(zhuǎn)染miR-126的SKOV3卵巢癌細(xì)胞其增殖和侵襲能力降低。

[關(guān)鍵詞] miR-126；卵巢癌；細(xì)胞周期；侵襲

[中圖分類號] R737.31 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）07（a）-0021-04

卵巢癌是婦科常見腫瘤之一，其早期癥狀隱匿，因此約70%卵巢癌患者在確診時已處于癌癥晚期。卵巢癌具有較強(qiáng)的惡性生物學(xué)行為，易發(fā)生腹腔內(nèi)的廣泛種植，已成為影響婦女生命的最主要的腫瘤之一[1-2]。卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生的各種并發(fā)癥及器官衰竭是卵巢癌患者死亡的主要原因，目前卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制尚未完全明確，而闡明其侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制是卵巢癌根治的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，因此，卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制已成為國內(nèi)外研究的熱點，一般認(rèn)為惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移涉及腫瘤細(xì)胞從原發(fā)灶的脫離、蛋白酶水解周圍基底膜以及腫瘤細(xì)胞遷移到蛋白酶水解部位等過程[3-5]，上述的腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程具有腫瘤血管依賴性，其中血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及其受體調(diào)控途徑是腫瘤血管形成的最重要因素。郎景和課題組研究表明卵巢癌患者術(shù)前血清VEGF水平是影響卵巢癌預(yù)后的獨立因素，且與卵巢癌的復(fù)發(fā)密切相關(guān)，VEGF表達(dá)水平升高是患者預(yù)后不良的標(biāo)志[6]，因此如何從源頭上抑制VEGF的表達(dá)無疑成為卵巢癌的有效治療方法之一。

microRNA是真核細(xì)胞內(nèi)的非編碼微小RNA，大量研究表明miRNA與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，其可能發(fā)揮著抑癌基因或癌基因的作用[6-7]。miR-126是作為一種特異性表達(dá)的microRNA，是新近被鑒定的血管生成相關(guān)microRNA，它們來源于共同的前體結(jié)構(gòu)，位于染色體9q34.3上EGFL7基因內(nèi)含子中，少數(shù)情況下也可位于EGFL7基因外顯子及部分非編碼區(qū)域，研究證實miR-126通過VEGF mRNA 3'UTR中的互補(bǔ)位點結(jié)合，在翻譯水平抑制VEGF的表達(dá)[8-9]，它能夠通過調(diào)控VEGF等基因的表達(dá)參與調(diào)控血管發(fā)育，新生血管形成以及血管炎性反應(yīng)等血管的生理和病理生理過程[10]。研究表明miR-126可以抑制多種腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移，如肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌等，提示miR-126可能具有潛在的抑癌基因作用，但其在卵巢癌中的作用尚未闡明[11-13]。本研究通過體外培養(yǎng)SKOV3卵巢癌細(xì)胞株，同時通過慢病毒轉(zhuǎn)染miR-126的基因，復(fù)制SKOV3卵巢癌細(xì)胞株miR-126過表達(dá)模型，以探討miR-126對卵巢癌細(xì)胞株的細(xì)胞周期及細(xì)胞形態(tài)改變的影響，評價miR-126靶向調(diào)控卵巢癌增殖侵襲的作用。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)

SKOV3細(xì)胞株購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司，將SKOV3細(xì)胞移入培養(yǎng)瓶中，加入新鮮培養(yǎng)液，適當(dāng)稀釋細(xì)胞（含細(xì)胞的凍存液：新鮮培養(yǎng)液=1︰9），放置CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后換液去除二甲亞砜（DMSO）；或者將細(xì)胞低速離心（1500 r/min，5 min）以直接去除含DMSO的培養(yǎng)液，然后加入新鮮培養(yǎng)基，輕輕吹打接種到培養(yǎng)瓶中。

