河南漢族冠心病患者CYP2C19基因多態(tài)性分布

吳干斌，周建華，劉科蘭

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部 鄭州 450014

河南漢族冠心病患者CYP2C19基因多態(tài)性分布

吳干斌△，周建華，劉科蘭

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部 鄭州 450014

△男，1967年9月生，碩士，副主任藥師，研究方向：臨床藥學(xué)，E-mail:wganbin521@sina.com

CYP2C19；基因多態(tài)性；氯吡格雷；河南省；冠心病

目的：研究河南冠心病患者氯吡格雷代謝相關(guān)基因CYP2C19基因多態(tài)性的分布。方法采用PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)600名來(lái)自河南的冠心病患者CYP2C19的基因型。結(jié)果CYP2C19*1/*1占42.6%、CYP2C19*1/*2占40.9%、CYP2C19*1/*3占6.5%、CYP2C19*2/*2占7.2%、CYP2C19*2/*3占2.5%、CYP2C19*3/*3占0.3%。結(jié)論河南省人群CYP2C19基因多態(tài)性的分布與全國(guó)其他地區(qū)基本一致。

冠心病患者在進(jìn)行經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(PCI)后多服用氯吡格雷和阿司匹林。已有研究[1]表明這一處理可降低心血管事件的發(fā)生率以及支架內(nèi)血栓形成的風(fēng)險(xiǎn),但在術(shù)后長(zhǎng)期隨訪中發(fā)現(xiàn)部分患者仍有血栓性事件的發(fā)生，即氯吡格雷抵抗現(xiàn)象[2-4]。已發(fā)現(xiàn)氯吡格雷抵抗與CYP2C19基因的多態(tài)性有關(guān)[5]。CYP2C19是一種重要的藥物代謝酶,參與多種藥物的體內(nèi)代謝，是CYP2C超家族成員之一,主要參與氯吡格雷、奧美拉唑、丙戊酸、苯妥英等藥物的代謝;CYP2C19具有遺傳多態(tài)性且在不同人群中具有較大的差異,這種多態(tài)性是由于該酶的編碼基因發(fā)生突變而導(dǎo)致酶的活性異常,引起不同人群、不同個(gè)體對(duì)藥物的代謝能力下降或增強(qiáng),影響相關(guān)藥物的體內(nèi)代謝及療效[6-7]。作者對(duì)河南地區(qū)無(wú)血緣關(guān)系、擬行PCI的600份漢族冠心病患者的血樣進(jìn)行CYP2C19基因型檢測(cè)和分析，為臨床醫(yī)師使用氯吡格雷類藥物提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院2012年12月至2013年7月診斷為冠心病、擬行PCI手術(shù)的600名河南地區(qū)、無(wú)血緣關(guān)系的患者。所有患者均否認(rèn)家族遺傳病病史，漢族，年齡35～74歲，男415例，女185例。

1.2試驗(yàn)儀器與試劑全自動(dòng)雜交儀(上海百傲科技有限公司，型號(hào)BR526-24)，生物芯片識(shí)別儀(上海百傲科技有限公司，型號(hào)BE-2.0)，PCR儀(美國(guó)AB公司，型號(hào)ABI9902)，高速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司，型號(hào)5424R),醫(yī)用冷藏箱(青島海爾公司，型號(hào)HYC-260),DNA提取試劑盒、Taq DNA聚合酶、PCR Buffer、dNTP、內(nèi)切酶及蛋白酶K等(上海百傲科技有限公司)。

1.3PCR-RFLP取1 mL EDTA抗凝外周血,提取DNA。根據(jù)基因數(shù)據(jù)庫(kù)中SNP的序列信息，由上海百傲科技有限公司提供設(shè)計(jì)軟件及試劑進(jìn)行在線擴(kuò)增。PCR反應(yīng)總體系為25 μL，基因組DNA為5 μL，引物、Taq DNA聚合酶、PCR Buffer、dNTP、內(nèi)切酶等共計(jì)20 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，53 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個(gè)循環(huán)； 72 ℃延伸5 min，結(jié)束擴(kuò)增。取擴(kuò)增產(chǎn)物10 μL加入到180 μL雜交緩沖液中，并依次加入抗體等試劑進(jìn)行在線雜交、顯色，確定芯片基因型。

1.4檢測(cè)基因分型采用上海百傲科技有限公司提供的分型系統(tǒng)將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物嚴(yán)格按照其提供的標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行相關(guān)操作，通過(guò)雜交儀采用單堿基延伸結(jié)合微陣列芯片法對(duì)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，最后通過(guò)掃描儀讀出相對(duì)應(yīng)的基因型。根據(jù)上海百傲科技有限公司的分型標(biāo)準(zhǔn)將該等位基因的野生純合子定義為*1/*1型，單突變型定義為*1/*2型和*1/*3型，突變純合子定義為*2/*2型和*3/*3型，雙突變雜合子定義為*2/*3型。另將*1/*1型定義為強(qiáng)代謝型，*1/*2和*1/*3型定義為中間代謝性，*2/*2、*2/*3和*3/*3型定義為弱代謝型。

1.5數(shù)據(jù)處理將所獲數(shù)據(jù)作Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，采用χ2檢驗(yàn)比較不同性別間各基因型分布的差異，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

