甘肅地區(qū)164例宮頸癌人乳頭瘤病毒基因分型檢測的研究

馮淑嫻,王 勇

(1.蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院473臨床部 婦產科,甘肅 蘭州,730070; 2.甘肅中醫(yī)學院,甘肅 蘭州,730000)

子宮頸癌是女性生殖道發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，中國每年新發(fā)病例在13萬以上，每年有2～3萬婦女死于宮頸癌。近年來發(fā)病率明顯上升，呈年輕化趨勢，且發(fā)病率很不平衡，其中西北部甘肅地區(qū)發(fā)病率居全國高發(fā)地區(qū)之一[1]?；A研究和流行病學調查已經明確人乳頭瘤病毒(HPV)是宮頸癌發(fā)生的主要因素，且為始動因素[2],HPV已知100多種亞型，其亞型因區(qū)域和種族的不同而存在差異。本實驗對甘肅省164例宮頸癌和100例其他生殖道疾病患者樣本HPV感染情況進行分析，以了解甘肅地區(qū)婦女生殖道HPV感染和分布情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年4月—2013年4月蘭州軍區(qū)蘭州總院婦產科不同生殖道疾病患者的標本，每1份標本為刷取宮頸口棉拭子，均來源于甘肅地區(qū)，無放化療病史。第1組包含164份來自診斷宮頸癌的樣本，平均(48.2±11.5)歲。第2組包含100份患有其他生殖道疾病的樣本(包括子宮肌瘤，宮頸糜爛，卵巢腫瘤，陰道炎，尖銳濕疣，支原體衣原體感染)，平均年(38.9±9.9)歲。所有標本采集和診治過程均經患者同意。

1.2 主要試劑

HPV DNA 抽提試劑盒購自QI AGEN公司。HPV-21分型檢測采用香港凱普公司的HPV基因微陣列分型檢測試劑盒和HybriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀。

1.3 HPV分型檢測

采用HybriMax技術對21種HPV亞型進行檢測。21種HPV分為高危型和低危型兩類,高危型(HR-HPV)15種，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68，低危型(low-risk types,LR-HPV)6種HPV6、11、41、42、44同CP8304，結果判讀，按芯片上HPV亞型分布的相應著色位點判斷。有兩型或兩型以上屬多重感染。

2 結 果

164個宮頸癌患者樣本中140個HPV DNA呈陽性，占85.4%,多數(shù)(112/140)是由單基因型感染引起，特別是HPV-16單基因感染占90例(80.4%),其余22例單基因感染者中HPV-52,-58,-18,-59各4例(3.6%,each),HPV-31,-33各2例(1.8%,each)和HPV-6 2例(1.8%)。140例中剩余28例(20%)DNA檢測是2種或2種以上基因型陽性,28例中20例是2種基因型感染，這20例患者中，10例是由HPV-16和1種低危型HPV感染(8例與HPV-11有關，2例與HPV-42有關),4例是HPV-16和-66,2例是HPV-16和-33,2例是HPV-53和-66,另2例是HPV-16和-CP8304。28例中6例是由3種基因型多型感染,2例是HPV-16,-52和-66感染，2例是HPV-45,-52和-6感染，另2例是HPV-16,-18和-58感染。剩余2例多重感染的病例是由4種基因型感染，它們是HPV-52,-53,-33和-CP8304?？傮w來說，在第1組中14種HPV基因型被檢出，包括10種高危型(HPV-16,-18,-31,-33,-45,-52,-53,-58,-59和-66)和4種低危型(HPV-6,-11,-42和-CP8304)，基因型的陽性比率HPV-16(68.3%、112/164),HPV-52 (6.1%、10/164),HPV-58,-18，-33(3.7%,each、6/164),HPV-59(2.4%、4/164),HPV-31,-45(1.2%,each、2/164),HPV-6(1.2%、2/164),HPV-11(4.9%、8/164),HPV-42(1.2%、2/164)和HPV-CP8304(2.4%、4/164)型。見表1。

100例其他生殖系統(tǒng)疾病患者中,28例HPV DNA呈陽性，占28%。28例中22例(78.6%)HPV DNA陽性病例是由單基因型感染，包括6例HPV-16陽性,6例HPV-11陽性,4例HPV-52陽性,2例HPV-18陽性,2例HPV-68陽性和2例HPV-39陽性。其余病例(21.4%)是由HPV多基因型感染，包括2例HPV-16和-11陽性,2例HPV-16，-52和-58陽性，2例HPV-16,-31,-59和-68陽性。總體，在這些患者中有9種HPV基因型被檢測到，包括8種高危型(HPV-16,-52,-68,-18,-31,-59,-39和-58)和1種低危型(HPV-11)。基因型的陽性比率HPV-16(12%、12/100),HPV-11(8%、8/100),HPV-52 (6%、6/100),HPV-68(4%、4/100),HPV-18,-31,-59,-39和HPV-58(2%,each、2/100)。見表1。