1.2 慢病毒轉(zhuǎn)染

miR-126質(zhì)粒構(gòu)建和慢病毒包裝由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司完成，參照慢病毒說明書，取對數(shù)生長期細(xì)胞，接種于6 cm培養(yǎng)皿，每孔細(xì)胞數(shù)為3×105個，加2 mL全培養(yǎng)基培養(yǎng)，24 h后待細(xì)胞長至80%～90%融合時，用2 mL無血清培養(yǎng)基洗細(xì)胞1次，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染。實驗分3組：轉(zhuǎn)染miR-126表達(dá)組（SKOV3/LV3-has-miR-126組）：1 mL培養(yǎng)基+45 μL LV3-has-miR-126慢毒原液+1 μL 5 g/L凝聚胺溶液（polybrene）；轉(zhuǎn)染陰性對照組（SKOV3/LV3NC組）：1 mL培養(yǎng)基+45 μL LV3NC慢病毒原液+1 μL 5 g/L polybrene；空白對照組（SKOV3組）：1 mL培養(yǎng)基+1 μL l5 g/L polybrene，混合均勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，然后更換正常的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，取出培養(yǎng)皿，直接在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察、細(xì)胞計數(shù)并拍照，隨機(jī)計數(shù)100個細(xì)胞，計算有綠色熒光的細(xì)胞所占細(xì)胞總數(shù)的百分比，即為轉(zhuǎn)染效率。LV3-has-miR-126寡核苷酸序列為5'-TCGTACCGTGAGTAATAATGCG-3'，LV3NC寡核苷酸序列為5'-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3'。慢病毒上均含有編碼GFP的基因，故轉(zhuǎn)染細(xì)胞在熒光顯微鏡下可激發(fā)出綠色熒光。在熒光顯微鏡下觀察計數(shù)，細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率為70%～90%。

1.3 細(xì)胞生長周期檢測

對數(shù)期生長的細(xì)胞（細(xì)胞總數(shù)≥1×106個），0.25%胰酶消化成細(xì)胞懸液，1500 r/min離心10 min，棄上清；PBS洗滌1次，1500 r/min離心10 min，棄上清；加入0.3 mL PBS（含10%小牛血清30 μL）重懸；懸液加至放有0.7 mL無水乙醇的EP管內(nèi)，20℃保存。碘化丙啶（PI）染色：-20℃固定的細(xì)胞3000 r/min離心1 min，PBS洗滌兩次，每次1500 r/min離心10 min，棄上清，加入0.1 mL RNaseA（1 mg/mL），37℃水浴30 min，加入0.4 mL PI，暗處染色20 min。流式細(xì)胞儀分析DNA含量分布、Multicycle軟件分析DNA合成前期（G1），DNA合成期（S）細(xì)胞的比例。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果

三組細(xì)胞均呈單層貼壁生長，SKOV3組和陰性轉(zhuǎn)染對照組細(xì)胞為短梭形或呈多角形，胞核均呈圓形或橢圓形胞質(zhì)透亮。LV3-has-miR-126組卵巢癌細(xì)胞組短梭形細(xì)胞居多，片狀偽足減少，提示miR-126可一定程度上改變卵巢癌細(xì)胞的形態(tài)，這均不有利于腫瘤細(xì)胞的遷移（圖1，封三）。

2.2 三組卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞周期的檢測

經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測三組細(xì)胞的細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)，SKOV3組、SKOV3/LV3NC組、SKOV3/LV3-has-miR-126組S期細(xì)胞平均比例分別為（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%，而G1細(xì)胞比例則分別為（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%，上述數(shù)據(jù)顯示SKOV3組和SKOV3/LV3 NC組細(xì)胞S期和G1期細(xì)胞比例比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）；與SKOV3組和SKOV3/LV3NC組細(xì)胞比較，SKOV3/LV3-has-miR-126組的細(xì)胞S期增殖指數(shù)較低而停留在G1的細(xì)胞比例則較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05），提示miR-126過表達(dá)后，細(xì)胞S期合成受到明顯抑制。