通過(guò)計(jì)算檢測(cè)符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=1.141，P=0.372)。各種基因型生物芯片識(shí)別圖見(jiàn)圖1。CYP2C19*1/*1占42.6%、CYP2C19*1/*2占40.9%、CYP2C19*1/*3占6.5%、CYP2C19*2/*2占7.2%、CYP2C19*2/*3占2.5%、CYP2C19*3/*3占0.3%。不同性別各基因型的分布頻率見(jiàn)表1。由表1可知，不同性別間各等位基因的頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.952，P=0.064)。不同性別各代謝型基因的頻率分布見(jiàn)表2。由表2可知，不同性別間各代謝型基因的頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.693，P=0.157)。

圖1 基因型生物芯片識(shí)別圖

表2 各代謝型基因的頻率分布 例

3 討論

目前，阿司匹林聯(lián)合氯吡格雷已成為PCI術(shù)后抗血小板聚集、溶栓治療的基石。但由于阿司匹林抵抗和氯吡格雷抵抗的存在，仍有一部分患者在術(shù)后一段時(shí)間內(nèi)會(huì)發(fā)生心肌梗死、猝死等不良心血管事件[8]。

隨著藥物基因組學(xué)的發(fā)展，藥物代謝酶的基因多態(tài)性研究在臨床中的指導(dǎo)意義越來(lái)越大,基因?qū)騻€(gè)體化治療已在臨床應(yīng)用。研究[5]表明，氯吡格雷抵抗與體內(nèi)CYP2C19基因的多態(tài)性有關(guān)。CYP2C19基因所編碼的蛋白酶位于肝微粒體內(nèi)?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)CYP2C19*1～CYP2C19*25等多個(gè)等位基因，編碼正常酶活性的基因是CYP2C19*1，而突變等位基因或是影響酶的催化活性或是影響酶蛋白的表達(dá),CYP2C19*2和CYP2C19*3為CYP2C19最常見(jiàn)的酶缺陷型突變等位基因,可解釋99%的東方人弱代謝者及88%的白種人弱代謝者[9]。1994年，de Morais等[10]發(fā)現(xiàn)了CYP2C19兩個(gè)等位基因的突變位點(diǎn)，分別命名為CYP2C19外顯子5突變型和CYP2C19外顯子4突變型。

該研究結(jié)果顯示，河南地區(qū)擬行PCI的冠心病患者中，CYP2C19*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3和*3/*3型的分布頻率分別為42.6%、40.9%、6.5%、7.2%、2.5%和0.3%，并且各個(gè)基因型在不同性別間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。強(qiáng)代謝型(野生純合子)占42.6%，而中代謝型(單突變)和弱代謝型(雙突變)占57.4%，也就是說(shuō)在河南地區(qū)的患者中有近60%的人會(huì)存或輕或重的氯吡格雷抵抗現(xiàn)象，這比相關(guān)文獻(xiàn)[11]報(bào)道的50.6%高，與另一文獻(xiàn)[12]報(bào)道的54.3%較為接近；其中單突變頻率達(dá)到了47.4%，與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的44.0%比較接近；雙突變占10.0%，與文獻(xiàn)[11,14]報(bào)道的11.6%和11%很接近。此外，該研究結(jié)果還顯示CYP2C19基因型中弱代謝型占10%，低于蒙古族(33.3%)、黎族(15%)、獨(dú)龍族(11.2%)及布依族(10.2%),但高于苗族(9.2%)、土族(9.0%)以及維吾爾族(4.17%)等[15]，考慮是地理環(huán)境的差異或樣本量較少所致。

總之，CYP2C19基因多態(tài)性在河南地區(qū)人群中分布比較普遍，且突變率較高。因此作者建議河南地區(qū)的醫(yī)務(wù)工作者在對(duì)相關(guān)患者進(jìn)行治療時(shí)要重視該酶的基因分型，可以在允許的條件下進(jìn)行CYP2C19基因分型的檢測(cè)，參考檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行治療用藥的選擇和劑量的增減，達(dá)到個(gè)體化用藥的目的，以降低術(shù)后心血管事件的發(fā)生概率，提高患者的生活質(zhì)量。同時(shí)建議地方政府和國(guó)家相關(guān)部門盡快建立相應(yīng)的基因型數(shù)據(jù)庫(kù)以及基因多態(tài)性與藥物代謝的關(guān)系庫(kù)，以便廣大醫(yī)護(hù)人員利用資源更好地為患者服務(wù)，真正為患者做到“量體裁衣”，個(gè)體化給藥。

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(2013-08-27收稿 責(zé)任編輯徐春燕)

Distribution of CYP2C19 genetic polymorphism in patients of Han nationality with coronary artery disease from Henan Province

WUGanbin,ZHOUJianhua,LIUKelan

DepartmentofPharmacy，theSecondAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450014

CYP2C19；genetic polymorphism；clopidogrel；Henan Province；coronary artery disease

Aim: To survey the genetic polymorphism of CYP2C19 gene in the patients with coronary artery disease from Henan Province. Methods: The CYP2C19 genotypes of 600 patients with coronary artery disease from Henan Province were determined by PCR-RFLP. Results: The frequencies of CYP2C19*1/*1,*1/*2,*1/*3,*2/*2,*2/*3 and *3/*3 were 42.6%,40.9%,6.5%,7.2%,2.5% and 0.3%,respectively. Conclusion: There are no significant differences in the distribution of CYP2C19 polymorphism between Henan and other areas of China.

10.13705/j.issn.1671-6825.2014.04.036

R969.1