卡馬西平聯(lián)合塞來昔布治療癲癇模型大鼠的不良反應(yīng)評(píng)估

劉幫慧, 戴啟荷

(湖北省荊州市中心醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科, 湖北 荊州, 434022)

癲癇是神經(jīng)內(nèi)科較為常見的短暫性腦功能失調(diào)綜合征，發(fā)病率逐年上升，癲癇發(fā)作的表現(xiàn)主要以運(yùn)動(dòng)、行為、感覺、自主神經(jīng)等一系列的功能障礙為主，如不及時(shí)采取治療措施，可能會(huì)遷延惡化為難治性癲癇，對(duì)患者的生命健康與生活質(zhì)量造成十分大的威脅?？拱d癇藥物(AED)是目前控制疾病發(fā)作、減少發(fā)作次數(shù)的主要藥物，但是部分AED長(zhǎng)期服用可能出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，損害臟器或認(rèn)知功能[1-3]，因此，臨床應(yīng)用的AED需要保證有較好的耐受性和安全性。本組建立癲癇大鼠模型，給予卡馬西平與塞來昔布聯(lián)合用藥，并設(shè)立生理鹽水對(duì)照組，觀察用藥后的不良反應(yīng)，為臨床安全用藥提供可靠的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)雄性Wistar大鼠90只，購自荊州市中心醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，體質(zhì)量180～250 g, 放在獨(dú)立、通風(fēng)的籠盒飼養(yǎng), 5只/籠，飼養(yǎng)溫度19 ℃～25 ℃, 濕度50%～60%, 飼養(yǎng)環(huán)境經(jīng)常消毒，大鼠自由進(jìn)食，每2 d更換一次墊料。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器：微量注射器(上海玻利鴿工貿(mào)有限公司)，腦立體定位儀(日本NARISHIGE公司)，OLYMPUS顯微鏡(日本NARISHIGE公司)，BL-420圖像分析系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)，小型牙鉆(韓國(guó)DSI公司)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑：海仁酸(美國(guó)Kainic Acid公司)，大鼠心肌肌鈣蛋白T(cTnT)ELISE 試劑盒(德國(guó)寶靈曼公司)，NycoPlastin試劑(ISI值=1.19)，CaCl2溶液、蘇木素液、伊紅染液(上?？婆d生物科技有限公司)，卡馬西平片(北京諾華制藥有限公司)，塞來昔布(美國(guó)輝瑞公司)。

1.3 方法

1.3.1 分組方法：隨機(jī)選出10只大鼠設(shè)為假手術(shù)組，其余80只設(shè)為癲癇模型組。造模過程中假手術(shù)組有2只死于麻醉，剩下8只納入研究；模型組麻醉、手術(shù)過程死亡18只，根據(jù)腦電圖淘汰2只，剩余60只納入研究，并隨機(jī)均分為對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組，各30只。

1.3.2 癲癇模型建立方法：大鼠10%水合氯醛腹腔注射麻醉，俯臥位固定；于頭背部中間處剪毛消毒后做長(zhǎng)2 cm縱切口，暴露前囟區(qū)，于右側(cè)的海馬CA3區(qū)鉆孔，海仁酸1.5 μg(濃度1 μg/μL)緩慢注入該區(qū)域，整個(gè)注射過程大約10 min, 停針約5 min后緩慢拔出注射器，并在注射區(qū)域及額竇置入電極，以502膠固定?？p合切口后外敷青霉素防感染，放回籠后，依照Racine分級(jí)辦法密切觀察大鼠的癲癇發(fā)作行為及腦電圖。假手術(shù)組模型建立方法同上，但在大鼠海馬CA3區(qū)域注射的是等量生理鹽水，術(shù)后腹腔注射青霉素防感染。

1.3.3 治療方法：灌胃給藥，假手術(shù)組及對(duì)照組均給予生理鹽水1 mL/d、實(shí)驗(yàn)組給予卡馬西平125 mg/kg、塞來昔布20 mg/kg，連續(xù)治療28 d后，處死大鼠。

1.4 癲癇點(diǎn)燃標(biāo)準(zhǔn)

本組根據(jù)Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判斷模型癲癇點(diǎn)燃情況：大鼠在術(shù)后30 min～6 h內(nèi)出現(xiàn)Ⅳ級(jí)以上的癇性行為，即被認(rèn)為是癲癇充分點(diǎn)燃或者點(diǎn)燃成功；將癇性行為的發(fā)作強(qiáng)度分為6個(gè)級(jí)別，分別為Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)、Ⅴ級(jí)、Ⅵ級(jí)。

1.5 觀察指標(biāo)

大鼠全部處死后選其腎臟組織、胃竇黏膜制成病理標(biāo)本，采用光鏡檢測(cè)、觀察，分析各組胃竇黏膜的病理學(xué)改變；取心臟血檢測(cè)凝血功能，計(jì)算國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值(INR)，并觀察血液中心肌損傷標(biāo)志物cTnT的表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠的存活情況