3 討論

近來年，microRNA作為一種真核細(xì)胞內(nèi)的非編碼微小RNA，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用已成為研究的熱點之一。大量研究證明miRNA參與了細(xì)胞的增殖、分化、凋亡，在腫瘤的發(fā)生中，miRNA 扮演著癌基因或者抑癌基因的角色，不同類型的腫瘤發(fā)生中有著不同miRNA表達(dá)的改變，特征性miRNA表達(dá)的改變預(yù)示著腫瘤患者的預(yù)后和生存[14-15]。

上皮性卵巢癌是嚴(yán)重威脅女性健康的常見惡性腫瘤之一，其侵襲轉(zhuǎn)移是卵巢癌致死的重要原因，其發(fā)生機(jī)制目前尚未完全明確[16-17]。研究卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制可以為臨床患者的治療提供實驗基礎(chǔ)，為卵巢癌的治療提供新的靶點。MiR-126是一種新發(fā)現(xiàn)的與血管生成相關(guān)的microRNA，研究發(fā)現(xiàn)miR-126在血管化組織中表達(dá)較正常組織明顯增加，并且，miR-126是目前發(fā)現(xiàn)的唯一的在內(nèi)皮細(xì)胞系和造血始祖細(xì)胞中特異性表達(dá)的miRNA，大量研究表明，miR-126與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，如乳腺癌、肺癌、前列腺癌等，通過抑制腫瘤細(xì)胞的增生、遷移和侵襲轉(zhuǎn)移，或者抑制調(diào)控相關(guān)因子的表達(dá)[11-13]。在原發(fā)性乳腺癌中，miR-126的表達(dá)下降，同時發(fā)現(xiàn)與miR-126表達(dá)高的乳腺癌患者相比，miR-126低表達(dá)的患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力明顯增強(qiáng)，預(yù)后較差[18]。上述研究提示miR-126的表達(dá)水平可能與腫瘤細(xì)胞的增殖與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。細(xì)胞周期通?？蓜澐譃榉至验g期和分裂期，分裂間期是物質(zhì)準(zhǔn)備和積累階段，分裂期則是細(xì)胞增殖的實施過程。整個周期表示為：G1期-S期-G2期-M期，其中分裂間期又常?？梢詣澐譃镚1、S和DNA合成后期（G2），在此期間的任務(wù)主要是完成染色質(zhì)中的DNA復(fù)制和相關(guān)蛋白質(zhì)的合成，通常認(rèn)為細(xì)胞S期細(xì)胞數(shù)目與增殖密切相關(guān)，而G1的細(xì)胞比例高認(rèn)為細(xì)胞增殖抑制[19-20]，本研究結(jié)果顯示，SKOV3/LV3-has-miR-126組的細(xì)胞S期細(xì)胞明顯減少，而停留在G1的細(xì)胞比例則較高，表明miR-126過表達(dá)后，細(xì)胞S期合成顯著抑制。

綜上所述，SKOV3細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)miR-126后，卵巢癌細(xì)胞形態(tài)呈短梭形，片狀偽足減少，不有利于腫瘤細(xì)胞的遷移。同時S期細(xì)胞減少而G1的細(xì)胞增多，癌細(xì)胞增殖受抑制，提示miR-126是卵巢癌治療的潛在靶點，為卵巢癌的治療提供了新的思路。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Fader AN，Java J，Ueda S，et al. Survival in women with grade 1 serous ovariancarcinoma [J]. Obstet Gynecol，2013，122（2 Pt 1）：225-232.

[2] Kmietowicz Z. Death rate from ovarian cancer in England has fallen by a fifth since 2001 [J]. BMJ，2012，345：e7861.

[3] Ho CS，Yap SH，Phuah NH，et al. MicroRNAs associated with tumour migration，invasion and angiogenic properties in A549 and SK-Lu1 human lung adenocarcinoma cells [J]. Lung Cancer，2014，83（2）：154-162.

