高效液相法測(cè)定補(bǔ)中益氣丸中甘草苷和橙皮苷含量

劉福寶 梁良 王喆 劉麗芳 邊虹錚 王樂 趙永芳

·藥物研究·

高效液相法測(cè)定補(bǔ)中益氣丸中甘草苷和橙皮苷含量

劉福寶 梁良 王喆 劉麗芳 邊虹錚 王樂 趙永芳

目的建立測(cè)定補(bǔ)中益氣丸中甘草苷含量的方法。方法采用高效液相色譜法。C18柱，乙腈-0.05%醋酸溶液(20∶80)為流動(dòng)相，流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)276 nm，柱溫：室溫。結(jié)果在0.025～0.150 μg范圍內(nèi)，甘草苷進(jìn)樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)；平均回收率為99.25%，RSD為1.3%(n=9)。結(jié)論該方法靈敏度高、重復(fù)性好，可用于補(bǔ)中益氣丸中甘草苷含量的測(cè)定。

補(bǔ)中益氣丸；高效液相色譜法；甘草苷；含量測(cè)定

補(bǔ)中益氣丸源自李東垣《脾胃論》中的“補(bǔ)中益氣湯”，由君藥黃茂，臣藥黨參、白術(shù)、甘草，佐藥當(dāng)歸、陳皮，使藥升麻、柴胡組成。具有補(bǔ)中益氣、升陽(yáng)舉陷，健脾潤(rùn)腸等功效。藥理學(xué)研究表明補(bǔ)中益氣丸對(duì)免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等均有良好的調(diào)節(jié)作用，并能增強(qiáng)機(jī)體非特異性抵抗力、抗菌、抗病毒等。補(bǔ)中益氣丸在2010年版藥典一部的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有黃芪甲苷的含量測(cè)定，為更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，完善和提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文利用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)對(duì)補(bǔ)中益氣丸中的甘草苷進(jìn)行了含量測(cè)定方法學(xué)研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 LC-10ATvp型溶劑輸送泵，SPD-10ATvp型紫外檢測(cè)器(日本島津公司)；日本島津色譜工作站(Lcsolution Lite)；數(shù)控超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)；BP211D電子天平(SARTORIUS AG)。色譜純乙腈；水為純凈水；其它試劑均為分析純；甘草苷(批號(hào)：110781-200612，中檢所)；補(bǔ)中益氣丸(天津某藥廠，批號(hào)：110801)。

1.2 甘草苷的含量測(cè)定

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈- 0.05%醋酸溶液(20∶80)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為276 nm；理論板數(shù)按甘草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。

1.2.2 干擾性試驗(yàn)：按照處方制備不含炙甘草的陰性樣品，按擬定的含量測(cè)定方法制備陰性對(duì)照液，進(jìn)樣分析。

1.2.3 線性關(guān)系試驗(yàn)：取甘草苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為5.0 μg/ml，10.0 μg/ml，15.0 μg/ml，20.0 μg/ml和30.0 μg/ml的溶液，分別吸取5 μl進(jìn)樣分析。在上述色譜條件下，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，以峰面積值為縱坐標(biāo)作圖，制得甘草苷回歸方程。

1.2.4 回收率試驗(yàn)：稱取已知含量的樣品約0.75 g，平行9份，其中3份分別加入濃度為24.48 μg/ml甘草苷對(duì)照品溶液各5 ml，3份分別加入41 μg/ml甘草苷對(duì)照品溶液各5 ml，3份分別加入57.24 μg/ml甘草苷對(duì)照品溶液各5 ml，照“供試品溶液制備”項(xiàng)下操作，測(cè)定，以下式計(jì)算方法的回收率。

1.2.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)：稱取樣品約1.5 g，精密稱定，照確定的方法制備供試品溶液，取上述供試液，分別于0、2、4、8、12 h時(shí)，進(jìn)樣5 μl，測(cè)得樣品中甘草苷峰面積值。

1.2.6 精密度試驗(yàn)：精密吸取濃度為15.0 μg/ml的甘草苷對(duì)照品溶液各5 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定其峰面積。