假手術(shù)組8只均存活，存活率100%; 對(duì)照組存活17只，存活率為56.67%; 試驗(yàn)組存活22只，存活率為73.33%。

2.2 各組大鼠胃竇黏膜病理學(xué)改變

假手術(shù)組與對(duì)照組大鼠胃竇黏膜均未見明顯病理學(xué)改變，實(shí)驗(yàn)組中僅有2例(6.67%)出現(xiàn)病理學(xué)改變，其中1例表現(xiàn)為胃竇黏膜炎細(xì)胞浸潤(rùn)，另1例表現(xiàn)為胃竇黏膜充血。3組胃竇黏膜病理學(xué)改變發(fā)生率無顯著差異(P>0.05)。3組大鼠的胃竇組織病理切片見圖1～3。

2.3 各組大鼠腎臟病理學(xué)改變情況

假手術(shù)組與對(duì)照組受檢模型的腎臟組織均無明顯的病理學(xué)病變，實(shí)驗(yàn)組1例(3.33%)出現(xiàn)腎小球細(xì)胞水樣變性，組間比較無顯著差異(P>0.05)。3組大鼠腎臟病理切片見圖4～6。

圖1 假手術(shù)組胃竇黏膜 HE 100倍

圖2 對(duì)照組胃竇黏膜 HE 100倍

圖3 實(shí)驗(yàn)組胃竇黏膜 HE 100倍

圖4 假手術(shù)組腎臟組織 HE 100倍

圖5 對(duì)照組腎臟組織 HE 100倍

圖6 實(shí)驗(yàn)組腎臟組織 HE 100倍

2.4 各組INR值及cTnT水平比較

各組治療后INR 值無顯著差異(P>0.05); 對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組cTnT水平顯著高于假手術(shù)組(P<0.01), 且實(shí)驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 各組INR值及cTnT水平比較

與假手術(shù)組比較，*P<0.05, **P<0.01;與對(duì)照組比較, ##P<0.01。

3 討 論

癲癇是臨床常見神經(jīng)系統(tǒng)疾病，卡馬西平是治療新診斷癥狀性部分性癲癇的一線藥物[4]。研究[5]表明，癲癇的炎性反應(yīng)與腦內(nèi)環(huán)氧化酶-2(COX-2)激活及前列腺素水平增高等密切相關(guān)，因此，COX-2抑制劑被逐漸應(yīng)用于抗癲癇治療。大量研究[6-7]表明，COX-2抑制劑可降低癇性發(fā)作的頻率及癲癇持續(xù)狀態(tài)的病死率。塞來昔布、伐地考昔、羅非昔布等均屬于COX-2抑制劑，但由于不同的COX-2抑制劑存在不同的代謝途徑、半衰期以及血漿蛋白結(jié)合率，因此，在臨床應(yīng)用中可能出現(xiàn)不同的不良反應(yīng)。當(dāng)前，塞來昔布是臨床應(yīng)用最普遍的COX-2抑制劑。Kim E[8]等對(duì)高血壓模型大鼠實(shí)施了塞來昔布與羅非昔布的對(duì)照試驗(yàn)，結(jié)果顯示塞來昔布在改善腎小球、腎臟CRP值、系膜硬化、防止巨噬細(xì)胞聚集等方面的作用顯著優(yōu)于羅非昔布組，但其在腎臟、凝血功能、心血管等方面的安全性，醫(yī)學(xué)界尚未有統(tǒng)一的意見[9]。

一項(xiàng)納入11008名關(guān)節(jié)炎患者的雙盲、隨機(jī)的試驗(yàn)表明，塞來昔布組的胃腸道不良反應(yīng)率與安慰劑組比較無顯著差異，但顯著低于萘普生組8倍[10]。本研究中，對(duì)3組模型大鼠分別進(jìn)行不同的治療，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組僅出現(xiàn)1例胃竇黏膜炎細(xì)胞浸潤(rùn)、1例胃竇黏膜壞死、1例腎小球細(xì)胞水樣變性，3組胃腸道及腎臟病理學(xué)改變發(fā)生率無顯著差異(P>0.05)，提示卡馬西平與塞來昔布聯(lián)合治療癲癇對(duì)模型大鼠胃腸道系統(tǒng)及腎臟組織無顯著不良影響。

研究表明，長(zhǎng)期聯(lián)用塞來昔布與華法林治療凝血功能障礙的患者，其INR水平較單用華法林者高，因此，臨床實(shí)施塞來昔布治療時(shí)，應(yīng)密切監(jiān)測(cè)患者凝血功能的變化。本組研究中, 3組INR值比較無顯著差異[11-13], 表明利用海仁酸點(diǎn)燃方式建立的癲癇模型未采取抗癲癇治療時(shí)大鼠凝血功能無明顯改變；馬西平聯(lián)合塞來昔布治療后也并未對(duì)大鼠凝血功能造成顯著不良反應(yīng)[14]。