[4] 江忠清，陳小芳，孫蓬明，等.不同轉(zhuǎn)移能力的卵巢上皮性癌細(xì)胞中matriptase mRNA和蛋白的表達(dá)及與其轉(zhuǎn)移能力的相關(guān)性[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2013，48（5）：370-374.

[5] 郭清，吳小華.腹腔微環(huán)境與卵巢上皮性癌腹腔轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2013，48（5）：388-390.

[6] 譚先杰，郎景和，沈鏗，等.卵巢上皮性癌患者術(shù)前血清血管內(nèi)皮生長因子與CA125水平的相關(guān)性及其預(yù)測預(yù)后的價值[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2008，43（1）：9-12.

[7] To KK. MicroRNA：a prognostic biomarker and a possible druggable target for circumventing multidrug resistance in cancer chemotherapy [J]. J Biomed Sci，2013，20（1）：99.

[8] Sasahira T，Kurihara M，Bhawal UK，et al. Downregulation of miR-126 induces angiogenesis and lymphangiogenesis by activation of VEGF-A in oral cancer [J]. Br J Cancer，2012，107（4）：700-706.

[9] Zhang Y，Wang X，Xu B，et al. Epigenetic silencing of miR-126 contributes to tumor invasion and angiogenesis in colorectal cancer [J]. Oncol Rep，2013，30（4）：1976-1984.

[10] Li Z，Li N，Wu M，et al. Expression of miR-126 suppresses migration and invasion of colon cancer cells by targeting CXCR4 [J]. Mol Cell Biochem，2013，381（1-2）：233-242.

[11] Zhu X，Li H，Long L，et al. miR-126 enhances the sensitivity of non-small cell lung cancer cells to anticancer agents by targeting vascular endothelial growth factor A [J]. Acta Biochim Biophys Sin （Shanghai），2012，44（6）：519-526.

[12] Bai Y，Bai X，Wang Z，et al. MicroRNA-126 inhibits ischemia-induced retinal neovascularization via regulating angiogenic growth factors [J]. Exp Mol Pathol，2011，91（1）：471-477.

[13] Donnem T，Lonvik K，Eklo K，et al. Independent and tissue-specific prognostic impact of miR-126 in nonsmall cell lung cancer：coexpression with vascular endothelial growth factor-A predicts poor survival [J]. Cancer，2011， 117（14）：3193-3200.

[14] Zhou X，Liu J，Ye X，et al. Ensemble classifier based on context specific miRNA regulation modules： a new method for cancer outcome prediction [J]. BMC Bioinformatics，2013，14（12）：6.

[15] Yan JW，Lin JS，He XX. The emerging role of miR-375 in cancer [J]. Int J Cancer，2013，1（1）：122-124.

[16] Liliac L，Amalinei C，Balan R，et al. Ovarian cancer：insights into genetics and pathogeny [J]. Histol Histopathol，2012，27（6）：707-719.

[17] Rosanò L，Spinella F，Bagnato A. The importance of endothelin axis in initiation，progression， and therapy of ovarian cancer [J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol，2010，299（2）：395-404.

[18] Hoppe R，Achinger-Kawecka J，Winter S，et al. Increased expression of miR-126 and miR-10a predict prolonged relapse-free time of primary oestrogen receptor-positive breast cancer following tamoxifen treatment [J]. Eur J Cancer，2013，49（17）：3598-3608.

[19] Yang ZL，Cheng K，Han ZD. Effect of bFGF on the MCF-7 cell cycle with CD44（+）/CD24（-）：promoting the G0/G1→G2/S transition [J]. J Breast Cancer，2012，15（4）：388-392.

[20] Ho K，Yazan LS，Ismail N， et al. Apoptosis and cell cycle arrest of human colorectal cancer cell line HT-29 induced by vanillin [J]. Cancer Epidemiol，2009，33（2）：155-160.