表1 HPV DNA檢測結果

3 討 論

近年來，女性生殖道的HPV感染由于與宮頸癌的密切關系而越來越受到人們的重視，HPV是一種雙鏈球形DNA病毒，具有組織特異性，只能感染人的皮膚和黏膜上皮細胞。迄今已確定基因組全序列的HPV基因型有85種，約40種與人類生殖道感染有關，而且不同HPV亞型的感染其致病性和后果也有差異[3],高危型如HPV-16、-18和-58,90%與高度宮頸上皮內瘤樣變、不典型增生和癌變有關；低危型如HPV-6、-11等，引起生殖道尖銳濕疣和低度宮頸上皮內病變。許多國家學者研究HPV分型分布。盡管之前關于HPV DNA在宮頸癌的陽性率報道不完全一致，大多數(shù)報道[4-5]陽性率范圍在83%～96%之間，本組研究的164例宮頸癌標本中，發(fā)現(xiàn)HPV DNA陽性率85.4%,在此范圍間。報告的差異性主要是由于不同地區(qū)HPV患病率不同和檢測方法的區(qū)別。在宮頸癌患者中HPV-16、-18作為常規(guī)分型檢測，導致高達70%的檢出率[6]。其他HPV的分型不同地區(qū)報道不同。因而，不同地區(qū)和人群HPV亞型感染的分布資料，是生殖道疾病防治策略的基礎。

HPV感染非常普遍，這種感染通常是“一過性”的,90%可以自行清除(4～6個月)，其中低危型HPV(平均時間8.2月)，高危型HPV(平均時間13.5月),10%高危型HPV持續(xù)性感染，只有持續(xù)感染才會造成宮頸癌，一般歷時7～10年[7]。目前,HPV感染的診斷基于病毒DNA的檢測。在本組研究中，盡管8種HPV高危型在2組中都檢測到，宮頸癌患者中高危型的陽性率比其他生殖道疾病(陽性率28%)明顯增加,2組中HPV感染率有顯著性差異(P<0.005)。宮頸癌組檢測到常見的7種基因型是HPV-16(80.0%),HPV-52(7.1%),HPV-66和HPV-11(5.7% each),和HPV-58,HPV-18和HPV-33(4.3% each)。與亞洲HPV亞型前5型16、18、45、58、52基本一致，由于地區(qū)特性,HPV-45陽性比例僅1.2%。在所有基因型中HPV-16是檢測到的最常見基因型，因為宮頸癌HPV DNA陽性中80%是HPV-16單獨感染或與其他基因型聯(lián)合感染。HPV-52相對也常見。在甘肅地區(qū)HPV-58和-18是不常見亞型，兩型陽性率均為4.3%,這與之前的報道存在差異[8],有2種可能原因，一種是在中國不同地區(qū)HPV基因型分布不同，比如說，HPV-58在南方檢出比北方高，而本組樣本取自西北方甘肅；另外一種原因考慮是HPV DNA檢測方法不同，結果不同。本組采用HybriMax技術，此技術檢測HPV分型準確性高，對發(fā)現(xiàn)HPV有較好的敏感性和特異性，是臨床HPV感染分型檢測的有效方法[9]。

本研究中，多重感染率明顯低于單一感染率。第1組多重感染28例(17.1%),主要是二重感染(71.4%),以HPV-16亞型為主，常見的有: 16+11,16+42,16+66,16+33,53+66,其中發(fā)現(xiàn)HPV-66在多重感染中檢出率較高，低危型HPV-11總是伴隨HPV-16。三重及以上感染中HPV-52常見,52+45+6，52+16+66，52+53+33+CP8304。第2組多型感染6例(6.0%)，2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。這與報道[10]一致。多種HPV復合感染可以是同時感染不同的HPV類型，也有可能是多次感染導致，由于HPV感染后大部分被機體清除，因此本組研究可能低估了多種HPV復合感染率，尚需大樣本實驗進一步驗證。

盡管這項研究建立在小樣本上，但對HPV感染分布和診斷分析是有利的?；驒z測早于細胞形態(tài)改變，HPV DNA感染的檢測已成為篩查和預防宮頸癌的關鍵問題之一[11]，分型檢測對臨床宮頸細胞學異常的評估和管理，病程的進展，人群流行病學調查和病毒疫苗的研制都有重要意義。該項研究數(shù)據(jù)顯示HPV-16和-52基因型是甘肅地區(qū)最常見HPV基因型,為制作針對性的疫苗提供數(shù)據(jù)依據(jù)，建議在甘肅地區(qū)研發(fā)HPV

疫苗應包括這2型，有效預防和控制HPV在甘肅地區(qū)的感染。

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