全自動毛細管電泳技術(shù)在篩查地中海貧血中的臨床診斷價值

陳 星，初德強，梁開艷，江笑文

(廣州市第八人民醫(yī)院 檢驗科，廣東 廣州510060)

目前，地中海貧血已成為我國南方各省常見的由珠蛋白肽鏈合成障礙導致的以小細胞低色素性貧血為主要臨床表現(xiàn)的單基因遺傳性疾病[1-3]。PCR技術(shù)與其他分子生物學方法相結(jié)合作為其明確診斷的主要方法，由于其要求高、操作方法比較繁瑣、費用高及對罕見突變或新突變檢出率低，在人群普查時應(yīng)用明顯受限[4]。近年來，血紅蛋白電泳分析技術(shù)已經(jīng)逐漸成為診斷和分離異常血紅蛋白的首選方法[5]。本研究應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)和全自動毛細管電泳技術(shù)對我院收治的380例病例進行地中海貧血篩查分析，旨在探討兩種不同技術(shù)在地中海貧血篩查中的診斷價值，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2008年9月—2012年4月我院篩查的380例病例作為研究對象，采用PCR基因診斷技術(shù)對全部病例進行確診。

1.2 方法

采集6 ml靜脈血作為標本，分裝3個試管，其中1號試管注入已加EDTA-K2的血常規(guī)管中，使血細胞分析儀(希斯美康XE5000)檢測血常規(guī)。另外2個試管分別采用兩種不同技術(shù)進行血紅蛋白電泳。①瓊脂糖凝膠電泳技術(shù):采用法國Sebia公司生產(chǎn)的Hydrasys LC電泳系統(tǒng)及配套Hyrys掃描系統(tǒng)，配套血紅蛋白電泳試劑盒HYDRAGEL HEMOGLOBIN。按照儀器操作說明書將標本進行洗滌、溶血制作溶血液；點樣；將點樣梳放入電泳單元后，選擇相應(yīng)程序進行電泳；30 min儀器自動完成電泳、烘干等步驟；電泳完畢及時取出膠片，放入儀器染色單元，選擇相應(yīng)程序，儀器自動進行沖洗、染色、脫色、烘干等步驟；染色結(jié)束后取出膠片，用配套的Hyrys系統(tǒng)掃描出結(jié)果。②全自動毛細管電泳技術(shù):采用法國Sebia公司生產(chǎn)的Capillarys 2全自動毛細管電泳儀及其配套血紅蛋白電泳試劑盒CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E)。按照儀器操作說明書進行，標本不須洗滌和溶血，直接將抗凝標本離心沉淀，取紅細胞加入試管中(標本量>50 μl)。把裝有標本的試管按順序放在儀器配套的檢測架上(一個檢測架一次可檢測7個標本，7個標本為一批，可同時檢測多批標本)，在檢測架第八管位置加入大約4.0 ml的溶血試劑。把檢測架送入Capillarys 2全自動毛細管電泳儀進行血紅蛋白電泳檢測，約30 min后全部檢測程序完畢，查看結(jié)果。

1.3 評定指標

患者如果出現(xiàn)血常規(guī)異常，且MCV低于82 fl、MCH 低于27 pg，HbA2不超過3.2%，但血清鐵正常，可考慮為α-地中海貧血;患者如果HbA2不小于3.5%，HbF正?；蛘咴黾?，可考慮為β-地中海貧血。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

采用PCR基因診斷技術(shù)在380例病例中共確診108例地中海貧血患者。對于α-地中海貧血，毛細管電泳技術(shù)的檢出率為90.91%，明顯高于凝膠電泳技術(shù)的檢出率65.91%；對于β-地中海貧血，毛細管電泳技術(shù)和凝膠電泳技術(shù)的檢出率分別為94.23%和71.15%，毛細管電泳技術(shù)檢出率明顯高于凝膠電泳技術(shù)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。對于HbH病的檢出率，兩組比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 兩種電泳技術(shù)的檢出率對比n(%)

對各型地中海貧血患者紅細胞( RBC)、血紅蛋白( Hb)、平均紅細胞體積( MCV)及平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)等指標進行分析發(fā)現(xiàn)，地中海貧血患者的MCV及MCH均值相對于異常血紅蛋白病HbE、 HbCS的均值稍低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 各型RBC、Hb、MCV、MCH指標情況對比

注：組間比較，＊P<0.05

3 討論

地中海貧血主要是由于珠蛋白基因缺失或點突變導致組成珠蛋白的α、β、γ、δ鏈等4種肽鏈中相應(yīng)肽鏈的合成障礙[6]，最終導致血紅蛋白組分的改變[7,8]，體積減少或壽命降低。通常將地中海貧血分為α、β、δβ和δ等4種類型，其中以β和α型地中海貧血最為常見。目前，采用PCR基因診斷技術(shù)對地中海貧血基本可以確診，但技術(shù)要求高且操作復(fù)雜，加之費用較高，使其仍然不能在我國人群篩查中普及應(yīng)用。

在本研究中，以經(jīng)該技術(shù)進行確診的108例地中海貧血患者為參照，比較全自動毛細管電泳技術(shù)和瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)在地中海貧血篩查中的應(yīng)用價值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對于α-地中海貧血，毛細管電泳技術(shù)的檢出率為90.91%，明顯高于凝膠電泳技術(shù)的檢出率65.91%；對于β-地中海貧血，毛細管電泳技術(shù)和凝膠電泳技術(shù)的檢出率分別為94.23%和71.15%，毛細管電泳技術(shù)的檢出率明顯高于凝膠電泳技術(shù)。而對于HbH病的檢出率兩組比較并無統(tǒng)計學差異。由此可見，相對于瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)，全自動毛細管電泳技術(shù)在地中海貧血篩查中具有更強的優(yōu)越性。主要由于全自毛細管電泳技術(shù)通過在充滿電泳液的石英毛細管中進行電泳，使得紅細胞樣品在溶血試劑中被稀釋后注射到毛細管的負極端進行電泳分離，通過靠近正極端的415 nm光波檢測裝置對血紅蛋白進行檢測，可以準確地對血紅蛋白組分進行相對定量[9]。相對于瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)樣品處理過程的繁瑣復(fù)雜，人工操作步驟多，導致精確度不夠等不足，全自動毛細管電泳技術(shù)樣品處理簡單，自動化處理可以有效地避免人工干擾，精確度明顯優(yōu)于瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)，并且具有持續(xù)時間短、經(jīng)濟實惠等優(yōu)勢，對于地中海貧血的篩查及診斷具有較高的特異性，可以為進一步基因診斷和遺傳咨詢提供一定的依據(jù)。在本研究中，地中海貧血的MCV及MCH均值處于稍微偏低的水平，相比之下，異常血紅蛋白病HbE、 HbCS值則稍高，甚至處于正常范圍，說明地中海貧血患者紅細胞體積減少、脆性降低，在一定程度上可為其篩查提供幫助。

綜上所述，應(yīng)用全自毛細管電泳技術(shù)在地中海貧血的篩查和診斷中具有精確度高、操作簡便、時間短、經(jīng)濟實惠等優(yōu)點，如果應(yīng)用于臨床，能夠為我國的診斷地中海貧血工作提供更有力的技術(shù)保障。

作者簡介：陳星(1980-)，女，本科，主管技師，主要從事臨床檢驗方向的研究。

參考文獻：

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