（收稿日期：2014-03-31 本文編輯：任 念）

[4] 江忠清，陳小芳，孫蓬明，等.不同轉(zhuǎn)移能力的卵巢上皮性癌細(xì)胞中matriptase mRNA和蛋白的表達(dá)及與其轉(zhuǎn)移能力的相關(guān)性[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2013，48（5）：370-374.

[5] 郭清，吳小華.腹腔微環(huán)境與卵巢上皮性癌腹腔轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2013，48（5）：388-390.

[6] 譚先杰，郎景和，沈鏗，等.卵巢上皮性癌患者術(shù)前血清血管內(nèi)皮生長因子與CA125水平的相關(guān)性及其預(yù)測預(yù)后的價值[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2008，43（1）：9-12.

[7] To KK. MicroRNA：a prognostic biomarker and a possible druggable target for circumventing multidrug resistance in cancer chemotherapy [J]. J Biomed Sci，2013，20（1）：99.

[8] Sasahira T，Kurihara M，Bhawal UK，et al. Downregulation of miR-126 induces angiogenesis and lymphangiogenesis by activation of VEGF-A in oral cancer [J]. Br J Cancer，2012，107（4）：700-706.

[9] Zhang Y，Wang X，Xu B，et al. Epigenetic silencing of miR-126 contributes to tumor invasion and angiogenesis in colorectal cancer [J]. Oncol Rep，2013，30（4）：1976-1984.

[10] Li Z，Li N，Wu M，et al. Expression of miR-126 suppresses migration and invasion of colon cancer cells by targeting CXCR4 [J]. Mol Cell Biochem，2013，381（1-2）：233-242.

[11] Zhu X，Li H，Long L，et al. miR-126 enhances the sensitivity of non-small cell lung cancer cells to anticancer agents by targeting vascular endothelial growth factor A [J]. Acta Biochim Biophys Sin （Shanghai），2012，44（6）：519-526.

[12] Bai Y，Bai X，Wang Z，et al. MicroRNA-126 inhibits ischemia-induced retinal neovascularization via regulating angiogenic growth factors [J]. Exp Mol Pathol，2011，91（1）：471-477.

[13] Donnem T，Lonvik K，Eklo K，et al. Independent and tissue-specific prognostic impact of miR-126 in nonsmall cell lung cancer：coexpression with vascular endothelial growth factor-A predicts poor survival [J]. Cancer，2011， 117（14）：3193-3200.

[14] Zhou X，Liu J，Ye X，et al. Ensemble classifier based on context specific miRNA regulation modules： a new method for cancer outcome prediction [J]. BMC Bioinformatics，2013，14（12）：6.

[15] Yan JW，Lin JS，He XX. The emerging role of miR-375 in cancer [J]. Int J Cancer，2013，1（1）：122-124.

[16] Liliac L，Amalinei C，Balan R，et al. Ovarian cancer：insights into genetics and pathogeny [J]. Histol Histopathol，2012，27（6）：707-719.

[17] Rosanò L，Spinella F，Bagnato A. The importance of endothelin axis in initiation，progression， and therapy of ovarian cancer [J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol，2010，299（2）：395-404.

[18] Hoppe R，Achinger-Kawecka J，Winter S，et al. Increased expression of miR-126 and miR-10a predict prolonged relapse-free time of primary oestrogen receptor-positive breast cancer following tamoxifen treatment [J]. Eur J Cancer，2013，49（17）：3598-3608.

[19] Yang ZL，Cheng K，Han ZD. Effect of bFGF on the MCF-7 cell cycle with CD44（+）/CD24（-）：promoting the G0/G1→G2/S transition [J]. J Breast Cancer，2012，15（4）：388-392.

[20] Ho K，Yazan LS，Ismail N， et al. Apoptosis and cell cycle arrest of human colorectal cancer cell line HT-29 induced by vanillin [J]. Cancer Epidemiol，2009，33（2）：155-160.

