★ 陳浩 何小女 徐歡 張莉艷
(1.江西省中醫(yī)院 南昌330006;2.江西中醫(yī)藥大學 南昌330004)
肛腸疾病術(shù)后傷口疼痛、出血等并發(fā)癥是臨床上一大常見難題。筆者在《新疆中草藥單方驗方選編》基礎(chǔ)上研發(fā)出的復(fù)方止血消炎軟膏可用于保護術(shù)后肛腸患者創(chuàng)面及黏膜,減輕術(shù)后肛腸疾病疼痛及出血,減輕肛門墜脹及排便,作為肛腸外科手術(shù)后的局部用藥臨床效果良好。本文對處方中五倍子中的成分沒食子酸的含量進行了測定,為該藥的質(zhì)量標準的制定提供了科學依據(jù)。
1.1 儀器 電子天平BS 124S(北京賽多利斯儀器),超聲波清洗器DL360B(上海之信儀器有限公司),微型植物試樣粉碎機KN-500型(長沙康寧電子科技有限公司),恒溫鼓風干燥箱DHG-9070A 型(海精宏實驗設(shè)備有限公司)。
1.2 試劑 對照品:沒食子酸(110831-201204中國藥品生物制品檢定所),色譜甲醇:西隴化工股份有限公司(130106),水為超純水,其余實驗所用化學試劑均為分析純試劑。
1.3 色譜條件 儀器:安捷倫1260,色譜柱:C-18安捷倫液相色譜柱4.6mm×150mm,流動相:甲醇∶ 0.1%磷酸(5∶95),檢測波長:270nm,流速:1mL/分,柱溫:25℃。
2.1 沒食子酸對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品17mg于100mL量瓶中,加適量50%甲醇使溶解定容至刻度,搖勻,超聲10分鐘,過微孔濾頭于小瓶,即得儲備液。
2.2 供試品溶液的制備 稱取抗炎止血軟膏10g于研缽中研勻,精密稱取0.4g于圓底燒瓶中,精密加入4mol/L鹽酸溶液50mL,稱定重量,水浴加熱3.5小時,放冷,補重,濾過。精密量取續(xù)濾液5mL,置50mL量瓶中,加50%的甲醇稀釋至刻度,搖勻,超聲10分鐘,過微孔濾頭,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密吸取沒食子酸對照品適量,加50%的甲醇制成每1mL含102μg的溶液,作為對照品溶液。
2.3 線性關(guān)系的考察 精密取儲備液1、2、3、5、7mL,溶解于5個10mL量瓶中,取50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,超聲10分鐘,以儲備液及稀釋的5個濃度的沒食子酸溶液建立標準曲線,每次進樣量10μL,以對照品進樣量為橫坐標X,峰面積為縱坐標Y繪制標準曲線,求得回歸方程:Y=197 35X-5.808 3r=0.999 1(n=6)。結(jié)果表明:沒食子酸在進樣量0.17-1.7μg范圍內(nèi),進樣量與峰面積呈良好線性關(guān)系。
2.4 陰性干擾試驗 取陰性樣品適量,按2.2供試品方法制成陰性對照溶液。按照上述色譜條件,分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL注入色譜儀中,記錄色譜圖(見下圖1-3)。結(jié)果表明:在與沒食子酸對照品色譜相應(yīng)的位置上無色譜峰出現(xiàn),方中其他組分對測定結(jié)果無影響。
圖1 沒食子酸對照品
圖2 抗炎止血軟膏樣品
圖3 抗炎止血軟膏陰性樣品
2.5 精密度試驗 精密吸取2.2項的對照品溶液連續(xù)進樣6次,每次進樣10μL,測得精密度RSD% =1.87%,表明儀器精密度良好。
2.6 重復(fù)性考察 取同一批號樣品6份,按供試品溶液制備方法制備的樣品溶液,各進樣10μL記錄峰面積,結(jié)果RSD%為1.33%,說明本方法重復(fù)性良好。
2.7 穩(wěn)定性實驗 精密吸取同一份供試品溶液10uL分別于0、1、3、5、7、10小時注入液相色譜儀,記錄色譜圖,測定其峰面積積分值,結(jié)果其RSD為1.42%。實驗結(jié)果表明供試品溶液在10小時內(nèi)測定穩(wěn)定性良好。
2.8 回收率實驗 精密稱取已知含量的同批抗炎止血軟膏樣品各0.2g,分別在6份樣品中加入沒食子酸標準品14.96mg,按“供試品溶液的制備”法處理,按設(shè)定的方法測定,平均回收率為99.6%,RSD為1.66%,結(jié)果良好。
2.9 樣品測定 取本品3批樣品(20121115、20121219、20130103),按2.2供試品方法制備溶液,按含量測定方法測定,用外標法計算供試品沒食子酸的含量,結(jié)果分別為71.85mg/g、71.68mg/g、71.10mg/g。
取樣品在200-350 nm波長范圍內(nèi)進行掃描,在270 nm處有最大吸收,故選擇270 nm為檢測波長。在供試品取樣中軟膏研細的均勻度決定著樣品含量測定的精確性,樣品在鹽酸水浴中提取性質(zhì)穩(wěn)定且高效液相測定中無陰性干擾。通過實驗研究,本文建立了抗炎止血軟膏中沒食子酸含量的HPLC測定法。該方法簡單并具有良好的準確性與重現(xiàn)性,有利于藥品質(zhì)量控制的下一步完善。
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:化學工業(yè)出版社,2010:62.
[2]于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用[M].北京:化學工業(yè)出版社,2004.
[3]侯惠嬋,梁前,盧迅聰.五倍子、沒食子酸的含量測定[J].中國藥品標準,2005,6(3):38-39.
[4]陶淑娟,邵太麗,畢開順.高效液相色譜法測定蒙藥那如-3丸中沒食子酸的含量[J].時珍國醫(yī)國藥,2005,16(1):2-3.
[5]照日格圖,其樂木格.HPLC法測定蒙藥巴特日七味丸中沒食子酸的含量[J].內(nèi)蒙古民族大學學報(自然科學版),2009,24(1):79-81.