現(xiàn)階段，國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界尚未對(duì)塞來昔布影響心肌細(xì)胞的程度形成統(tǒng)一的結(jié)論，但有實(shí)驗(yàn)研究[15]表明，低劑量塞來昔布可改善急性心肌缺血家兔的冠狀動(dòng)脈功能。本組研究中，對(duì)照組大鼠cTnT水平顯著高于假手術(shù)組，提示如未能及時(shí)對(duì)癲癇大鼠進(jìn)行抗癲癇治療，大鼠會(huì)出現(xiàn)明顯的心肌細(xì)胞損傷，原因可能是海仁酸點(diǎn)燃操作中，心肌細(xì)胞線粒體膜的通透性被極大改變，細(xì)胞呼吸作用的電子傳遞鏈被阻斷，從而出現(xiàn)心肌損害；同時(shí)，癲癇的多次反復(fù)發(fā)作，也可能造成心肌損傷；而實(shí)驗(yàn)組治療后cTnT水平顯著降低，提示聯(lián)合用藥后大鼠心肌損傷的程度得到顯著改善。

綜上所述[16], 對(duì)通過海仁酸快速點(diǎn)燃海馬建立的癲癇模型給予卡馬西平及塞來昔布聯(lián)合治療，并未對(duì)大鼠的胃腸道、腎臟、血液系統(tǒng)等產(chǎn)生明顯不良反應(yīng)，且可有效降低血液cTnT水平，對(duì)心肌具有一定保護(hù)作用。但這只是小樣本量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其具體作用還需臨床篩選大樣本病例進(jìn)一步研究。

[1] Prunetti P, Perucca E. New and forthcoming anti-epileptic drugs[J]. Current opinion in neurology, 2011, 24(2): 159.

[2] Lscher W. Critical review of current animal models of seizures and epilepsy used in the discovery and development of new antiepileptic drugs[J]. Seizure, 2011, 20(5): 359.

[3] Perucca P, Gilliam F G. Adverse effects of antiepileptic drugs[J]. The Lancet Neurology, 2012, 11(9): 792.

[4] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)腦電圖與癲癇學(xué)組. 抗癲癇藥物應(yīng)用專家共識(shí)[J]. 中華神經(jīng)科雜志, 2011, 44(1): 56.

[5] Sancho P, Martín-Sanz P, Fabregat I. Reciprocal regulation of NADPH oxidases and the cyclooxygenase-2 pathway[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2011, 51(9): 1789.

[6] 張遠(yuǎn)之,林智君. 托吡酯與卡馬西平治療部分性癲癇發(fā)作的臨床療效評(píng)價(jià)[D]. 海南醫(yī)學(xué), 2014, 25(2): 241.

[7] 張佳. COX-2及其抑制劑在大鼠癇性發(fā)作中的作用及其對(duì)大鼠認(rèn)知功能的影響[J]. 醫(yī)學(xué)綜述, 2012, 18(3): 357.

[8] Kim E. Raval Ap, Defazio R A, et al．Ischemic preconditioning via ep-silonn protein kinase C activation requires cyclooxygenase-2 activat-ion in vitro[J]. Neuroscience, 2007, 145(3): 931．

[9] Narasimha A, Watanabe J, Lin JA, et al．A novel anti-atherogenic rolefor COX-2-potential mechanism for the cardiovascular side effectsof COX-2 inhibitors[J]. prostaglandins Other Lipid Mediat, 2007, 84(12): 24.

[10] 張其梅, 夏杰, 張建宇. 卡馬西平對(duì)癲癇患者血同型半胱氨酸、葉酸、維生素B12水平的影響[J]. 海南醫(yī)學(xué), 2013, 24(1): 11.

[11] 侯小兵, 周銓, 王國(guó)福, 等. 癲癇術(shù)中致癇灶切除前后腦電監(jiān)測(cè)棘波減少的量化指標(biāo)[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 30(10): 2363.

[12] 周蘭華. 護(hù)理干預(yù)對(duì)提高成人癲癇患者生活質(zhì)量的效果觀察[J]. 實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志, 2010, 14(22): 58.

[13] Gage B F, Fihn S D, White R H. Management and dosing of warfarin therapy[J]. The American journal of medicine, 2000, 109(6): 481.

[14] 劉淑丹, 王晗知, 何揚(yáng)濤, 等. 氯化鋰-匹羅卡品致癇幼鼠成年后少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Olig2在腦白質(zhì)區(qū)的表達(dá)[J]. 華南國(guó)防醫(yī)學(xué), 2010, 3(24): 174.

[15] Zhao M, He X, Zhao M, et al. Low-dose celecoxib improves coronary function after acute myocardial ischaemia in rabbits[J]. Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology, 2012, 39(3): 233.

[16] 張伏龍. 氧化苦參堿對(duì)癲癇性腦損傷神經(jīng)元的保護(hù)作用[J]. 實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志, 2010, 14(19): 66.