1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)：按擬定的含量測(cè)定方法，對(duì)同一批樣品，分別制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣5 μl，測(cè)定峰面積值并計(jì)算含量。

2 結(jié)果

2.1 干擾性試驗(yàn) 按照處方制備不含炙甘草的陰性樣品，按擬定的含量測(cè)定方法制備陰性對(duì)照液，進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示對(duì)照品溶液和供試品溶液甘草苷峰相同保留時(shí)間位置陰性未見有峰干擾，說明補(bǔ)中益氣丸中其他藥材及輔料對(duì)本方法測(cè)定甘草苷的含量無干擾。

2.2 線性關(guān)系試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)條件下，以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，以峰面積值為縱坐標(biāo)作圖，制得甘草苷回歸方程為：Y=10080X+2612.5，r=0.9999；以上結(jié)果表明：在0.025～0.150 μg范圍內(nèi)，甘草苷進(jìn)樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系，實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。實(shí)驗(yàn)中對(duì)樣品的測(cè)定采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算甘草苷的含量。

2.3 回收率試驗(yàn) 試驗(yàn)結(jié)果表明，平均回收率為99.25%，RSD為1.3%，加樣回收率良好。見表1。

表1 甘草苷含量回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)得樣品中甘草苷峰面積值。試驗(yàn)結(jié)果證明，樣品溶液在12 h內(nèi)基本保持穩(wěn)定。見表2。

表2 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 精密度試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定其峰面積，試驗(yàn)結(jié)果表明，精密度良好，RSD為1.4%。見表3。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定峰面積值并計(jì)算含量。見表4。

3 討論

中藥組方成分復(fù)雜，中藥的質(zhì)量控制亦是世界范圍內(nèi)的熱點(diǎn)問題。由于客觀條件所限，仿照西藥的標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)定單一的成分作為質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)是目前的主流方式，但具有很大局限性，不能全面評(píng)價(jià)中藥組方的藥理學(xué)作用和臨床療效。補(bǔ)中益氣丸源自于經(jīng)典名方，能增強(qiáng)機(jī)體非特異性抵抗力、抗菌、抗病毒等[1]。目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)只是規(guī)定了黃芪中黃芪甲苷的含量限度，檢測(cè)手段單一，不能全面反映含有多種成分的補(bǔ)中益氣丸的質(zhì)量，在一定程度上影響其臨床評(píng)價(jià)。有文獻(xiàn)報(bào)道了芒柄花黃素、橙皮苷及甘草酸的含量測(cè)定方法[2-4]，尚未見甘草苷的含量測(cè)定，本文建立了甘草苷的HPLC含量測(cè)定方法，方法簡(jiǎn)單易行，重現(xiàn)性好，回收率和精密度較高，方法結(jié)果可靠，為補(bǔ)中益氣丸的質(zhì)量研究提供了重要依據(jù)。

1 孫國(guó)祥,蔡新鳳.補(bǔ)中益氣丸高效液相色譜數(shù)字化指紋圖譜研究.中南藥學(xué)，2010,8:226-230.

2 董秀麗,李洪娟.HPLC法測(cè)定補(bǔ)中益氣丸中芒柄花黃素的含量.中國(guó)藥房,2012,23:3440-3441.

3 李洪剛,熊勝元,楊修齊,等.高效液相色譜法測(cè)定補(bǔ)中益氣丸中甘草酸含量.中國(guó)藥業(yè),2005,14:43.

4 徐端瓊.高效液相色譜法測(cè)定補(bǔ)中益氣丸中橙皮營(yíng)的含量.海峽藥學(xué),2007,19:48-50.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.15.055

054000 河北省邢臺(tái)市疾病預(yù)防控制中心(劉福寶)；河北省疾病預(yù)防控制中心(梁良、王喆)；河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院(劉麗芳、邊虹錚、王樂)；河北省任丘市人民醫(yī)院內(nèi)三科(趙永芳)

梁良，050021 石家莊市，河北省疾病預(yù)防控制中心；

E-mail：1127514740@qq.com

R 932

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1002-7386(2014)15-2365-03

2014-01-13)