（收稿日期：2014-03-31 本文編輯：任 念）

[4] 江忠清，陳小芳，孫蓬明，等.不同轉(zhuǎn)移能力的卵巢上皮性癌細(xì)胞中matriptase mRNA和蛋白的表達(dá)及與其轉(zhuǎn)移能力的相關(guān)性[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2013，48（5）：370-374.

[5] 郭清，吳小華.腹腔微環(huán)境與卵巢上皮性癌腹腔轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2013，48（5）：388-390.

[6] 譚先杰，郎景和，沈鏗，等.卵巢上皮性癌患者術(shù)前血清血管內(nèi)皮生長因子與CA125水平的相關(guān)性及其預(yù)測預(yù)后的價值[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2008，43（1）：9-12.

[7] To KK. MicroRNA：a prognostic biomarker and a possible druggable target for circumventing multidrug resistance in cancer chemotherapy [J]. J Biomed Sci，2013，20（1）：99.

[8] Sasahira T，Kurihara M，Bhawal UK，et al. Downregulation of miR-126 induces angiogenesis and lymphangiogenesis by activation of VEGF-A in oral cancer [J]. Br J Cancer，2012，107（4）：700-706.

[9] Zhang Y，Wang X，Xu B，et al. Epigenetic silencing of miR-126 contributes to tumor invasion and angiogenesis in colorectal cancer [J]. Oncol Rep，2013，30（4）：1976-1984.

[10] Li Z，Li N，Wu M，et al. Expression of miR-126 suppresses migration and invasion of colon cancer cells by targeting CXCR4 [J]. Mol Cell Biochem，2013，381（1-2）：233-242.

[11] Zhu X，Li H，Long L，et al. miR-126 enhances the sensitivity of non-small cell lung cancer cells to anticancer agents by targeting vascular endothelial growth factor A [J]. Acta Biochim Biophys Sin （Shanghai），2012，44（6）：519-526.

[12] Bai Y，Bai X，Wang Z，et al. MicroRNA-126 inhibits ischemia-induced retinal neovascularization via regulating angiogenic growth factors [J]. Exp Mol Pathol，2011，91（1）：471-477.

[13] Donnem T，Lonvik K，Eklo K，et al. Independent and tissue-specific prognostic impact of miR-126 in nonsmall cell lung cancer：coexpression with vascular endothelial growth factor-A predicts poor survival [J]. Cancer，2011， 117（14）：3193-3200.

[14] Zhou X，Liu J，Ye X，et al. Ensemble classifier based on context specific miRNA regulation modules： a new method for cancer outcome prediction [J]. BMC Bioinformatics，2013，14（12）：6.

[15] Yan JW，Lin JS，He XX. The emerging role of miR-375 in cancer [J]. Int J Cancer，2013，1（1）：122-124.

[16] Liliac L，Amalinei C，Balan R，et al. Ovarian cancer：insights into genetics and pathogeny [J]. Histol Histopathol，2012，27（6）：707-719.

[17] Rosanò L，Spinella F，Bagnato A. The importance of endothelin axis in initiation，progression， and therapy of ovarian cancer [J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol，2010，299（2）：395-404.

[18] Hoppe R，Achinger-Kawecka J，Winter S，et al. Increased expression of miR-126 and miR-10a predict prolonged relapse-free time of primary oestrogen receptor-positive breast cancer following tamoxifen treatment [J]. Eur J Cancer，2013，49（17）：3598-3608.

[19] Yang ZL，Cheng K，Han ZD. Effect of bFGF on the MCF-7 cell cycle with CD44（+）/CD24（-）：promoting the G0/G1→G2/S transition [J]. J Breast Cancer，2012，15（4）：388-392.

[20] Ho K，Yazan LS，Ismail N， et al. Apoptosis and cell cycle arrest of human colorectal cancer cell line HT-29 induced by vanillin [J]. Cancer Epidemiol，2009，33（2）：155-160.

（收稿日期：2014-03-31 本文編輯：任 念）