用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)膠體金測試卡檢測乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的性能

劉淑芬 劉立群

(河北省遷西縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 遷西 064300)

用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)膠體金測試卡檢測乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的性能

劉淑芬 劉立群

(河北省遷西縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 遷西 064300)

肝炎病毒，乙型；肝炎抗原，乙型；膠體金；酶聯(lián)免疫吸附測定

在我國人群中，乙型肝炎病毒(HBV)感染率一直較高，尤其是20世紀(jì)80年代中期以前出生的人，HBV感染率超過10%[1]。目前，臨床領(lǐng)域免疫檢測乙肝五項(xiàng)的方法主要有凝聚試驗(yàn)、放射免疫測定(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、免疫層析測定以及化學(xué)放光免疫測定(TR-FLA)[2]。其中ELISA測定乙肝五項(xiàng)指標(biāo)具有靈敏度高、特異性好等優(yōu)點(diǎn)，而被廣泛應(yīng)用于臨床確診檢驗(yàn)。膠體金測試卡(GIGA)具有簡便、快捷、不需要特殊儀器的優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用于急診和人群篩查更加方便。因此，我們對比分析了ELISA檢測方法和膠體金測試卡在檢測乙肝五項(xiàng)中的符合率，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 樣本 選取我院門診和住院患者250例，男140例，女110例。

1.2 試劑 GIGA采用英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司產(chǎn)品。ELISA試劑盒購自北京萬泰生物技術(shù)有限公司。2種試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 儀器 Thermo Multiskan MK3型酶標(biāo)儀。

1.4 方法及結(jié)果判斷

1.4.1 GIGA檢測 采用免疫層析原理，其中乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)為雙抗體夾心法，乙肝表面抗體(HBsAb)為雙抗原夾心法，乙肝e抗體(HBeAb)、乙肝核心抗體(HBcAb)為競爭抑制法，按說明書要求進(jìn)行檢測操作和判定結(jié)果。陽性結(jié)果判斷：HBsAg、HBsAb、HBeAg測試卡的試紙條分別出現(xiàn)檢測線和質(zhì)控線，HBeAb、HBcAb測試卡的試紙條只出現(xiàn)質(zhì)控線，判定為乙型肝炎陽性；測試卡未出現(xiàn)質(zhì)控線為試劑失效。

1.4.2 ELISA檢測 所有標(biāo)本均用MK3型自動(dòng)酶聯(lián)免疫系統(tǒng)分析儀檢測。測定HBsAg、HBsAb、HBeAg樣本OD450nm值，計(jì)算S/CO≥陰性對照孔均值×2.1為陽性結(jié)果，反之為陰性結(jié)果；測定HBeAb、HBcAb樣本OD450nm值，計(jì)算S/CO≥陰性對照孔均值×0.5為陰性結(jié)果，反之為陽性結(jié)果。

1.5 對比方法 以ELISA檢測方法檢測結(jié)果為參照標(biāo)準(zhǔn)，分別用ELISA法和GIGA法檢測乙肝血清共250份，其中陽性200份，陰性50份。將2種方法對比檢測的陽性血清標(biāo)本按乙肝五項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)分為8組。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)按照每種血清學(xué)指標(biāo)的符合率計(jì)算。

2 結(jié) 果

分別用ELISA法和GIGA法檢測乙肝血清共250份，其中陽性200份，陰性50份。按乙肝五項(xiàng)陽性血清指標(biāo)分8組及陰性組，檢測結(jié)果見表1。

表1 ELISA法和GIGA法檢測乙肝五項(xiàng)血清指標(biāo)結(jié)果 例

由表1可見，2種方法對比符合率情況，其中HBsAg符合率為98.2%(107/109)，HBsAb符合率為93.10%(54/58)，HBeAg符合率為100%(23/23)，HBeAb符合率為90.48%(76/84)，HBcAb符合率為93.06%(134/144)。而50例ELISA法陰性血清用GIGA法檢測也同樣全部陰性。

3 討 論

HBV對人體有著廣泛的危害，如引起人體免疫紊亂、慢性肝炎、肝硬化、肝腫瘤的發(fā)生[3]。目前，確診檢測HBV感染應(yīng)以ELISA檢測方法為準(zhǔn)[4]。從我們統(tǒng)計(jì)的檢測結(jié)果可以看出，在HBsAg、HBeAg 2項(xiàng)檢測中，GIGA法與ELISA法的符合率較高分別為98.2%和100%。而在HBsAb、HBeAb、HBcAb 3項(xiàng)檢測中，GIGA法與ELISA法的符合率相對要低一些，分別為93.10%、90.48%和93.06%。由于2種方法檢測敏感度的差異，客觀的決定了2種不同檢測方法的不同用途。ELISA檢測抗原(或抗體)在液相中經(jīng)擴(kuò)散作用，逐漸與固相表面的抗體(或抗原)結(jié)合，同時(shí)標(biāo)記抗體(或抗原)也需要此過程形成標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，中間需要洗滌顯色等過程，檢測時(shí)間較長。GIGA法不需要特殊設(shè)備，快速檢測單個(gè)標(biāo)本，易于觀察結(jié)果，操作簡便，特異性較高，能滿足急診的需要。在臨床就診的患者及小樣本量的確診時(shí)，必須應(yīng)用靈敏度更高的ELISA方法進(jìn)行乙肝五項(xiàng)的檢測，以便于指導(dǎo)臨床治療和預(yù)防；對于大規(guī)模的人群篩查和急診檢測中，GIGA法的方便、快捷等優(yōu)點(diǎn)就顯得特別重要。但從實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，由于GIGA的原理及方法學(xué)差異，靈敏度稍低于ELISA，不適于住院患者和獻(xiàn)血者，特別是手術(shù)患者的檢測，且其成本高于ELISA。因此，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)需要，結(jié)合工作情況選用實(shí)驗(yàn)方法。

[1]韓麗蓉.乙型肝炎乙肝五項(xiàng)檢查的臨床意義[J].臨床合理用藥雜志，2012，5(8)：109.

[2]郝麗紅，董志杰，吳佩，等.檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].2版.南京：京東大學(xué)出版社，1997：410-414.

[3]謝韻.淺述中醫(yī)藥對慢性乙型病毒性肝炎的治療[J].醫(yī)學(xué)美學(xué)美容：中旬刊，2013，(4)：130-131.

[4]趙秀英，陳俊梅，王文靜，等.電化學(xué)發(fā)光法和ELISA法檢測HBV表面抗體結(jié)果的比較與分析[J].北京醫(yī)學(xué)，2011，(6)：461-463.

(本文編輯：石 康)

劉淑芬(1963—)，女，副主任技師，學(xué)士。從事臨床檢驗(yàn)工作。

R373.21；R392.11；R512.620.4

A

1002-2619(2014)11-1753-02

2014-03-17)