木耳栽培種質(zhì)資源酯酶同工酶多樣性的研究

摘要：本研究對(duì)木耳栽培種質(zhì)資源國(guó)審認(rèn)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株19株進(jìn)行酯酶同工酶的多樣性研究，初步明確木耳栽培種質(zhì)資源的遺傳信息，為標(biāo)準(zhǔn)菌株庫(kù)的建立、評(píng)價(jià)提供重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞：木耳；種質(zhì)資源；酯酶同工酶；多樣性

中圖分類號(hào)：S646.6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1674-0432（2014）-05-38-1

1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

供試菌株采用液體培養(yǎng)，之后進(jìn)行樣品制備，采用酯酶同工酶電泳技術(shù)，進(jìn)行酶譜多樣性分析、相似系數(shù)分析和聚類分析，明確供試菌株的遺傳多樣性，為標(biāo)準(zhǔn)菌株庫(kù)的建立提供遺傳信息。酶譜多樣性分析相似系數(shù)分析聚類分析明確供試菌株的遺傳多樣性，

2試驗(yàn)材料

2.1供試菌株

供試菌株19株，由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院提供，為全國(guó)食用菌品種認(rèn)定委員會(huì)認(rèn)定通過(guò)的國(guó)審標(biāo)準(zhǔn)菌株，菌株信息見(jiàn)表1。

2.2試驗(yàn)方法

挑取保存的菌絲于液體培養(yǎng)基中，在25℃、100轉(zhuǎn)/分鐘條件下振蕩培養(yǎng)20天。過(guò)濾菌絲，用蒸餾水沖洗干凈，用真空泵吸取培養(yǎng)基至菌絲體成餅狀，按1∶1的比例加入樣品提取液，充分研磨后，至于冷凍離心機(jī)中，0℃，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘后，即得同工酶提取液。凝膠制備后點(diǎn)樣，采用垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳。取出凝膠片，放入現(xiàn)配的染色液染色。

2.3數(shù)據(jù)處理

酯酶同工酶電泳數(shù)據(jù)在NTSYS-pc2.10e軟件上，利用SIMQUAL程序計(jì)算菌株間遺傳相似系數(shù)，之后進(jìn)行聚類分析，繪制樹(shù)狀聚類圖。

3結(jié)果與分析

3.1酯酶同工酶酶譜的多樣性

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，供試菌株酯酶同工酶電泳酶譜清晰可見(jiàn)，類型多樣，共檢測(cè)出243條酶帶，17個(gè)酶譜類型，其中遷移率不同的酶帶35條，其遷移率（Rf）范圍為0.129～0.695；多態(tài)性酶帶32條，多態(tài)性酶帶比率是91%；各個(gè)菌株有11-16條不等；酶帶E20（Rf=0.445）、E23（Rf=0.490）、E24（Rf=0.507）是供試菌株共有的穩(wěn)定酶帶，出現(xiàn)頻率100%；酶帶E11（Rf=0. 357）、E26（Rf=0.543）、E28（Rf=0.571）是菌株中農(nóng)黃天菊花耳特有酶帶；酶帶E12（Rf=0.364）、E16（Rf=0.395）為菌株Au8129所特有；菌株浙耳1號(hào)特有酶帶E18（Rf=0.414）。

3.2酯酶同工酶酶譜的聚類分析

供試菌株在相似系數(shù)0.56水平處可以分為四大類群。類群Ⅰ共計(jì)8株，包括吉雜1號(hào)、黑耳6號(hào)、吉AU2號(hào)、黑A、黑木耳2號(hào)、延特3號(hào)、延特5號(hào)、豐收2號(hào)等。類群Ⅰ菌株共檢測(cè)出酶帶16條，多態(tài)性酶帶13條，多態(tài)性酶帶比例41%。在相似系數(shù)1.00水平處菌株黑耳6號(hào)和吉AU2號(hào)、黑A和黑木耳2號(hào)聚為一類，其遺傳背景相近；類群Ⅱ共計(jì)3株，分別是浙耳1號(hào)、新科、單片5號(hào)。類群Ⅱ菌株共檢測(cè)出酶帶18條，多態(tài)性酶帶15條，多態(tài)性酶帶比例47%；類群Ⅲ，共計(jì)7株，包括黑793、H10、滬耳3號(hào)、Au8129、黑耳4號(hào)、黑耳5號(hào)和黑木耳1號(hào)。類群Ⅲ菌株共檢測(cè)出酶帶26條，多態(tài)性酶帶23條，多態(tài)性酶帶比例72%，酶譜多樣性尤為豐富；類群Ⅳ即為菌株中農(nóng)黃天菊花耳，檢測(cè)出酶帶16條，多態(tài)性酶帶13條，多態(tài)性酶帶比例41%。

3.3供試菌株間相似系數(shù)

供試菌株中任意兩個(gè)菌株間的相似系數(shù)0.296-1.000不等，其平均相似系數(shù)為0.594，菌株黑耳6號(hào)和吉AU2號(hào)、黑A和黑木耳2號(hào)的相似系數(shù)均為1.000，判定是相同菌株，菌株Au8129和黑A、黑木耳2號(hào)的相似系數(shù)最小僅為0.296。供試菌株的平均相似系數(shù)中菌株Au8129最小為0.396，延特5號(hào)的平均相似系數(shù)最大為0.677。供試菌株間的相似系數(shù)的降序排列中，排次位于前列的菌株是聚類分析中類群Ⅰ的供試菌株，平均相似系數(shù)為0.677～0.631不等，說(shuō)明類群Ⅰ的供試菌株遺傳背景更為相近。

4結(jié)語(yǔ)

本文通過(guò)對(duì)供試菌株酯酶同工酶的電泳，共檢測(cè)出遷移率不同的酶帶35條，17個(gè)酶譜類型；經(jīng)聚類分析，可以在相似系數(shù)0.56處劃分為四大類群，且每一類群均有特征型酶帶，結(jié)果表明供試菌株酶譜多樣性豐富，可以根據(jù)酯酶同工酶電泳初步明確供試菌株的遺傳背景，為標(biāo)準(zhǔn)菌株庫(kù)的建立提供遺傳信息。

作者簡(jiǎn)介：李國(guó)興，鎮(zhèn)賚縣植物保護(hù)與植物檢疫工作站，農(nóng)藝師，研究方向：農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣。